一种检测白酒中80种农药残留量的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用超高效液相色谱‑四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱同时测定白酒中80种农药残留量的快速检测方法，其特征在于80种农药包含有机磷类、氨基甲酸酯类、除草剂类、杀菌剂类、杀虫剂类，共计5个种类农药，白酒样品经过氮吹去除乙醇，乙腈定容，冷冻离心后取上清液，用微孔滤膜过滤，收集滤液进入超高效液相色谱‑四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱进行分析测定。该方法与传统的检测方法相比，具有对农药种类覆盖面广、前处理方法简便、使用有机溶剂少、检测灵敏度高的优点。

A method for the detection of 80 kinds of pesticide residues in liquor

The invention discloses an ultra performance liquid chromatography / quadrupole Orbitrap high resolution mass spectrometry determination method for rapid detection of pesticide residues in 80 kinds of liquor, which is characterized in that 80 pesticides including organophosphorus, carbamate, herbicide, fungicide, insecticide, a total of 5 a kind of pesticide, liquor samples after removal of nitrogen blowing volume of ethanol, acetonitrile, frozen after centrifugation, supernatant, with micropore filter, the filtrate was collected into the ultra high performance liquid chromatography / quadrupole Orbitrap high resolution mass spectrometry analysis determination. Compared with the traditional detection methods, the method has the advantages of wide coverage of pesticides, simple pretreatment, less organic solvents and high detection sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种检测白酒中80种农药残留量的方法
本专利技术属于农药残留分析检测
，尤其涉及一种运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱同时测定白酒中80种农药残留量的方法。
技术介绍
农药残留(Pesticideresidues)，是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体、收获物、土壤、水体、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。粮食作物在种植的过程中不可避免的使用到除草剂、植物生长调节剂、杀虫剂、杀螨剂和杀菌剂等农药，这些农药最终可能残留在粮食中。白酒以高粱、小麦等淀粉质粮食为主要原料经发酵、蒸馏、勾兑、存储而成。含有农药的酿酒原料在蒸馏过程中，溶于酒精中的农药可能一起被蒸馏带出，最终残留于白酒中，对人身体健康有潜在的威胁。对食品中农药残留的控制，要求分析方法快速、准确、有效、灵敏度高、选择性好。显然，多种农药残留的分析方法可对不同种类、不同极性和不同化学性质的多种农药一次进样完全分析，缩短分析时间，提高检测效率。在多种农药残留分析中，使用最多的方法即色谱-质谱联用，包括用GC或LC进行分离，用质谱仪进行定性定量检测。白酒中农药残留检测多采用GC-MS或LC-MS方法，王蓉等运用LC-MS及GC-MS分别分析白酒中5种有机磷和8种有机氯农药，方法灵敏度高，但是前处理复杂，耗时长，而且每次检测农残种类较为单一。由于白酒是一种高乙醇含量的复杂饮料，其前处理多采用去除乙醇的基础上进一步净化或液液萃取法，导致样品前处理较为复杂，有机溶剂使用量较大。
技术实现思路
鉴于国内外无针对白酒中多种农药残留限量标准、检测标准及现有白酒中多种农药残留技术的不足，本专利技术目的旨在于克服现有技术缺陷，简化样品前处理方法，缩短样品分析时间，从而提供一种一针进样，同时分析白酒中包含有机磷类、氨基甲酸酯类、除草剂类、杀菌剂类、杀虫剂类5个种类共计80种农药的超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱测定方法，该方法准确度高，重现性好，适用范围更广的多种农药残留同时检测。为了实现本专利技术的目的，专利技术人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了如下检测白酒中多种农药残留的技术方案，该方案具体包括以下步骤：(1)、取样：如移取1.0mL白酒样品于2mL的刻度离心管中；(2)、氮吹：25℃以下氮吹至乙醇全部去除；(3)、定容：用质谱纯乙腈将氮吹好的样品定容到1.0mL；(4)、混匀：定容后的样品在漩涡振荡仪器上2000～6000rpm混匀2～5min；(5)、离心：混匀后的样品在4℃，6000～12000rpm，离心5～20min；作为优选的实施方式，10000rpm，离心10min；(6)、过滤：取离心上清液，用0.22μm针头式过滤头过滤，收集滤液于液相小瓶中；(7)、超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析。其中，步骤(7)中，液相条件为：色谱柱采用2.1×100mm，3.5μm的AgilentEclipse-XDB-C18色谱柱，乙腈作为流动相A，5mM乙酸铵水溶液(含0.1％(V/V)甲酸)作为流动相B，进行梯度洗脱，其中柱温为30～35℃，流速为0.2～0.3mL/min，进样体积为5～10μL；优选柱温为30℃，流速为0.3mL/min，进样体积为10μL。作为优选的实施方式，梯度洗脱的条件为下表1：表1流动相线性洗脱条件时间/分钟A/％B/％0.020801.0208010.0851517.0100020.0100021.02080其中步骤(7)中，质谱条件为：带加热功能的电喷雾离子源(HESI)，鞘气：30arb；辅助气：10arb；反吹气：5arb；电离电压：3.5kv；离子传输管温度：280℃；离子源温度：150℃；正离子模式监测，采用fullms和targetms2同时扫描两种方式同时测定，扫描范围50～650m/z，fullms扫描的分辨率为35000，targetms2扫描模式分辨率为17500。此外，本专利技术的方法还包括标准曲线的制备，具体操作步骤如下：S1、标准储备液配制：农药按照有机磷类、氨基甲酸酯类、除草剂类、杀菌剂类、杀虫剂类区分，分别准确称取0.010g各种农药标准品，同类农药置于同一10.0mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容，得到浓度为1000μg/mL的80种农药混合标准储备液；S2、混合标准溶液配制：将步骤(8)中5种农药混合标准储备液各吸取1.0mL置于10.0mL容量瓶中，乙腈定容，得到浓度为100μg/mL的80种农药标准混合储备液，然后用50％(V/V)乙腈水溶液逐级稀释，并最终配制成在5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL的80种混合农药的标准工作溶液，标准工作溶液避光0～4℃保存，可使用3个月；S3、仪器测定：吸取配制好的不同浓度的混合标准工作溶液，过0.22μm滤膜后进入超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱进行测定；S4、农药残留计算：采用外标法进行农药目标物的定量分析，即以农药定量离子峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。待测样品中进行超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析后，将测得检出农药定量离子峰面积，代入标准曲线，即可得到待测样品中农药的含量。在本专利技术中，所述的农药包含阿苯达唑、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜、苯并噻唑、苯霜灵、苯线磷、苯线磷砜、吡虫啉、吡氟禾草灵、丙硫磷、丙溴磷、残杀威、虫线磷、稻温灵、敌草胺、敌敌畏、地虫磷、定菌磷、啶虫脒、毒虫畏、毒死蜱、多菌灵、恶霜灵、恶唑菌酮、二嗪磷、丰索磷、伏杀硫磷、庚虫磷、谷硫磷、甲胺磷、甲拌磷、甲草胺、甲氟磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、甲萘威、甲霜灵、腈菌唑、精喹禾灵、久效磷、抗蚜威、克百威、乐果、磷胺、螺虫乙酯、马拉硫磷、咪酰胺、嘧菌酯、灭虫威、灭虫威砜、灭多威、灭蚜磷、噻虫嗪、三唑醇、三唑磷、三唑酮、杀虫脲、杀虫畏、杀线威、双苯三唑醇、双苯酰草胺、速灭磷、特丁磷硫亚砜、特丁磷硫砜、涕灭威亚砜、烯酰吗啉、蚜灭磷、氧乐果、乙伴磷、乙伴磷砜、乙伴磷亚砜、乙基对硫磷、乙基谷硫磷、异丙甲草胺、异稻瘟净、异恶草酮、异菌脲、茚虫威和增效醚一种或多种，可同时检测80种或者更多中的农药残留。80种农药的定性、定量离子见实施例1中的表2。本专利技术方法的检出限为将不同浓度农药的基质配标工作溶液进入超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱进行检测，以3倍信噪比(S/N＝3)技术检测限(LOD)，检测限在0.034ng/mL～0.089ng/mL之间。本专利技术方法的重复性和加标回收率：在空白样品中加入80种农药标准液，分别进行前处理后进入超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱进行检测分析，并按照加标量和测定值计算其回收率，结果见实施例中的表2。由表2可以看出，80种农药回收率在87.1％～116.1％之间，平均相对标准偏差(RSD)在1.3％～15.9％之间，表明本专利技术方法的回收率高，重复性好。需要说明的是，本专利技术采用两步除杂，第一步是冷冻离心除杂，第二步是过滤膜除杂。现有技术中，超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱一般仅采用过滤除杂，本专利技术还设置了冷冻离心除杂，不仅为了初步除去样品中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测白酒中农药残留量的方法，其特征在于：白酒样品氮吹去除乙醇，加入乙腈定容，冷冻离心后取上清液，滤膜过滤，滤液进入超高效液相色谱‑四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱进行分析测定。

【技术特征摘要】
1.一种检测白酒中农药残留量的方法，其特征在于：白酒样品氮吹去除乙醇，加入乙腈定容，冷冻离心后取上清液，滤膜过滤，滤液进入超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱进行分析测定。2.根据权利要求1所述的方法，其具体的操作步骤如下：(1)、取样；(2)、氮吹；(3)、定容：用乙腈将氮吹好的样品定容到1.0mL；(4)、混匀：定容后的样品在2000～6000rpm漩涡混匀2～5min；(5)、离心：混匀后的样品在4℃，6000～12000rpm，离心5～20min；(6)、过滤：取离心后的上清液，用0.22μm滤膜过滤；(7)、超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(2)氮吹条件为25℃以下氮吹至乙醇全部去除。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(5)离心条件为4℃，10000rpm、10min。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(7)中仪器测定的液相条件为：色谱柱采用2.1×100mm，3.5μm的AgilentEclipse-XDB-C18色谱柱，乙腈作为流动相A，含0.1％(V/V)甲酸的5mM乙酸铵溶液作为流动相B，进行梯度洗脱，其中柱温为30～35℃，流速为0.2～0.3mL/min，进样体积为5～10μL。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：梯度洗脱的条件为：时间/分钟A/％B/％0.020801.0208010.0851517.0100020.0100021.020807.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：柱温为30℃，流速为0.3mL/min，进样体积为10μL。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(7)中仪器测定的质谱条件为：带加热功能的电喷雾离子源(HESI)，鞘气：30arb；辅助气：10arb；反吹气：5arb；电离电压：3.5kv；离子传输管温度：280℃；离子源温度：150℃；正离子模式监...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘松，赵振宇，江锋，聂叶，汪地强，王莉，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52