一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法。首先，通过ＤＮＡ重组技术将具有广谱转化效应的细胞永生化基因－猿猴病毒４０大Ｔ抗原（ＳＶ４０Ｔ）基因定向插入逆转录病毒载体中，构建重组表达载体；然后，将重组载体与包装质粒ｐＶＳＶ－Ｇ共转染ＧＰ－２９３细胞，制备携带ＳＶ４０Ｔ基因的重组泛嗜性逆转录病毒颗粒；所获得的重组泛嗜性逆转录病毒即为通用的整合型细胞永生化载体。该永生化载体能进入所有类型的动物细胞，并将所携带的ＳＶ４０Ｔ基因整合到处于分裂期的靶细胞的基因组中，使其得到可遗传的、稳定的表达，从而保证了靶细胞的高效永生化转化。本发明专利技术为各种动物细胞的转基因永生化建系研究提供了一种有效的手段。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法，其步骤包括：（１）以猿猴病毒４０基因组或携带有ＳＶ４０大Ｔ抗原基因的质粒为模板，ＰＣＲ扩增ＳＶ４０Ｔ基因，ＳＶ４０Ｔ基因序列如序列表中ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ．１或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ．２所示；（２）通过ＤＮＡ重组技术将ＳＶ４０Ｔ基因定向插入逆转录病毒载体的多克隆位点，构建携带ＳＶ４０Ｔ基因的重组逆转录病毒载体；（３）将步骤（２）得到的重组载体与包装质粒ｐＶＳＶ－Ｇ共转染ＧＰ－２９３细胞，培养４８－７２小时后收获含有重组病毒颗粒的细胞上清液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡国斌，王丹，宋珊珊，王锡亮，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]