一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法，仅需20ul鱼抗凝血液样品，加入细胞裂解液裂解细胞后，用蛋白酶K进行消化，然后用乙醇沉淀基因组DNA，弃上清液，将沉淀用双蒸水溶解，由于乙醇使蛋白发生不可逆变性，所以沉淀中的蛋白不能溶解，而DNA可以再次溶解；转移上清液到新的1.5ml离心管中，第二次向溶液中加入冰乙醇，基因组DNA就可以再次沉淀，完成提取DNA的过程，从而得到高质量的血液基因组DNA。本方法快速、高效、无毒、经济，所得到的基因组DNA可以进行下一步的基因工程领域研究，如PCR、酶切、Southern杂交、构建DNA文库和遗传多样性检测等。

【技术实现步骤摘要】
一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法
本专利技术涉及一种鱼类基因组DNA提取的
，特别是一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法。
技术介绍
基因组DNA提取是分子生物学研究的基础工作。目前鱼类DNA提取常用的方法是酚-氯仿抽提法。该方法是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚︰异戊醇抽提去除蛋白质，得到的基因组DNA经乙醇沉淀等方法进一步纯化[1-3]。该方法可以得到大量的基因组DNA，但耗时长，而且需要的化学试剂也多，尤其用到了对皮肤有腐蚀作用的化学试剂(苯酚)，对试验操作人员存在一定危险，此外，用到的笨酚、氯仿、异戊醇等试剂容易挥发，其废液对环境也是一种污染。例如以下公开的期刊中均有记载：[1]刘臻,鲁双庆,肖调义,陈开键.鲫鱼基因组DNA提取方法的探讨[J].水利渔业,2004,24(6):20-22[2]刘峰,鲁双庆,谢新民,刘臻,匡刚桥.鳜鱼基因组DNA的提取及PCR-SSCP条件的探讨[J].长沙大学学报,2007,21(2):23-26.[3]刘哲,康鹏天,柴文琼,王太,刘晓敏.鱼类血液基因组DNA提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法，其特征在于，具体步骤如下：S1、采集新鲜大鲵尾动脉的血液并加入抗凝剂、细胞裂解液作为试验样品；S2、然后将试验样品内放入蛋白酶K消化后，直接在消化液中先后加入两次乙醇沉淀构成沉淀物溶液中提取基因组DNA和蛋白，不使用酚和氯仿有机溶剂；S3第一次用乙醇沉淀基因组DNA时的沉淀物用ddH2O溶解后，将上清液转移到新的1.5ml离心管中，并加入4mol/L的NaAc以提高溶液中的离子浓度，再次用乙醇沉淀基因组DNA，最终提取DNA。

【技术特征摘要】
1.一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法，其特征在于，具体步骤如下：S1、采集新鲜大鲵尾动脉的血液并加入抗凝剂、细胞裂解液作为试验样品；S2、然后将试验样品内放入蛋白酶K消化后，直接在消化液中先后加入两次乙醇沉淀构成沉淀物溶液中提取基因组DNA和蛋白，不使用酚和氯仿有机溶剂；S3第一次用乙醇沉淀基因组DNA时的沉淀物用ddH2O溶解后，将上清液转移到新的1.5ml离心管中，并加入4mol/L的NaAc以提高溶液中的离子浓度，再次用乙醇沉淀基因组DNA，最终提取DNA。2.根据权利要求1所述的一种双乙醇沉淀法快速提取大鲵血液基因组DNA的方法，其特征在于：具体步骤如下：S11、取20ul带有抗凝剂的抗凝血液，加400-500ul细胞裂解液，再加4-6ul蛋白酶K；且每1mL血液中添加0.1ml的抗凝剂；S12、将步骤S11获得的样品在58℃-60℃的水浴中消化2h；S13、将步骤S12获得的物质中加1000ul预冷的100％乙醇，充分混匀；S14、将步骤S13获得的物质放入8000r/min离心机中工作10min，丢弃上清液；S15、再将步骤S14获得的物质加400ulddH2O溶解沉淀；S16、将步骤S15获得的物质放入10000r/min离心机中工作10min，吸上清液到干净的1.5ml离心管中；S17、将步骤S16获得的上清液中加入50ul浓度为4mol/L的NaAc，再加入1000ul预冷的100％乙醇，上下颠倒并进行充分混匀；出现白色絮状沉淀，即为初级基因组DNA；S18、将步骤S17获得的物质放入10000r/min...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勇，孙西红，高小蝉，任洪涛，熊建利，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：河南,41