一种检测CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用技术
A detection of CP4 EPSPS protein electrochemical immunosensor and its preparation method and Application
The invention discloses a method for detection of CP4 EPSPS protein electrochemical immunosensor and its preparation method and the application of surface electrode substrate by using AuNPs CMK 3 Dispersion modification, mixed solution of EDC and the activation of NHS, CP4 covalent EPSPS antibody and thionine solution combined treatment. The base electrode for glassy carbon electrode, the CP4 EPSPS antibody for nano antibody. The electrochemical immunosensor of the present invention has the advantages of high sensitivity, strong specificity, portability and portability of the instrument, and can play an important role in the detection of biological macromolecules, and has wide application prospects.
【技术实现步骤摘要】
一种检测CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用
本专利技术属于CP4-EPSPS蛋白快速检测
，具体涉及一种检测CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用。
技术介绍
EPSPS(5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶)是莽草酸途径中的一个关键酶，广泛存在于植物及微生物中，并且是广普高效除草剂草甘膦的靶标酶，而CP4-EPSPS对草甘膦具有非常高的抗性，因此被广泛应用于农作物转基因工程中。自1996年首批转基因抗草甘膦大豆40-3-2商业化以来，抗草甘膦作物的种植面积迅速增长。面对大量含有CP4-EPSPS的转基因农作物，我们迫切地需要建立科学灵敏的检测方法对其进行定性定量检测。目前，检测CP4-EPSPS蛋白的方法主要有酶联免疫吸附法、多重实时PCR法、蛋白质印迹法等。但这些方法操作较繁琐，比如引物的制备、质粒的提取等，仪器较昂贵，且对操作人员的技术要求高。因此建立一种更加便捷灵敏高效地检测方法仍然非常必要。电化学免疫传感器作为一种新型检测平台，以其鉴定物质的高度特异性、敏感性和稳定性受到青睐，它的问世使传统的免疫分析发生了...
【技术保护点】
一种检测CP4‑EPSPS蛋白的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，基底电极表面依次经AuNPs‑CMK‑3分散液修饰，EDC和NHS的混合溶液活化，CP4‑EPSPS抗体和硫堇的混合溶液共价结合。
【技术特征摘要】
1.一种检测CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，基底电极表面依次经AuNPs-CMK-3分散液修饰，EDC和NHS的混合溶液活化，CP4-EPSPS抗体和硫堇的混合溶液共价结合。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述基底电极为玻碳电极。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述AuNPs-CMK-3分散液按如下步骤制备得到：(1)取HAuCl4溶液在冷凝回流装置中加热煮沸，在搅拌条件下向其中加入柠檬酸钠溶液作为还原剂，继续搅拌加热10～30min后，撤去加热源冷却至室温，得到AuNPs溶液；(2)称取CMK-3加入步骤(1)得到的AuNPs溶液中，室温下搅拌反应4～6h后，将得到的混悬液真空抽滤，收集得到的AuNPs-CMK-3进行干燥；将干燥的AuNPs-CMK-3溶于DMF中，得到AuNPs-CMK-3分散液。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中HAuCl4和柠檬酸钠的质量比为1:2.375。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈艳飞，张明明，潘登，陈慧琴，张袁健，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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