The invention relates to a method for preparing varicella virus vaccine by bioreactor microcarriers, including: pretreatment of microcarriers, cultivation of seed cells, production of cell cultures, washing of microcarriers, vaccination of varicella viruses, and preparation of vaccines. The method of the invention reduces the residual volume of the serum and improves the titer of the virus original solution by pre treating the microcarrier package and washing the microcarrier before inoculating the virus.
【技术实现步骤摘要】
一种微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法
本专利技术涉及生物制品的生产工艺,具体涉及一种水痘病毒疫苗的生产制备方法,尤其涉及一种利用生物反应器微载体培养细胞,生产水痘病毒原液制备弱毒活疫苗的方法及其产品。
技术介绍
水痘是由水痘-带状疱疹病毒(VZV)引起的急性呼吸道传染病,具有高度传染性,对儿童的感染性和致病性明显,临床表现发热伴有全身瘙痒性皮疹、斑疹、丘疹或水疱疹。单纯的水痘病毒感染可以自愈,但如处理不当易并发肺炎、脑炎等严重疾病,且感染后潜伏在体内又可产生带状疱疹。接种水痘弱毒活疫苗是目前控制水痘感染与流行的有效手段。目前水痘病毒疫苗的生产一般通过培养人二倍体细胞生产病毒,细胞培养的方法通常为静置贴壁培养、转瓶培养。生物反应器技术是以反应器培养细胞生产制备生物制品的一种通用的平台性技术。生物反应器技术投资较高,但具有规模化、自动化、产品质量稳定等优点。目前食品药品监督管理局也在大力鼓励和引导生产企业通过生物反应器等技术提高和保证疫苗的质量。因此,通过反应器培养细胞制备病毒疫苗是未来的发展趋势。生产水痘疫苗的人二倍体细胞与其它细胞不同,该细胞在培养过程中,对营养的要求丰富,缺少营养会对细胞形态、数量、以及对病毒的敏感性都有很大的影响。水痘病毒,对环境、温度、PH值及营养成分也要比其它病毒要求高,尤其是制备合格的、产量高的的疫苗原液需要多方面的技术支持。现有技术中通过静置贴壁培养、转瓶培养人二倍体细胞生产水痘病毒疫苗的工艺,人二倍体细胞增殖缓慢、产生的病毒滴度低,单位疫苗生产成本高、质量不稳定。利用生物反应器进行二倍体细胞培养水痘病毒生产疫苗的工艺则因为牛血 ...
【技术保护点】
一种用生物反应器微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法,包括:(1)微载体的预处理:所述预处理包括以重组人血清白蛋白包被微载体;(2)种子细胞的培养:通过细胞培养瓶贴壁培养人二倍体细胞,待细胞长成单层后,胰酶消化制备细胞悬液;(3)生产细胞的培养:在生物反应器中加入步骤(1)预处理的聚苯乙烯微载体、培养液、以及步骤(2)的种子细胞,所述培养液为含10%新生牛血清的完全培养基;(4)微载体的洗涤:当微载体表面细胞单层融合度为80‑90%时,收集微载体、以缓冲液洗涤、对洗涤液中的牛血清白蛋白进行检测;(5)水痘病毒接种,接种水痘‑带状疱疹病毒侵染30min,加入无血清培养基继续培养至CPE达到80%以上时收获病毒液。
【技术特征摘要】
1.一种用生物反应器微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法,包括:(1)微载体的预处理:所述预处理包括以重组人血清白蛋白包被微载体;(2)种子细胞的培养:通过细胞培养瓶贴壁培养人二倍体细胞,待细胞长成单层后,胰酶消化制备细胞悬液;(3)生产细胞的培养:在生物反应器中加入步骤(1)预处理的聚苯乙烯微载体、培养液、以及步骤(2)的种子细胞,所述培养液为含10%新生牛血清的完全培养基;(4)微载体的洗涤:当微载体表面细胞单层融合度为80-90%时,收集微载体、以缓冲液洗涤、对洗涤液中的牛血清白蛋白进行检测;(5)水痘病毒接种,接种水痘-带状疱疹病毒侵染30min,加入无血清培养基继续培养至CPE达到80%以上时收获病毒液。2.如权利要求1所述用生物反应器微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法,其中步骤(1)中包被缓冲液为0.05MpH9.6的碳酸盐缓冲液。3.如权利要求1所述用生物反应器微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法,其中步骤(2)中所述人二倍体细胞选择2BS株、MRC-5株、KMB-17。4.如权利要求1所述用生物反应器微载体培养水痘病毒制备疫苗的方法,其中步骤(3)生物反应器中聚苯乙烯微载体的浓度为3-6g/L,种子细胞的接种浓度为1×104-1×105cell/m...
【专利技术属性】
技术研发人员:李春明,徐俊峰,朱晓文,王磊,闫磊,赵海波,双慧,王玮,沈红杰,
申请(专利权)人:长春祈健生物制品有限公司,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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