启动子pYLG及其在构建高产长链二元酸的热带假丝酵母中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种启动子pYLG及其在构建高产长链二元酸的热带假丝酵母中的应用。启动子pYLG，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明专利技术还涉及启动子pYLG在构建高产长链二元酸的热带假丝酵母中的应用。本发明专利技术首次公开了一种可以在热带假丝酵母中实现控制热带假丝酵母甘油激酶基因GK表达的启动子pYLG，为构建可调控甘油激酶基因GK的热带假丝酵母工程菌奠定了基础。

The promoter of pYLG and its application in Candida tropicalis to construct high yield of long chain dicarboxylic acid

The invention relates to a promoter pYLG and its application in Candida tropicalis to construct high yield of long chain dicarboxylic acid. Promoter pYLG, nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO.1; the invention also relates to the use of promoter pYLG in Candida tropicalis to construct high yield of long chain dicarboxylic acid. The present invention discloses a promoter pYLG for controlling Candida tropicalis glycerol kinase gene GK expression in Candida tropicalis for the first time, which lays a foundation for construction of engineering strain of Candida tropicalis capable of regulating glycerol kinase gene GK.

【技术实现步骤摘要】
启动子pYLG及其在构建高产长链二元酸的热带假丝酵母中的应用
本专利技术涉及一种启动子pYLG及其在构建高产长链二元酸的热带假丝酵母中的应用，属于生物工程

技术介绍
长链二元酸(Longchaindicarboxylicacid)是指碳链中含有10个以上碳原子的脂肪族二羧酸，其通式为HOOC-(CH2)n-COOH(n＝9～16)，是一类用途极其广泛的重要精细化工产品。长链二元酸是重要的精细化工中间体，可以合成人造麝香、共聚酰胺塑料热熔胶、尼龙工程塑料、高级尼龙喷麽、高温电解质、高档服装热熔胶、耐寒增塑剂、高级润滑油、高级汽车油漆、防紫外线涂料、合成光缆导体等众多精细化工产品。二元酸被广泛应用于化工，轻工，国防、汽车工业、农药，医药，工程材料，晶体材料等领域。长链二元酸在自然界不存在，目前国内外生产长链二元酸主要有2种方法：化学法和发酵法。与微生物发酵法相比，化学法生产长链二元酸条件苛刻、工艺复杂、污染严重，且产品质量差，因此众多研究者将目标转向有广阔发展前景、工业价值大的微生物发酵上来。微生物发酵法是以正构烷烃为原料，利用热带假丝酵母菌(Candidatropicalis本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种启动子pYLG，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种启动子pYLG，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述启动子pYLG在构建高产长链二元酸的热带假丝酵母中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤如下：(1)PCR扩增制备核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的启动子pYLG片段；(2)制备核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的甘油激酶GK片段；(3)将步骤(1)制得的启动子pYLG片段与步骤(2)制得的甘油激酶GK片段进行PCR重叠连接，制得pYLG-GK片段；(4)以含有Kanr9k质粒的大肠杆菌为模板，进行PCR扩增，得到抗性基因Kanr片段；所述PCR扩增的引物核苷酸序列如下：Kanr-up:5’-GACCTTCGTTTGTGCGGATCCTGAGGGAGCCACGGTTGAT-3’，Kanr-down:5’-GAAAAGGGGGACGAGGATCGGTTGAGGCCGTTGAGCAC-3’(5)将步骤(4)得到的抗性基因Kanr片段通过一步法定向克隆无缝克隆连接至pPICzαA载体，制得重组载体pPICzαA-Kanr；(6)将步骤(3)制得的pYLG-GK片段通过一步法定向克隆无缝克隆连接至步骤(5)制得的的重组载体pPICzαA-Kanr，制得重组载体pPICzαA-Kanr-pYLG-GK；(7)将步骤(6)制得的重组载体pPICzαA-Kanr-pYLG-GK经电击转化至热带假丝酵母，筛选阳性菌株，制得高产长链二元酸的热带假丝酵母。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，PCR扩增引物序列如下：pYLG-up:5’-TTAGACCACTCTTTTGAGCTCGGTTGAAATGAATCGGCCG-3’，pYLG-down:5’-ACTACGACGTGGCATTGTTGATGTGTGTTTAATTCAAGAATG-3’，PCR扩增反应体系如下，总体系为50μl：2×HiFi-PCRMaster25μl，10μmol/L浓度的上游引物(pYLG-up)2μl，10μmol/L浓度的下游引物(pYLG-down)2μl，解脂耶氏酵母基因组DNA2μl，ddH2O补足50μl；PCR反应程序如下：95℃预变性5min；95℃变性30sec，50℃退火30sec，72℃延伸2min，30个循环；72℃延伸10min；-20℃保存。5.如权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊卿，彭健，王瑞明，修翔，薛乐，王腾飞，苏静，杨晓慧，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37