用于诊治胃腺癌转移的生物标志物制造技术

本发明专利技术公开了KIF14基因可以作为胃腺癌诊断的生物标志物。本发明专利技术的实验证明，与正常对照组织相比，胃腺癌组织中的KIF14基因表达显著升高，且经过干扰实验证明KIF14能够影响胃腺癌的侵袭与迁移。根据本发明专利技术的研究成果，可以研发能够抑制KIF14基因表达的药物，从而实现临床上对于胃腺癌的预防和治疗。

Biomarkers for the diagnosis and treatment of metastatic adenocarcinoma of the stomach

The present invention discloses that KIF14 gene can be used as a biomarker for the diagnosis of gastric adenocarcinoma. The results of this study showed that compared with normal tissues, the expression of KIF14 gene in gastric adenocarcinoma tissues was significantly increased, and the interference experiments showed that KIF14 could affect the invasion and migration of gastric adenocarcinoma. According to the results of this study, we can develop drugs that can inhibit the expression of KIF14 gene, so as to achieve the clinical prevention and treatment of gastric adenocarcinoma.

【技术实现步骤摘要】
用于诊治胃腺癌转移的生物标志物
本专利技术涉及肿瘤诊断、治疗领域，更具体地，本专利技术涉及以检测KIF14异常为手段的肿瘤诊断方法；及抑制KIF14基因或蛋白质的肿瘤治疗剂。
技术介绍
胃癌是源于胃粘膜上皮细胞的恶性肿瘤，主要为腺癌。2008年全球新诊断出胃癌近100万例，病死人数74万，是全世界发病率第四、致死率第二的癌症，是一种临床上常见的恶性肿瘤。虽然胃癌全球总发病率有所下降，但有将近三分之二的胃癌病例集中在经济欠发达国家和地区，中国及其他东亚国家高发。据《生命时报》2014年发布的最新版“中国癌症地图”。我国每年新发肿瘤病例约为3120000例，平均每天8550例，每分钟有6人被诊断为癌症，有5人死于癌症。而根据世界卫生组织的调查显示，我国属于胃癌高发区，辽宁、山东、甘肃、江苏、福建等省情况更为严重。在临床上，尽管早期胃癌的治疗己经取得了重大进步，常用外科手术切除加区域淋巴结清扫及术后放化疗支持，然而晚期胃癌的长期生存率仍然很低。很多文献及研究表明，肿瘤的侵袭、转移导致了大部分胃癌患者的死亡并在胃癌的不良预后中扮演关键角色。胃癌的侵袭、转移是一个多基因调控、多因子参与、多步骤进行的复杂的生物学过程，一般认为癌细胞的运动和侵袭能力是产生转移的重要条件。但对于晚期胃癌，其侵袭和转移潜在的分子机制尚不明确。因而寻找可靠的肿瘤预后的标志性因子，并找到能够有效抑制肿瘤转移和侵袭的分子靶点，改善肿瘤的预后，是近年来研究的热点，也是肿瘤研究中的一个重点和难点。因此，迫切的需要鉴别胃癌进展期的重要分子，研发新的药物作用靶点，为肿瘤的治疗和患者的预后提供有价值的帮助。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测KIF14基因表达差异来实现胃腺癌转移诊断、胃腺癌预测预后、胃腺癌预后评估的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过抑制KIF14基因表达来治疗胃腺癌转移的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种用于筛选胃腺癌转移治疗药物的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于治疗胃腺癌转移的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测KIF14的试剂在制备胃腺癌转移诊断、胃腺癌预测预后、胃腺癌预后评估工具中的应用。进一步，所述检测KIF14的试剂包括检测KIF14基因表达量的试剂。更进一步，所述检测KIF14的试剂包括能够定量KIF14基因mRNA的试剂，和/或能够定量KIF14蛋白的试剂。本专利技术的定量KIF14基因mRNA的试剂可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该试剂可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。所述能够定量KIF14基因mRNA的试剂可以是KIF14基因或转录本的特异性引物，也可以是KIF14基因或转录本的特异性识别探针，或同时包括引物和探针。上面所述的KIF14基因或转录本的特异性引物包括实时定量PCR中使用的特异扩增KIF14基因的引物。在本专利技术的的具体实施例中，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。引物可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的定量KIF14蛋白的试剂可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的定量KIF14蛋白的试剂包括特异性结合KIF14蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的定量KIF14蛋白的试剂可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的KIF14蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对KIF14蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)647标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；及DyLight547和DyLight647(TechnoChemicalCorp.)、Zenon(TM)、AlexaFluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(InvitrogenCorporation)和EZ-标记物蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测KIF14的试剂在制备胃腺癌转移诊断、胃腺癌预测预后、或胃腺癌转移复发评估工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测KIF14的试剂在制备胃腺癌转移诊断、胃腺癌预测预后、或胃腺癌转移复发评估工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测KIF14的试剂包括检测KIF14基因表达量的试剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述检测KIF14的试剂包括能够定量KIF14基因mRNA的试剂，和/或能够定量KIF14蛋白的试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述能够定量KIF14基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异扩增KIF14基因的引物；所述能够定量KIF14蛋白的试剂包括特异性结合KIF14蛋白的抗体。5.一种用于胃腺癌转移诊断、胃腺癌转移预测预后、或胃腺癌转移复发评估的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测KIF14基因表达量的工具；优选的，所述工具包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋宏涛，马翠，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11