用于检测奶牛乳房炎6种传染性病原体的LAMP引物组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测奶牛乳房炎6种传染性病原体的LAMP引物组合及其应用。本发明专利技术首先提供了一种引物组合，由序列1至序列36所示的36种DNA分子组成。所述引物组合可应用于检测待测菌是否为牛支原体、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、酿脓链球菌、牛棒状杆菌或表皮葡萄球菌，可应用于检测待测样本中是否含有牛支原体和/或金黄色葡萄球菌和/或无乳链球菌和/或酿脓链球菌和/或牛棒状杆菌和/或表皮葡萄球菌。本发明专利技术提供的引物组合鉴定用于检测奶牛乳房炎6种传染性病原体，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明专利技术具有重大的推广价值。

LAMP primer combination and its application for detecting 6 infectious pathogens of dairy cow mastitis

The invention discloses a LAMP primer combination for detecting 6 infectious pathogens of dairy cow mastitis and its application. The invention first provides a primer combination consisting of 36 DNA molecules shown in sequence 1 to sequence 36. The primer combinations can be used in detecting whether the bacterium Mycoplasma bovis, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Corynebacterium bovis or Staphylococcus epidermidis, can be used for detecting if the samples containing bovine mycoplasma and / or Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae and / or / or Streptococcus pyogenes and / or Corynebacterium bovis and / or Staphylococcus epidermidis. The primer combination provided by this invention is used to detect 6 infectious pathogens of cow mastitis. It has high specificity and high sensitivity, and it can realize simple, rapid and accurate detection. The invention has great popularization value.

【技术实现步骤摘要】
用于检测奶牛乳房炎6种传染性病原体的LAMP引物组合及其应用
本专利技术涉及一种用于检测奶牛乳房炎6种传染性病原体的LAMP引物组合及其应用。
技术介绍
奶牛乳房炎是乳区泌乳组织的炎症，通常由细菌感染造成，发病于一到多个乳区，导致产奶量减少，停止产奶，牛奶品质改变。奶牛乳房炎每年影响25-50％的奶牛，是奶牛养殖损失最大的疾病。奶牛乳房炎由多种非特定的病原微生物引起，目前已发现的约有150多种(包括球菌、杆菌、支原体、真菌或酵母菌、病毒等)，其中较为常见的可分为传染性病原体和非传染性病原体。据报道，全球每年因奶牛乳房炎造成的损失，美国20亿美金，英国2.67亿，日本5亿美元，我国30亿元。平均每个病例损失约200美元左右(约合1200元)，损失主要来自产奶量下降和使用抗生素导致的废弃奶，占到总损失的70％。目前检验检疫工作中用于检测和鉴定细菌方法主要有传统的分离培养法、PCR、SouthernBlot杂交、酶联免疫吸附法(ELISA)等简单的分子生物学和免疫学方法。传统的分离培养、形态观察、生理生化、选择培养基等检测病原菌的方法存在灵敏度低、特异性差、工作量大、耗时长、通量低等显著特点。微生物培养法，耗时长需要3-4d出检测报告，不能满足及时的针对病原体治疗牛乳房炎的目的。免疫学技术(如ELISA)灵敏度高，但容易污染，经常出现假阳性。通常采用一种病原菌一种特异性引物的特定病原体检查的引物特异性PCR技术，虽然可以达到对单一菌的快速、正确和方便的诊断目的，但在病原菌未名时，需要多种不同引物进行试验，这对于病原菌的复杂性和PCR程序的多样性来说显然不够理想。PCR存在检测时间长、易污染、假阳性率高的缺点,使其应用受到限制。以上这些用于病原微生物检测的技术和方法都存在诸多技术问题，而且在实际中由于病原微生物种类繁多，上述方法很难同时对多种病原微生物进行高效的检测。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测奶牛乳房炎6种传染性病原体的LAMP引物组合及其应用。本专利技术首先提供了一种引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ、引物组Ⅲ、引物组Ⅳ、引物组Ⅴ和引物组Ⅵ组成；(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ和所述引物组Ⅵ中的任意两个、任意三个、任意四个或任意五个组成；(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ或所述引物组Ⅵ。所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成；所述引物Ⅰ-F3为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-B3为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-FIP为如下(b5)或(b6)；(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-BIP为如下(b7)或(b8)；(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LF为如下(b9)或(b10)；(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LB为如下(b11)或(b12)；(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成；所述引物Ⅱ-F3为如下(c1)或(c2)；(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-B3为如下(c3)或(c4)；(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-FIP为如下(c5)或(c6)；(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-BIP为如下(c7)或(c8)；(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LF为如下(c9)或(c10)；(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LB为如下(c11)或(c12)；(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子。所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ-F3、引物Ⅲ-B3、引物Ⅲ-FIP、引物Ⅲ-BIP、引物Ⅲ-LF和引物Ⅲ-LB组成；所述引物Ⅲ-F3为如下(d1)或(d2)；(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-B3为如下(d3)或(d4)；(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-FIP为如下(d5)或(d6)；(d5)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(d6)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-BIP为如下(d7)或(d8)；(d7)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(d8)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-LF为如下(d9)或(d10)；(d9)序列表的序列17所示的单链DNA分子；(d10)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-LB为如下(d11)或(d12)；(d11)序列表的序列18所示的单链DNA分子；(d12)将序列18经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列18具有相同功能的DNA分子。所述引物组Ⅳ由引物Ⅳ-F3、引物Ⅳ-B3、引物Ⅳ-FIP、引物Ⅳ-BIP、引物Ⅳ-LF和引物Ⅳ-LB组成；所述引物Ⅳ-F3为如下(e1)或(e2)；(e1)序列表的序列19所示的单链DNA分子；(e2)将序列1本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ、引物组Ⅲ、引物组Ⅳ、引物组Ⅴ和引物组Ⅵ组成；(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ和所述引物组Ⅵ中的任意两个、任意三个、任意四个或任意五个组成；(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ或所述引物组Ⅵ；所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ‑F3、引物Ⅰ‑B3、引物Ⅰ‑FIP、引物Ⅰ‑BIP、引物Ⅰ‑LF和引物Ⅰ‑LB组成；所述引物Ⅰ‑F3为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑B3为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑FIP为如下(b5)或(b6)；(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑BIP为如下(b7)或(b8)；(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑LF为如下(b9)或(b10)；(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑LB为如下(b11)或(b12)；(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ‑F3、引物Ⅱ‑B3、引物Ⅱ‑FIP、引物Ⅱ‑BIP、引物Ⅱ‑LF和引物Ⅱ‑LB组成；所述引物Ⅱ‑F3为如下(c1)或(c2)；(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑B3为如下(c3)或(c4)；(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑FIP为如下(c5)或(c6)；(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑BIP为如下(c7)或(c8)；(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑LF为如下(c9)或(c10)；(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑LB为如下(c11)或(c12)；(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ‑F3、引物Ⅲ‑B3、引物Ⅲ‑FIP、引物Ⅲ‑BIP、引物Ⅲ‑LF和引物Ⅲ‑LB组成；所述引物Ⅲ‑F3为如下(d1)或(d2)；(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑B3为如下(d3)或(d4)；(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑FIP为如下(d5)或(d6)；(d5)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(d6)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑BIP为如下(d7)或(d8)；(d7)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(d8)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑LF为如下(d9)或(d10)；(d9)序列表的序列17所示的单链DNA分子；(d10)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑LB为如下(d11)或(d12)；(d11)序列表的序列18所示的单链DNA分子；(d12)将序列18...

【技术特征摘要】
2016.06.29 CN 20161050010521.引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ、引物组Ⅲ、引物组Ⅳ、引物组Ⅴ和引物组Ⅵ组成；(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ和所述引物组Ⅵ中的任意两个、任意三个、任意四个或任意五个组成；(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ或所述引物组Ⅵ；所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成；所述引物Ⅰ-F3为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-B3为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-FIP为如下(b5)或(b6)；(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-BIP为如下(b7)或(b8)；(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LF为如下(b9)或(b10)；(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LB为如下(b11)或(b12)；(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成；所述引物Ⅱ-F3为如下(c1)或(c2)；(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-B3为如下(c3)或(c4)；(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-FIP为如下(c5)或(c6)；(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-BIP为如下(c7)或(c8)；(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LF为如下(c9)或(c10)；(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LB为如下(c11)或(c12)；(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ-F3、引物Ⅲ-B3、引物Ⅲ-FIP、引物Ⅲ-BIP、引物Ⅲ-LF和引物Ⅲ-LB组成；所述引物Ⅲ-F3为如下(d1)或(d2)；(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-B3为如下(d3)或(d4)；(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-FIP为如下(d5)或(d6)；(d5)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(d6)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-BIP为如下(d7)或(d8)；(d7)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(d8)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-LF为如下(d9)或(d10)；(d9)序列表的序列17所示的单链DNA分子；(d10)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-LB为如下(d11)或(d12)；(d11)序列表的序列18所示的单链DNA分子；(d12)将序列18经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列18具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅳ由引物Ⅳ-F3、引物Ⅳ-B3、引物Ⅳ-FIP、引物Ⅳ-BIP、引物Ⅳ-LF和引物Ⅳ-LB组成；所述引物Ⅳ-F3为如下(e1)或(e2)；(e1)序列表的序列19所示的单链DNA分子；(e2)将序列19经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列19具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅳ-B3为如下(e3)或(e4)；(e3)序列表的序列20所示的单链DNA分子；(e4)将序列20经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列20具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅳ-FIP为如下(e5)或(e6)；(e5)序列表的序列21所示的单链DNA分子；(e6)将序列21经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列21具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅳ-BIP为如下(e7)或(e8)；(e7)序列表的序列22所示的单链DNA分子；(e8)将序列22经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列22具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅳ-LF为如下(e9)或(e10)；(e9)序列表的序列23所示的单链DNA分子；(e10)将序列23经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列23具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅳ-LB为如下(e11)或(e12)；(e11)序列表的序列24所示的单链DNA分子；(e12)...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岩，王玉，邢婉丽，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11