The invention relates to a simple low endotoxin Bauman real coli capsular polysaccharide extraction method, belonging to the technical field of preparation of biological materials; the method of the invention firstly uses the lysate and ultrasonic method to break Bauman Acinetobacter, then use CTAB solution first remove bacteria endotoxin lipopolysaccharide, respectively using 25% ethanol and 80% ethanol precipitation has been obtained Bauman Acinetobacter capsular polysaccharide, lipopolysaccharide and nucleic acid to further remove impurities, finally obtaining low endotoxin content of Bauman Acinetobacter capsular polysaccharide; the invention establishes a set of simple, fast and cheap Bauman real coli capsular polysaccharide extraction method, the endotoxin is low. Can be used for in vivo studies.
【技术实现步骤摘要】
一种简便的低内毒素鲍曼不动杆菌荚膜多糖提取方法
本专利技术涉及一种简便的低内毒素鲍曼不动杆菌荚膜多糖提取方法,属于生物材料制备
技术介绍
鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)是引起医院内感染的主要病原菌,可引起患者呼吸机相关性肺炎、泌尿道感染、脓毒血症等多系统感染。曾经的鲍曼不动杆菌并不被临床医生所重视,但随着近年来临床分离多重耐药和泛耐药鲍曼不动杆菌比例的明显升高,加之该菌具有强大的获得耐药性和克隆传播能力,目前鲍曼不动杆菌已成为在全球范围内广泛流行并呈现高度耐药的常见致病菌。由于多重耐药和泛耐药鲍曼不动杆菌感染的普遍性,以及新的有效抗菌药物研发的迟滞,仅依靠抗生素治疗已无法有效控制临床鲍曼不动杆菌的感染,而通过增强人体自身免疫力改善机体的免疫状态进来达到治疗的目,是对现有抗生素治疗方案的一种有效补充。鲍曼不动杆菌是目前临床最严重的医院内感染病原体之一,其耐药性也非常严重,单独依靠现有抗生素已无法满足临床需求,急需一种安全有效的疫苗提高人体在抵御鲍曼不动杆菌感染能力,或与抗生素联合使用提高患者治愈率。荚膜是带荚膜细菌的主要毒力因子之一,在细菌逃避人体的非特异性防御中发挥重要作用。同时,荚膜也是特异性免疫反应的保护性抗原,是细菌结构变化最少的表面抗原,具有较好的免疫原性,是最适宜做疫苗成份的靶抗原之一。现已有流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒沙门菌和肺炎链球菌等多种细菌荚膜多糖产品,此类细菌荚膜多糖免疫刺激性强,副作用小,在临床使用中发现可以有效地调节、增强和恢复人体免疫力,提高人体抗感染的能力。但目前尚未见有鲍曼不动杆菌荚 ...
【技术保护点】
一种简便的低内毒素鲍曼不动杆菌荚膜多糖提取方法,其特征在于,所述方法按照如下步骤进行:(1)细菌培养:在羊血琼脂平板上培养鲍曼不动杆菌;(2)细菌收集:离心收集菌体沉淀,弃去上清,细菌沉淀中加细菌裂解液;(3)破碎菌体:超声法破裂鲍曼不动杆菌,得到细菌裂解上清液;(4)去除内毒素:在将细菌裂解上清液中加入适量CTAB溶液,充分搅拌混匀后,室温下静置以形成沉淀;离心收集沉淀;向沉淀物中加入CaCl2溶液,使用电磁搅拌仪搅拌直至沉淀重新溶解,离心收集上清液;(5)沉淀荚膜多糖:在上清液中加入乙醇,4℃中静置过夜,离心收集上清;次日在上清液中加入冰上预冷的乙醇,在室温下充分混匀使荚膜多糖沉淀,离心收集荚膜多糖沉淀,使用无水乙醇洗涤荚膜多糖沉淀,即得鲍曼不动杆菌荚膜多糖。
【技术特征摘要】
1.一种简便的低内毒素鲍曼不动杆菌荚膜多糖提取方法,其特征在于,所述方法按照如下步骤进行:(1)细菌培养:在羊血琼脂平板上培养鲍曼不动杆菌;(2)细菌收集:离心收集菌体沉淀,弃去上清,细菌沉淀中加细菌裂解液;(3)破碎菌体:超声法破裂鲍曼不动杆菌,得到细菌裂解上清液;(4)去除内毒素:在将细菌裂解上清液中加入适量CTAB溶液,充分搅拌混匀后,室温下静置以形成沉淀;离心收集沉淀;向沉淀物中加入CaCl2溶液,使用电磁搅拌仪搅拌直至沉淀重新溶解,离心收集上清液;(5)沉淀荚膜多糖:在上清液中加入乙醇,4℃中静置过夜,离心收集上清;次日在上清液中加入冰上预冷的乙醇,在室温下充分混匀使荚膜多糖沉淀,离心收集荚膜多糖沉淀,使用无水乙醇洗涤荚膜多糖沉淀,即得鲍曼不动杆菌荚膜多糖。2.根据权利要求1所述的一种简便的低内毒素鲍曼不动杆菌荚膜多糖提取方法,其特征在于,步骤(4)中所述的CTAB溶液的质量浓度为10%,所述细菌裂解液中加入CTAB溶液后使CTAB最终溶液为1%。3.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴亮,王廷廷,陈盛霞,阴晴,姜旭淦,卢叶,
申请(专利权)人:江苏大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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