一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具技术

本发明专利技术公开了一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具，涉及生物技术领域，其方法包括蜂卵获取、蜂卵收集、蜂卵渗透平衡、蜂卵冻前准备、蜂卵滴冻、蜂卵集中冻存、蜂卵解冻与复水、蜂卵移植和培养共八个工艺过程，本发明专利技术的方法操作简单，基于配合蜜蜂卵超低温冷冻贮存技术而实现，配合所使用的成套专用工具，提高了蜜蜂卵在冷冻解冻过程中的存活率，重复性和稳定性好，操作方便；且所使用的工具结构简单，实用性强，制造成本低廉，无需复杂的设备即可完成蜂卵的超低温冷冻。

A method for cryopreservation of honeybee eggs and its supporting tools

The invention discloses a bee egg cryopreservation method and its supporting tool, relates to the field of biotechnology, the method includes obtaining, bee bee eggs egg collection, bee eggs, egg freezing osmotic balance preparation, bee eggs drop frozen, concentrated bee eggs frozen, thaw egg and rehydration, bee bee egg transplantation and a total of eight training process, the method of the invention has the advantages of simple operation, with bee egg cryopreservation and storage technology based on the realization of complete with special tool use, improve the survival rate of frozen thawed bee eggs in the process, good repeatability and stability, convenient operation; and the use of tools has the advantages of simple structure, strong practicability, low manufacturing cost, no need of complex cryopreservation devices to complete the bee eggs.

【技术实现步骤摘要】
一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具。
技术介绍
蜜蜂卵(胚胎)的超低温冷冻贮存技术是我国蜜蜂遗传资源保护和利用的重要技术手段，该技术已经应用于国家级蜜蜂基因库建设。蜜蜂卵冷冻是指在实验室条件下，将蜜蜂卵经过某些药物处理，于液氮(-196℃)中冷冻保存，解冻后仍能继续发育的一种技术。其基本步骤为:移卵出巢房，用冷冻保护剂进行冻前平衡，预冻，冷冻，解冻，稀释脱除冷冻保护剂，恒温培育至孵化。如果冷冻保存后的蜜蜂卵经人工室内或蜜蜂箱内自然哺育能进一步发育，即孵化、化蛹、羽化乃至性成熟，可使蜂王做为两性遗传物质之载体的功能更具完美，并可根据需要培育蜂王，从而使杂交育种和纯种选育前景更加美好。王丽华等，1997年在《福建农业大学学报》26(4):470～472上发表了“中华蜜蜂卵冷冻贮存技术”论文，蜜蜂卵冷冻贮存技术实现突破，其使用的仪器设备包括液氮罐、广口保温瓶、三用恒温水箱、放大镜、体视显微镜及一些养蜂小工具和常规玻璃器皿等。据查新，她们没有研制出专门与该技术配套的工具及其使用方法，其技术也没有得到转化和应用。专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜜蜂卵超低温冷冻方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)蜂卵获取：将蜂王装入蜂王产卵控制笼内，送入蜂群，囚禁蜂王控制笼内产卵，次日取出产有蜂卵的台基条备用；(2)蜂卵收集：将产有蜜蜂卵的台基条固定到木质支架上，用滴管吸取预先配制好的生理液，逐滴滴加到粘有蜂卵的台基上，将卵覆盖，用卵的塑料剥离针在20倍体式显微镜下将生理液内的蜂卵逐粒剥离台基，使卵悬浮于液体内，再将该台基条立于一洁净培养皿内，用吸有生理液的滴管将剥离的蜂卵全部冲入培养皿内，逐条冲洗，将所有蜂卵都收集到该培养皿内；(3)蜂卵渗透平衡：用滴管吸取培养皿内收集到一起的蜂卵，将其加入到平衡漏斗内，打开止水夹，生理液流出至废液皿，关闭止...

【技术特征摘要】
1.一种蜜蜂卵超低温冷冻方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)蜂卵获取：将蜂王装入蜂王产卵控制笼内，送入蜂群，囚禁蜂王控制笼内产卵，次日取出产有蜂卵的台基条备用；(2)蜂卵收集：将产有蜜蜂卵的台基条固定到木质支架上，用滴管吸取预先配制好的生理液，逐滴滴加到粘有蜂卵的台基上，将卵覆盖，用卵的塑料剥离针在20倍体式显微镜下将生理液内的蜂卵逐粒剥离台基，使卵悬浮于液体内，再将该台基条立于一洁净培养皿内，用吸有生理液的滴管将剥离的蜂卵全部冲入培养皿内，逐条冲洗，将所有蜂卵都收集到该培养皿内；(3)蜂卵渗透平衡：用滴管吸取培养皿内收集到一起的蜂卵，将其加入到平衡漏斗内，打开止水夹，生理液流出至废液皿，关闭止水夹，依次加入适量的蜂卵梯度渗透液一，分别渗透处理一定时间，使蜂卵脱水和渗透平衡，最后加入蜂卵冷冻保护液继续平衡；(4)蜂卵冻前准备：在3L的广口玻璃内胆保温瓶内加入一定量制冷的液氮，将玻璃化冷冻滴冻盘悬于液氮之上，通过调节提钩位置，使盘体距离液氮面适当高度位置，降温平衡后用于蜂卵的滴冻；(5)蜂卵滴冻：用滴管吸取悬有蜂卵的冷冻保护液，逐滴滴入玻璃化冷冻滴冻盘上的圆形凹陷内，冷冻保护液会迅速冷冻进入玻璃化状态；(6)蜂卵集中冻存：将玻璃化冷冻的蜂卵集中入冻存管内密封并标记，投入到液氮内长期保存；(7)蜂卵解冻与复水：取出装有蜂卵的冻存管，升温平衡一定时间后，将玻璃态颗粒投入解冻液内，迅速解冻，再将悬浮有蜂卵的解冻液转移入平衡漏斗内，将蜂卵集中，依次加入适量的蜂卵梯度渗透液二，分别渗透处理一定时间，使蜂卵吸水和渗透复原，最...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志勇，薛运波，牛庆生，李兴安，葛凤晨，王志，常志光，柏建民，
申请(专利权)人：吉林省养蜂科学研究所吉林省蜂产品质量管理监督站，吉林省蜜蜂遗传资源基因保护中心，
类型：发明
国别省市：吉林,22