通过各成分基本上同时孵育和通用载体以分离细胞制造技术

本发明专利技术提供了靶向生物体的快速和有效的分离方法。

The cells are basically incubated at the same time with the universal carrier to separate the cells

The present invention provides a fast and effective method for separating the target organisms.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过各成分基本上同时孵育和通用载体以分离细胞与相关申请的交叉引用本申请将作为优先申请列入35U.S.C.119(e)部分，从前的临时申请(美国申请号621121,259，2015年2月26日提交；621157,601，2015年5月6日提交；621174,687filedJune12,2015年6月12日提交)均以参考文献的形式参与本文。
本专利技术是关于改进标记和/或分离靶物体的技术，用大小不同的粒子，如磁性纳米粒子，结合于感兴趣的物体，使之可以合适的方法被进一步修饰或提取。本专利技术同时也相关于改进和简化间接标记的分离过程，间接标记分离是指细胞或其它物体首先用特异分子比如抗体标记，然后再用通用载体颗粒标记，后者则与已同细胞结合的抗体联接。本专利技术公开了改进标记分离过程的新方法，使其容易操作，节省时间，并因为减少了所用试剂而显著降低了消耗。此外，本方法也可应用于要求较少步骤的自动分离过程。
技术介绍
为了方便描述本专利技术所属的技术，我们引用了一些文献和专利文件，以参考文献的方式并入本文。目前有许多制造、分析以及实验室的方法和流程涉及特异结合体系的相互作用。很多实验室和临床检验都本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种形成生物共轭物的方法，所述方法包括：(i)基本上同时在生物相容性培养基中组合(a)具有至少一种特征决定簇的靶生物，(b)至少一种靶向剂，每种靶向剂包含多个结合单元，每个结合单元至少有一个结合位点和一个识别位点，所述的靶向剂可有效地通过至少一个结合位点特异结合于靶生物的至少一个决定簇，以产生标记的靶向生物体，和(c)纳米颗粒标记载体，其具有至少一个结合部位可特异地结合于标记生物体的至少一个识别位点，从而形成生物缀合物，由于所述的纳米颗粒标记载体的物理性能使所形成的生物缀合物可以与培养基分离。所述的靶向剂每个结合单元具大约有1－10个识别位点，每个纳米颗粒标记载体有约1,000－8,000个结...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.26 US 62/121,259;2015.04.15 US 62/148,133;1.一种形成生物共轭物的方法，所述方法包括：(i)基本上同时在生物相容性培养基中组合(a)具有至少一种特征决定簇的靶生物，(b)至少一种靶向剂，每种靶向剂包含多个结合单元，每个结合单元至少有一个结合位点和一个识别位点，所述的靶向剂可有效地通过至少一个结合位点特异结合于靶生物的至少一个决定簇，以产生标记的靶向生物体，和(c)纳米颗粒标记载体，其具有至少一个结合部位可特异地结合于标记生物体的至少一个识别位点，从而形成生物缀合物，由于所述的纳米颗粒标记载体的物理性能使所形成的生物缀合物可以与培养基分离。所述的靶向剂每个结合单元具大约有1－10个识别位点，每个纳米颗粒标记载体有约1,000－8,000个结合部位，所述纳米颗粒标记载体上结合部位的数目比培养基中靶向剂所有结合单位上的识别位点的平均总数目至少大两倍；和(ii)使包含所述靶生物，靶向剂和纳米颗粒标记载体的培养基保持可有效促进生物缀合物形成的温度和时间的温育条件，所述温度在0－44℃范围内，所述时间在3－30分钟。2.根据权利要求1的方法，其中所述靶生物选自真核细胞、原核细胞、细胞成分、病毒和蛋白质。3.根据权利要求1的方法，其中所述靶向剂包含至少一种可特异结合于所述靶生物特征决定簇的抗体。4.根据权利要求3的方法，其中所述抗体是单克隆抗体(mAb)。5.根据权利要求3的方法，其中所述抗体是特异性结合对的成员，所述纳米颗粒标记载体是所述特异性结合对的另一个成员，所述生物缀合物的形成源于此特异性结合对成员之间的结合。6.根据权利要求1的方法，其中混合培养在孵育条件下一步完成。7.根据要求1所述的方法，其中所述纳米颗粒标记载体包括磁响应材料。8.根据权利要求7所述的方法，还包括将所述培养物置于磁场梯度以引起所述生物缀合物的聚集。9.根据权利要求8所述的方法，还包括终止所述培养物暴露于所述磁场梯度，然后将所述聚集的生物共轭物重新分散在培养基中。10.根据权利要求1的方法，其中所述标记载体包含荧光物质。11.根据要求1所述的方法，其中所述的培养基有预定密度，并且所述标记载体包括密度不同于所述预定密度的材料。12.根据权利要求11，其中所述的标载体的密度高于所述的预定密度。13.根据权利要求11，其中所述的标记载体的密度低于所述的预定密度。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述的靶生物包含真核细胞，在所述培养基中的浓度为5至1×108细胞/ml。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶生物选自外周血细胞和骨髓细胞群和亚群，有CD34+干细胞、CD3+T细胞、CD4+T辅助细胞、CD8+T细胞毒细胞、CD19+B细胞、CD14+单核细胞、CD15+粒细胞、CD56+自然杀伤细胞以及循环肿瘤细胞。16.以权利要求15所述的方法，其中所述靶生物选自CD34+干细胞、CD3+T细胞、CD4+T辅助细胞、CD8+T杀伤细胞、CD56+自然杀伤细胞和循环肿瘤细胞。17.根据权利要求1的方法，其中所述靶向剂选自针对CD34、CD3、CD4、CD8、CD19、CD14、CD15、CD20、CD22、CD24、CD28、CD56、EPCAM、波形蛋白和乳腺球蛋白的组。18.根据权利要求17的方法，其中所述靶向剂选自靶向CD34、CD3、CD4、CD8和CD56的组。19.根据权利要求1的方法，其中所述纳米颗粒标记载体的结合区域选自亲和素、链霉亲和素、中性亲和素、抗小鼠Fc、抗小鼠IgG1、蛋白A、蛋白G、抗－藻红蛋白(PE)和抗－异硫氰酸荧光素(FITC)。20.根据权利要求19，其中所述纳米颗粒标记载体的所述结合区域选自亲和素、链霉亲和素、中性亲和素、抗小鼠IgG1。21.根据权利要求1的方法，其中所述生物缀合物由CD3+细胞(T细胞)、包含抗CD3+mAb的靶向剂、和标记载体组成，标记载体包含与抗-Fc抗体结合的纳米颗粒。22.根据权利要求21，还包括将所述物质暴露于磁场梯度以引起所述生物共轭物的聚集。23.根据权利要求22所述，还包括终止所述物质暴露于所述磁场梯度，...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·A·利博迪，托多尔·R·克里斯托弗，
申请(专利权)人：生物磁溶液有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US