导入α‑MSH多肽的粘红酵母重组菌株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种导入α‑MSH多肽的粘红酵母重组菌株，将α‑MSH多肽导入经Δ6‑去饱和酶基因重组的粘红酵母中。本发明专利技术还公开一种导入α‑MSH多肽的粘红酵母重组菌株的制备方法和应用。本发明专利技术具有如下有益效果：经双酶切鉴定，重组质粒上的目的片段插入方向正确；实现了D6D的稳定、长久表达；实时荧光定量PCR表明D6D的表达水平提高了2倍左右；经气相色谱法分析，转化菌株中的GLA较野生菌株提高了3.3倍多；发现小鼠血清和重要器官(肝、肺、脾、肾)中α‑MSH的含量增加，特别是肝脏提高了3.24倍。

Import MSH polypeptide alpha r.glutinis recombinant strain and preparation method and application thereof

Red yeast strains of recombinant stick the invention relates to a MSH polypeptide into alpha, alpha polypeptide MSH import by delta 6 desaturase gene recombinant yeast rhodotorula. Preparation method and application of rhdotorula recombinant yeast strains of the invention also discloses an alpha polypeptide of MSH import. The invention has the following advantages: after double enzyme digestion, the recombinant plasmid fragment was inserted into the right direction; D6D realize the stable and long expression; real-time fluorescence quantitative PCR showed that the expression level of D6D was increased by 2 times; the analysis of gas chromatography, the transformation strain GLA increased by 3.3 compared with the wild strain many times; found that the mice serum and vital organs (liver, lung, spleen and kidney) were increased in alpha MSH, especially in the liver increased 3.24 times.

【技术实现步骤摘要】
导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株及其制备方法和应用。
技术介绍
许多不饱和脂肪酸因其广泛的生理活性和其在人类健康、营养方面的重要作用越来越受人们关注。微生物油脂的合成过程与动植物几乎相似，最主要的部分就是脂肪酸的合成，主要有两种胞质酶系催化，乙酰CoA羧化酶和脂肪酸合酶复合体，以乙酰CoA为碳源经过多次碳链延长合成饱和脂肪酸，或再经过去饱和作用合成不饱和脂肪酸。在去饱和过程中主要由各种去饱和酶负责催化，是合成长链不饱和脂肪酸的关键，能在脂肪酸碳链上引入C＝C双键，提高脂肪酸的不饱和度，酵母中广泛存在脂肪酸去饱和酶。而合成不饱和脂肪酸的酶分为两种，甲基定向和羧基定向的脂肪酸去饱和酶。甲基定向的脂肪酸去饱和酶从甲基端固定的碳原子处引入碳碳双键，被称为ω-去饱和酶；羧基定向的脂肪酸去饱和酶从羧基端固定的碳原子处引入碳碳双键，被称为Δ(delta)-去饱和酶，也称为“front-end”去饱和酶。Δ9-去饱和酶将第一个碳碳双键引入饱和脂肪酸中，第二个碳碳双键由Δ12和Δ6-去饱和酶负责引入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种导入α‑MSH多肽的粘红酵母重组菌株，其特征在于，将α‑MSH多肽导入经Δ6‑去饱和酶基因重组的粘红酵母中。

【技术特征摘要】
2017.04.27 CN 20171028960271.一种导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株，其特征在于，将α-MSH多肽导入经Δ6-去饱和酶基因重组的粘红酵母中。2.根据权利要求1所述的一种导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株，其特征在于：Δ6-去饱和酶由刺孢小克银汉霉的D6D基因的分离与扩增得到的。3.根据权利要求2所述的一种导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株，其特征在于：Δ6-去饱和酶基因重组的粘红酵母构建方法,其包括的步骤如下：(1)表达载体pPGK1Z-rD-ME的抽提；(2)连接PGK1基因和D6D基因；(3)PGK1-D6D片段与表达载体载体的双酶切反应、连接。4.根据权利要求5所述的一种导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株，其特征在于：粘红酵母与D6D基因片段的摩尔比要控制在1:3-10。5.根据权利要求1所述的一种导入α-MSH多肽的粘红酵母重组菌株的制备方法，其特征在于：包括的步骤如下：(1)制备工程菌株GM4-D6D菌株感受态细胞；(2)将10μg修饰了的α-MSH多肽溶解后与感受态细胞混合后共100μL，加入到电转化杯中；(3)电击化；(4)电击结束后，立即向转化杯中加入900μL预冷的1M山梨醇溶液，用枪轻微吸打...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晗笑，利时雨，黄俊丽，贺凯，
申请(专利权)人：广州弘宝元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44