胰酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，公开了一种胰酶的制备方法，包括以下步骤：鲜冻原料：鲜冻胰脏和/或十二指肠；刨片冻干：将鲜冻原料刨片，用冻干机干燥至原料中的水分小于8%；磨粉：将冻干后的原料磨成冻干粉；脱脂：将冻干粉脱脂、滤干得脱脂冻干粉；激活、提取：向脱脂冻干粉中加入激活剂和提取溶剂，在0~5℃下搅拌提取3~6h，得提取液；沉淀：将所述提取液在0~5℃下冷冻离心后取上清液，盐析后分离得胰酶沉淀；压榨干燥：将胰酶沉淀压榨至呈块状得胰酶块；将胰酶块干燥后粉碎得胰酶粉。本发明专利技术胰酶产品收率较高，大大降低溶剂消耗，制备出的胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶的活性较高，胰酶收率较高。

Preparation of pancreatin

The present invention relates to the field of biological medicine, and discloses a method for preparing pancreatin, which comprises the following steps: fresh and frozen raw material: fresh frozen pancreas and / or duodenum; freeze-dried slice: fresh frozen material slicing, freeze drying machine for drying to the moisture of the raw material is less than 8%; grinding: after lyophilization the raw material into freeze-dried powder; skim: freeze-dried powder degreasing, filter dry skim powder; activation, extraction: to skim frozen adding activator and extraction solvent dry powder, stirring extraction at 0~5 deg. 3~6h, extract liquid; precipitation: the extract was frozen at 0~5 deg.c to obtain supernatant after centrifugation after the separation of pancreatin, salting out precipitation; press drying: the press to a block to precipitate pancreatin trypsin; trypsin will block after drying shattered pancreatin. The pancreatin product has high yield and greatly reduces solvent consumption, and the trypsin, amylase and pancreatic lipase activity in the pancreatin is higher, and the pancreatin yield is higher.

【技术实现步骤摘要】
胰酶的制备方法
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及一种胰酶的制备方法。
技术介绍
胰酶系各国药典收载的助消化药，是从动物胰脏中提取的多种酶的混合物，主要成分为胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶。胰酶主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障碍，同时也适用于先天性胰功能不全、腹部手术和外伤胰腺切除导致的胰功能不全。此外，胰酶中含有多种活性物质，可以作为基础原料从中提取多种生化药品，如胰激肽酶原，弹性蛋白酶，门冬酰胺酶，糜蛋白酶，羧肽酶等，具有重大的工业价值。目前胰酶主要采用原料绞碎处理、激活、低浓度有机溶剂提取、沉淀、脱脂、干燥、粉碎等步骤进行生产，如专利号为CN103215246B、名称为胰酶的新生产工艺的专利技术专利，其生产工艺为：(1)自然解冻原料：胰脏和十二指肠；(2)刨片、磨浆：将解冻后的原料用刨胰机刨片后用胶体磨磨浆；(3)激活、提取：向磨浆中加入原料重量0.2％～0.5％的CaCl2作为激活剂激活，同时加入原料重量1～2倍的10％～30％丙酮水溶液，搅拌均匀，放入提取罐内提取；(4)分离、过滤：将激活完毕的提取液用分离机分离、过滤，收集胰乳滤液；(5)沉淀：用预冷至-7℃～0℃的丙酮沉淀胰乳滤液，得沉淀液；(6)压榨：上述沉淀液装袋用螺旋千斤顶压榨至袋内残留物呈块状为止，得胰酶块状物；(7)脱脂：向盛装胰酶块状物的容器中加入预冷至0℃～5℃的原丙酮脱脂，脱脂结束后沥干脱脂丙酮；重复脱脂过程2～3次，完毕后，沥干丙酮并离心脱水，得胰酶块；(8)制粒、干燥：将胰酶块制粒；(9)干燥；干燥条件为：维持真空泵压力500～750mmHg，温度10～35℃，干燥6～10小时；(10)粉碎：将干燥的胰酶用除尘粉碎机粉碎成胰酶粉。（1）该专利直接使用解冻的新鲜胰脏或十二指肠为原料，在刨片磨浆后即进行激活、提取，此时的胰脏浆料含有大量的水分，直接对其进行激活和提取需要大量的激活剂和提取溶剂，增加生产成本；（2）由于未经过脱脂，所以胰脏浆料中含有大量的油脂，此时直接加入激活剂和提取溶液进行提取，油脂的存在不利于激活剂和提取液的渗透，影响提取效率，更不利于低温提取保护胰酶活性；（3）使用有机溶剂丙酮作为提取溶剂以及沉淀胰酶时的沉淀溶剂，而且该专利中还是在已经提取到胰酶之后才使用有机溶剂（丙酮）对其进行脱脂，使得有机溶剂消耗大，有机溶剂会对胰酶的活性造成不可避免的影响，且废液量大；（4）该专利中胰酶产品的主要指标组分胰蛋白酶活性在仅3500u/g左右，胰淀粉酶活性仅100000u/g左右，胰脂肪酶活性仅42000u/g左右，活性较低。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种胰酶的制备方法，胰酶产品收率较高，大大降低溶剂消耗，制备出的胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶的活性较高。技术方案：本专利技术提供了一种胰酶的制备方法，包括以下步骤：（1）鲜冻原料：鲜冻胰脏和/或十二指肠；（2）刨片冻干：将鲜冻原料刨片，用冻干机干燥至原料中的水分小于8%；（3）磨粉：将冻干后的原料磨成冻干粉；（4）脱脂：将所述冻干粉脱脂、滤干得脱脂冻干粉；（5）激活、提取：向所述脱脂冻干粉中加入激活剂和提取溶剂，在0~5℃下搅拌提取3~6h，得提取液；（6）沉淀：将所述提取液在0~5℃下冷冻离心后取上清液，盐析所述上清液后分离得胰酶沉淀；（7）压榨干燥：将所述胰酶沉淀压榨至呈块状得胰酶块；（8）将所述胰酶块干燥后粉碎得胰酶粉。优选地，在所述（4）中，将所述冻干粉脱脂的过程中，是在所述冻干粉中加入预冷至0～5℃、重量为所述脱脂冻干粉重量的1~2倍的丙酮对所述冻干粉进行脱脂。优选地，所述脱脂的次数为2~3次。优选地，在所述（5）中，所述激活剂为固体CaCl2优选地，所述固体CaCl2的重量占所述脱脂冻干粉重量的0.2～0.5%。优选地，所述提取溶剂为pH值为3~4的乙酸水溶液。优选地，所述乙酸水溶液与所述脱脂冻干粉的体积重量比为1~2：1。优选地，在所述（6）中，盐析时使用的盐为固体硫酸铵。优选地，盐析时加入所述固体硫酸铵直至所述固体硫酸铵在所述上清液中的饱和度大于或等于0.75。优选地，在所述（8）中，干燥所述胰酶块的干燥条件为：压力500～750mmHg，温度35～45℃，时间12～24h。有益效果：（1）本方法中先将胰脏或十二指肠原料经鲜冻、冻干、粉碎后制备成冻干粉，然后直接对冻干粉进行脱脂、激活、提取、沉淀得胰酶，由于胰脏冻干粉相对于新鲜胰脏来说，水分非常低（低于8%），对其进行脱脂后再激活、提取能够有效提高激活剂和提取溶剂在其中的渗透性，增加激活率和提取率，还能大幅度减少激活剂和提取溶剂的用量。（2）本方法中是先对冻干粉进行脱脂去除其中的油脂后，再对其进行激活和提取，由于没有油脂的阻碍作用，低温下（0~5℃）激活剂和提取溶剂能够发挥更好地渗透性，进一步提高激活率和提取率，而且，在脱脂后再进行激活和提取，能够从根源上避免提取后的胰酶脱脂时脱脂溶液（有机溶剂丙酮）对胰酶活性的影响。（3）本方法采用乙酸水溶液作为提取溶剂，并且是在低温下（0~5℃）提取，乙酸相对于有机溶剂丙酮来说，渗透性较弱，能够有效降低对胰酶活性的影响，而且，虽然乙酸的渗透性较低，但是并不会影响本方法中乙酸对胰酶的提取率，因为在本方法中是先脱脂后低温提取，脱脂后由于没有油脂的阻碍作用，再进行提取能够有效增加乙酸的渗透性，所以与
技术介绍
中提到的专利相比，提取率并没有因为我们使用了渗透性较弱的乙酸提取溶剂而降低。（4）本方法中使用盐析方法沉淀出胰酶沉淀，减少有机溶剂的使用，大大降低成本。（5）实验数据证明，本方法制备胰酶的收率达14%（与
技术介绍
中的专利相同），但是其中主要指标的组分：胰蛋白酶活性达4000u/g左右，胰淀粉酶活性达120000u/g左右，胰脂肪酶活性达50000u/g左右，可见，本方法制备的胰酶活性较高，远远超过普通胰酶标准。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细的介绍。实施方式1：（1）鲜冻原料：取冷冻胰脏5kg；（2）刨片冻干：将鲜冻胰脏用刨胰机刨片，用冻干机干燥至水分小于8%；（3）磨粉：将冻干后的胰脏磨成胰脏冻干粉；（4）脱脂：在胰脏冻干粉中加入预冷0~5℃的丙酮1L，脱脂2次，脱脂后滤干得脱脂胰脏冻干粉。（5）激活、提取：向脱脂胰脏冻干粉中加入20g的CaCl2作为激活剂，同时加入5LpH为3的乙酸水溶液作为提取溶剂，在0～5℃下搅拌提取6h，得提取液；（6）沉淀：提取液在0~5℃冷冻离心后取上清液，并向上清液中加入2.5kg固体硫酸铵进行盐析（此时固体硫酸钠在上清液中的饱和度大于0.75）后分离得胰酶沉淀；（7）压榨干燥：将上述胰酶沉淀装袋用螺旋千斤顶压榨至袋内胰酶沉淀呈块状为止，得胰酶块；（8）粉碎：将胰酶块干燥后用除尘粉碎机粉碎，得胰酶粉700g，干燥条件为：维持真空泵压力750mmHg，温度35℃，时间24h。实施方式2：（1）鲜冻原料：取冷冻十二指肠5kg；（2）刨片冻干：将鲜冻十二指肠用刨胰机刨片，用冻干机干燥至水分小于8%；（3）磨粉：将冻干后的十二指肠磨成十二指肠冻干粉；（4）脱脂：在十二指肠冻干粉中加入预冷0~5℃的丙酮2L，脱脂3次，脱脂后滤干得脱脂十二指肠冻干粉。（5）激活、提取：向脱十二指本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）鲜冻原料：鲜冻胰脏和/或十二指肠；（2）刨片冻干：将鲜冻原料刨片，用冻干机干燥至原料中的水分小于8%；（3）磨粉：将冻干后的原料磨成冻干粉；（4）脱脂：将所述冻干粉脱脂、滤干得脱脂冻干粉；（5）激活、提取：向所述脱脂冻干粉中加入激活剂和提取溶剂，在0~5℃下搅拌提取3~6h，得提取液；（6）沉淀：将所述提取液在0~5℃下冷冻离心后取上清液，盐析所述上清液后分离得胰酶沉淀；（7）压榨干燥：将所述胰酶沉淀压榨至呈块状得胰酶块；（8）将所述胰酶块干燥后粉碎得胰酶粉。

【技术特征摘要】
1.一种胰酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）鲜冻原料：鲜冻胰脏和/或十二指肠；（2）刨片冻干：将鲜冻原料刨片，用冻干机干燥至原料中的水分小于8%；（3）磨粉：将冻干后的原料磨成冻干粉；（4）脱脂：将所述冻干粉脱脂、滤干得脱脂冻干粉；（5）激活、提取：向所述脱脂冻干粉中加入激活剂和提取溶剂，在0~5℃下搅拌提取3~6h，得提取液；（6）沉淀：将所述提取液在0~5℃下冷冻离心后取上清液，盐析所述上清液后分离得胰酶沉淀；（7）压榨干燥：将所述胰酶沉淀压榨至呈块状得胰酶块；（8）将所述胰酶块干燥后粉碎得胰酶粉。2.根据权利要求1所述的胰酶的制备方法，其特征在于，在所述（4）中，将所述冻干粉脱脂的过程中，是在所述冻干粉中加入预冷至0～5℃、重量为所述脱脂冻干粉重量的1~2倍的丙酮对所述冻干粉进行脱脂。3.根据权利要求2所述的胰酶的制备方法，其特征在于，所述脱脂的次数为2~3次。4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘榜惠，
申请(专利权)人：淮安麦德森制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32