一种益生菌的保存方法技术

本发明专利技术提供一种可以提高益生菌活力的菌种保存方法，属于食品微生物技术领域。该方法包括以下步骤：1.将益生菌菌种接种到合适的液体培养基，在适宜的条件下培养至对数生长期；2.将培养得到的益生菌悬浮液适当浓缩，或通过离心的方法收集菌体；3.将益生菌悬液或收集的菌体与灭菌后的微藻粉末按照一定的比例混合均匀；4.将益生菌与藻粉混合物在适当的条件下预培养2‑4小时；5.分装，密封后，直接置于适当的条件下保存或进行减压干燥，无菌包装后，保存于‑20℃‑40℃。该方法可以较好的保持益生菌细胞活力，显著提高保存物中活细胞的数量，很好地解决益生菌类食品和保健品生产中菌种保存存活率低、活力下降的问题，避免了菌种保存过程中化学保护剂的使用。

A method of preservation of probiotics

The invention provides a method for preserving the vitality of probiotics, which belongs to the field of food microbiological technology. The method comprises the following steps: 1. probiotic strains inoculated into suitable liquid medium under suitable conditions and cultured to logarithmic growth period; 2. will develop probiotic suspension right concentration obtained by centrifugal method, or collect the bacteria; 3. microalgae powder bacteria and probiotics sterilization suspension or collected in accordance with the a certain proportion of mixed evenly; 4. probiotics and algae powder mixture under appropriate conditions pre cultured for 2 4 hours; 5. packed, sealed, placed directly in the appropriate conditions for preservation or by vacuum drying, aseptic packaging, preserved in the 20 C 40 C. This method can be used to maintain the viability of probiotic, significantly improve the preservation number in living cells, a good solution of probiotic foods and health care products in the production of low survival rate, preservation activity decreased, avoid the preservation process. The use of chemical protective agent.

【技术实现步骤摘要】
一种益生菌的保存方法
属于微生物
，涉及一种益生菌的保存方法。
技术介绍
益生菌是一种通过改善肠道微生物平衡，从而对宿主施加有益影响的微生物添加物。研究发现，益生菌在调节肠道菌群结构，增强机体免疫力，降低胆固醇，消除致癌因子等方面都有很大的生理功效，同时对糖尿病，高血压，高血脂等一些疾病的防治有重要的意义。而且，如今面对环境问题，生活方式以及食品卫生问题给人们健康带来的隐患，益生菌在维持健康，减少患病危险等方面都有巨大的潜力，这使得益生菌在食品、生物医药制品等多种领域得到了越来越广泛的应用。目前国内益生菌制品主要以发酵型酸奶、乳制品为主，其他种类的益生菌产品也越来越多，但益生菌产品要保证其良好的功效，首先要保证其活菌数目高，且存活时间长，而这正是许多益生菌产品所需要解决的问题。目前益生菌的保存方法主要有传代保存，冷冻保存，冷冻干燥保存，以及液体石蜡覆盖保存等。到目前为止，涉及到益生菌保存的文献资料主要有申请号为201180039892.0、201610632749.7和201710311930.2的专利及2篇论文“液态条件下乳酸菌保存方法研究进展”和“植物乳杆菌高活力保存方法的研究及其应用”中提到的相关技术和方法。其中专利201610632749.7主要涉及食品制造及保鲜领域提高盐渍食用菌产品口感和保护营养成分的制备工艺；专利201180039892.0公开了一种利用乳杆杆菌Lb2132、lbc-82、LC-10、Lpc-37和Lr-32提高含有嗜酸乳杆菌La-14和NCFM亚种或双歧杆菌HN019和Bl-04的，初始pH值为4.2的酸奶在储藏期间嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的存活率；专利201710311930.2公开了一种利用复杂的梯度降温技术酸奶制品中肠道益生菌的保存方法，这些虽然涉及到益生菌的保存技术，但应用范围局限于酸奶制品及酸奶发酵生产菌种。文献“液态条件下乳酸菌保存方法研究进展”主要介绍了乳酸菌保存中常用的传代法、干燥法、冷冻及冷冻干燥法，并认为冷冻干燥法是较有优势的乳酸菌保种方法，但也存在低温下冰晶产生导致的细胞膜、质损伤等，影响菌种活力。文献“植物乳杆菌高活力保存方法的研究及其应用”研究了4℃低温保存法、36℃烘干常温保存法和阳离子活性载体保存法用于植物乳杆菌保存，其中前两种保存方法菌种活力在15天左右几乎全部丧失，阳离子活性载体添加麸皮则可以保存菌种活力达2个月，该方法有一定的实用价值，但在研究和生产实践中，对于性状优良的菌种或其突变株，往往希望能够更长时间的保存，以维持其优良性状；此外，阳离子活性载体属天然矿物质，将其应用于益生菌保种的安全性和可靠性仍需进一步研究。专利CN00100322.4公开了一种通过在培养基中添加至少一种或多种有气味的硫化合物、有气味的氮化合物或有气味的碳化合物，从而有效保护乳酸杆菌Lactobacillusclearans降低有气味和有害物质特性的培养方法；并提供了至少一种或多种的含硫氨基酸、卵清蛋白、胆汁粉、海藻糖、棉子糖、死的酵母细胞、小球藻、米糠、糠、大豆奶和胡萝卜汁，以作为保存乳酸杆菌Lactobacillusclearans的保存剂，以提高保存物滴度。除上述保护剂外，在保存乳酸杆菌Lactobacillusclearans时还需要添加氨基酸类如谷氨酸等、维生素类如维生素C等、矿物质类如锰等、含硫化合物类如硫化钠等以及其他多种有机物质如氨水、甲基吲哚、甲胺、二甲胺、甲酸、乙酸、甲醛、乙醛、酚、丁醇等其中的至少一种或多种；此外，仍需再添加至少一种或多种来自动物的脱脂奶粉、卵清蛋白、乳糖、肝脏抽提粉、血清以及至少一种或多种来自植物的豆浆、海藻糖棉子糖、苜蓿汁等作为保护剂，保存剂中涉及了较多种类外源添加的碳源、氮源及多种有机物等，对于常规研究和生产过程中菌种的保存，无疑增加了操作复杂性和成本，同时也增加了杂菌污染的几率。传统的低温菌种保藏法虽对大多数菌种普遍适用，但需要添加相应的化学保护剂，如甘油和二甲基亚砜等，菌种活力易受到影响，且步骤繁琐，杂菌污染几率大。为解决上述益生菌保存中的难题，本专利技术公开了一种以可食用微藻为单一原料的益生菌种保存方法。微藻是一类分布极广，营养丰富的低等水生植物。微藻细胞中通常含有丰富的蛋白质，多糖，类胡萝卜素等高营养成分，这使得它在医药食品领域具有很大的应用价值。本专利技术的优势在于保存原料为可食用微藻，安全可靠，成本低廉，操作简单，而且可以显著提高益生菌的存活率和细胞活力。
技术实现思路
为了克服现有益生菌保种技术中存活率低、细胞活力不高及操作步骤和保存剂复杂等不足，本专利技术提供一种益生菌的保存方法，该方法以可食用微藻粉作为单一保存剂，具有较高的营养价值，不添加任何有害化学物质，可最大程度保持益生菌的纯净和安全性；同时本专利技术原料易得，步骤简单，操作方便，避免了程序降温仪等昂贵的保种设备，既适合一般实验室研究开发目的，对于食品行业生产加工中涉及的益生菌种的保存也同样适用。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种益生菌的保存方法，包括：(1)将培养至对数生长期益生菌菌种悬浮液浓缩，或离心、收集菌体；(2)将益生菌悬液或收集的菌体与灭菌后的微藻粉末混合均匀，预培养；(3)分装，密封后，置于适当的条件下保存；或分装后经过减压干燥后，保存于-20℃-40℃。本申请研究发现：采用藻株微藻粉作为单一保存剂，若要获得较优的益生菌保存效果，必须保证菌株与微藻的对应性，使微藻中所含的营养成分能够适宜于特定菌株的活力维持需要。因此，优选的，所述益生菌包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、拉曼乳杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、卵形双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌中的一种或几种。优选的，所述微藻粉末为螺旋藻、念珠藻葛仙米、雨生红球藻、裸藻中的一种或几种。特别地，若将嗜酸乳杆菌保存在葛仙米粉末中，不仅可以获得较高的细菌的存活率和细胞活力，还能提高嗜酸乳杆菌在高温下的耐受性。优选的，将嗜酸乳杆菌保存在葛仙米粉末中，将保加利亚乳杆菌保存在螺旋藻粉末中。优选的，所述微藻粉末的灭菌方法为辐照灭菌法，包括紫外线、χ-射线或γ-射线辐照。优选的，所述益生菌和微藻粉末的混合物中益生菌活菌数量在1.0×104-1.0×107cfu/mg干重。优选的，所述预培养时间为2-4小时。优选的，所述干燥温度为0℃-20℃。优选的，所述的保存的益生菌和微藻粉末的混合物为益生菌悬液与微藻直接混合的液体混合物，或菌体与微藻粉混合后经过干燥制成的干粉。本专利技术还提供了任一项上述的方法制备的益生菌的保存物。本专利技术还提供了微藻干粉在益生菌保存中的应用。本专利技术的有益效果(1)本专利技术利用微藻粉末较好的吸湿性，快速、温和地脱去益生菌细胞内部的水分，延缓益生菌细胞内的代谢活动，从而达到长时间保存细胞的目的；同时微藻含有的丰富的蛋白质、多糖、微量元素等营养成分可为益生菌细胞的活力维持提供充足的营养物质，提高保存期内细胞的活力；(2)该保存方法具有较强的温度适应性，适合多种目的的菌种保存。本专利技术的保存方法步骤简单，易操作，且较好地解决了益生菌种保存中存活率低、细胞活力低等问题。此外，本专利技术方法不涉及化学添加剂，尤其适合食品生产行业中益生菌的保种；(3)本专利技术制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种益生菌的保存方法，其特征在于，包括：(1)将培养至对数生长期益生菌菌种悬浮液浓缩，或离心、收集菌体；(2)将益生菌悬液或收集的菌体与灭菌后的微藻粉末混合均匀，预培养；(3)分装，密封后，置于适当的条件下保存；或分装后经过减压干燥后，保存于‑20℃‑40℃。

【技术特征摘要】
1.一种益生菌的保存方法，其特征在于，包括：(1)将培养至对数生长期益生菌菌种悬浮液浓缩，或离心、收集菌体；(2)将益生菌悬液或收集的菌体与灭菌后的微藻粉末混合均匀，预培养；(3)分装，密封后，置于适当的条件下保存；或分装后经过减压干燥后，保存于-20℃-40℃。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述益生菌包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、拉曼乳杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、卵形双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌中的一种或几种。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微藻粉末为螺旋藻、葛仙米、雨生红球藻、裸藻中一种或几种。4.如权利要求1所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，段超，刘永梅，
申请(专利权)人：青岛藻蓝生物有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37