一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条，试纸条包括干化学反应片，干化学反应片通过将试剂垫浸泡在化学试剂中，然后经干燥制得，化学试剂采用优选浓度和比例的胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、金属盐、显色剂、聚氧乙烯醚以及环氧乙烷‑环氧丙烷共聚物等。本发明专利技术的设备成本低、易于制备获得，且反应快速，操作方便。

A test paper for the detection of low density lipoprotein cholesterol in serum and its preparation method

The invention relates to a test strip for detection of serum low density lipoprotein cholesterol, strip including dry chemical reaction, dry chemical reaction through the reagent pad soaked in chemical reagent, and then dried to obtain the optimum chemical reagent concentration and the ratio of cholesterol esterase and cholesterol oxidase, peroxidase, metal salt, chromogenic agent, polyoxyethylene ether and ethylene oxide propylene oxide copolymer. The equipment of the invention has low cost, easy preparation, rapid reaction and convenient operation.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条及其制备方法
本专利技术涉及一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条及其制备方法。
技术介绍
脂质代谢异常是冠心病(CHD)最重要的危险因素之一。许多大规模临床研究已充分证明胆固醇特别是低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)在冠心病的发生发展中的重要作用，降低LDL-C能显著减少冠心病事件。低密度脂蛋白胆固醇升高与冠心病发病率呈正相关，是冠心病的重要分析指标之一。传统的LDL-C浓度通过分离测定或间接近似计算的方式获得。分离测定即使用超速离心机按一定步骤将血液样品中脂蛋白成份按高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和乳糜微粒等分类进行分离后，再分别单独进行测定。该方法对设备要求高，耗时长，操作复杂。而间接近似计算的方式是根据总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)数值通过Friedewald公式计算得出LDL-C的近似值，但该方法只适用于TG<4.52mmol/L。在血清中存在CM和TG较高时，计算值偏差较大，不少因素也影响公式的准确性。因此，只有直接法测定LDL-C可为临床提供准确的诊断依据。近年来不少商业化的产品已经在全自动生化仪上实现了LDL-c的直接检测。该方案的实现主要是通过一些特殊的表面活性剂，在传统的总胆固醇检测反应的酶体系中，将HDL保护起来使之不参与反应，或延迟HDL部分的反应速度，从达到只有LDL参与酶体系反应的目标，最终仅得到LDL中胆固醇的浓度检测结果，即样品中的LDL-c浓度。迄今为止，直接法检测血清样品中LDL-c的方法主要是选择性抑制法和消除法两种，这两种方法的具体技术方案如下所述：1、选择性抑制法：是指使用a-环糊精、硫酸葡聚糖和Brij58等物质来抑制血清样品中的HDL、VLDL等非LDL-C脂蛋白与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的反应(也可称选择性抑制)，从而仅使LDL-C被上述两种酶水解并测定的方法。使用该方法通常使用双试剂反应系统。试剂1中含a-环糊精硫酸钠，硫酸葡聚糖，MgCl2，EMSE和PBS。试剂2中含CHER、CHOD过氧化物酶、4-AA、表面活性剂和PBS。a-环糊精硫酸钠在少量DS及Mg2+存在下，可减少乳糜微粒(CM)和VLDL组份中的胆固醇与酶试剂的反应，特殊表面活性剂可减少HDLC组份胆固醇的反应，两者结合则可选择性地测定LDL-c。、消除法：是以不同的表面活性剂的双试剂使非LDL-c与LDL-c分二步水解，因先消耗非LDL-c而被称为消除法，是目前应用较广的直接测定法。该方法同样采用双试剂反应系统。主要有表面活性剂消除法，过氧化氢酶消除法等。日本第一化学GenxymeDiagnostics公司的试剂属此类方法，是国内外目前使用最广泛的一类试剂。其试剂1中的表面活性剂1能改变LDL-c以外的HDL，CM和VLDL结构并解离，所释放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应，产生的H2O2缺乏耦联剂时被消耗而不显色，此时LDL-c颗粒解离释放胆固醇，参与酶反应而显色，色泽深浅与LDL-c量成比例。以上两种检测方法均属于双组分生化试剂，均需要分光光度仪或全自动生化分析仪来执行相关反应，并进行结果计算分析。因此，上述技术中检测LDL-c浓度时，存在如下问题：采用超速离心法分离LDL与HDL的方案，需要使用价格昂贵的超高速离心机作为主要的分离设备，而且实验步骤多，操作十分复杂，需要配制多种试剂，最重要的是十分耗时，整个分离时间往往超过6小时。而直接检测法方案则需要全自动生化仪这样的大型自动化设备，成本高昂。授权公告号为CN101864475B，授权公告日为2013-11-6的测量低密度脂蛋白胆固醇的方法，其公开了用于测量LDL-c的干式分析元件，其制备方法是在下面涂布了明胶、厚度为180微米的聚对苯二甲酸乙二醇酯的无色、透明、平滑膜上涂布明胶水溶液，并干燥，至干燥后的厚度达到14微米，涂布具有以下组成的水溶液，接下来干燥。4-氨基安替比林0.32g/m2、TOOS0.62g/m2、过氧化物酶12.75KU/m2。在上述薄膜上以约30m2的量在各个面加水使其湿润。然后轻轻施加压力，层叠以36号规格编织相当于50尼尔的聚酯纺丝而成的轻编织布料，并干燥。接着，在上述布料上涂布下述组成的水溶液，接下来干燥。MOPS(pH7.0)1.67g/m2、聚甘油三苯乙烯基苯基醚5.02g/m2、PluronicL12139.75g/m2、胆固醇酯酶（脂蛋白脂肪酶，Toyobo）0.65KU/m2、胆固醇氧化酶（重组大肠杆菌，Kikkoman）0.13KU/m2。可见，该专利制成的干式分析元件是需要两种试剂分别固定到不同的薄膜上，因此，制备方法繁琐。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种成本低廉、制备简单的用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条。本专利技术所要解决的另一技术问题是提供上述试纸条的制备方法。为解决以上技术问题，本专利技术采取如下技术方案：本专利技术的一个目的是提供一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条，所述的试纸条包括干化学反应片，所述的干化学反应片通过将试剂垫浸泡在化学试剂中，然后经干燥制得，所述的化学试剂包括浓度为1~30KU/L的胆固醇酯酶、20~80KU/L的胆固醇氧化酶、250~350mM的金属盐、100~400KU/L的辣根过氧化物酶、15~25mM的4-氨基安替比林、40~60mM的显色剂、0.12~0.2g/mL的聚氧乙烯醚类表面活性剂、1.5~2.5g/L的环氧乙烷-环氧丙烷共聚物表面活性剂以及磷酸缓冲液。优选地，所述的化学试剂包括浓度为5~15KU/L的胆固醇酯酶、40~60KU/L的胆固醇氧化酶、280~320mM的金属盐、150~250KU/L的辣根过氧化物酶、18~22mM的4-氨基安替比林、45~55mM的显色剂、0.14~0.18g/mL的聚氧乙烯醚类表面活性剂、1.8~2.2g/L的环氧乙烷-环氧丙烷共聚物表面活性剂以及磷酸缓冲液。进一步优选地，所述的化学试剂包括浓度为5~8KU/L的胆固醇酯酶、40~45KU/L的胆固醇氧化酶、280~290mM的金属盐、150~180KU/L的辣根过氧化物酶、18~19mM的4-氨基安替比林、45~48mM的显色剂、0.14~0.15g/mL的聚氧乙烯醚类表面活性剂、1.8~1.9g/L的环氧乙烷-环氧丙烷共聚物表面活性剂以及磷酸缓冲液。优选地，所述的金属盐为选自硫酸镁、氯化镁、硫酸钠、氯化钠、氯化钙、磷酸镁、磷酸钠中的一种或多种；进一步优选为硫酸镁或氯化镁。优选地，所述的显色剂为选自N-(2-羟基-3-磺丙基)-35-二甲氧基苯胺钠盐（HDAOS）、N-乙基-N-(2-羟基-3-丙磺基)间甲苯胺（TOOS）、N,N-二(4-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐（MADB）、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐一水合物（MAOS）、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐（ADPS）、N,N-二(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐（TODB）、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐（TOPS）、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐（DAOS）、氯化硝基四氮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条，其特征在于：所述的试纸条包括干化学反应片，所述的干化学反应片通过将试剂垫浸泡在化学试剂中，然后经干燥制得，所述的化学试剂包括浓度为1~30KU/L的胆固醇酯酶、20~80KU/L的胆固醇氧化酶、250~350mM的金属盐、100~400KU/L的辣根过氧化物酶、15~25mM的4‑氨基安替比林、40~60 mM的显色剂、0.12~0.2g/mL的聚氧乙烯醚类表面活性剂、1.5~2.5g/L的环氧乙烷‑环氧丙烷共聚物表面活性剂以及磷酸缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条，其特征在于：所述的试纸条包括干化学反应片，所述的干化学反应片通过将试剂垫浸泡在化学试剂中，然后经干燥制得，所述的化学试剂包括浓度为1~30KU/L的胆固醇酯酶、20~80KU/L的胆固醇氧化酶、250~350mM的金属盐、100~400KU/L的辣根过氧化物酶、15~25mM的4-氨基安替比林、40~60mM的显色剂、0.12~0.2g/mL的聚氧乙烯醚类表面活性剂、1.5~2.5g/L的环氧乙烷-环氧丙烷共聚物表面活性剂以及磷酸缓冲液。2.根据权利要求1所述的用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条，其特征在于：所述的化学试剂包括浓度为5~15KU/L的胆固醇酯酶、40~60KU/L的胆固醇氧化酶、280~320mM的金属盐、150~250KU/L的辣根过氧化物酶、18~22mM的4-氨基安替比林、45~55mM的显色剂、0.14~0.18g/mL的聚氧乙烯醚类表面活性剂、1.8~2.2g/L的环氧乙烷-环氧丙烷共聚物表面活性剂以及磷酸缓冲液。3.根据权利要求1或2所述的用于检测血清中低密度脂蛋白胆固醇的试纸条，其特征在于：所述的金属盐为选自硫酸镁、氯化镁、硫酸钠、氯化钠、氯化钙、磷酸镁、磷酸钠中的一种或多种；所述的显色剂为选自N-(2-羟基-3-磺丙基)-35-二甲氧基苯胺钠盐、N-乙基-N-(2-羟基-3-丙磺基)间甲苯胺、N,N-二(4-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐一水合物、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐、N,N-二(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐、氯化硝基四氮唑蓝、碘硝基氯化四氮唑蓝、四氮唑蓝中的一种或多种；...

【专利技术属性】
技术研发人员：何爱民，黄芳婷，刘星，
申请(专利权)人：光景生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32