线粒体耳聋A1555G突变的荧光定量PCR检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种线粒体耳聋常见突变A1555G的荧光定量PCR检测试剂盒，包含定量PCR反应液、第一阳性对照品、第二阳性对照品、阴性对照品、说明书和盒体，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶、上游扩增引物、下游扩增引物、第一荧光探针和第二荧光探针。本发明专利技术提供的试剂盒，针对mtDNA第1555位点的A>G单碱基突变设计两条MGB探针，通过荧光定量PCR对耳聋相关性的线粒体第1555位核苷酸进行检测，明确该位点是否发生A>G突变，具有简便、快速、准确等优点，可应用于线粒体A1555G突变相关性耳聋的临床诊断和防治，也为A1555G突变导致的线粒体耳聋的预防和治疗提供依据。

Fluorescent quantitative PCR kit for detection of mitochondrial deafness A1555G mutation and its application

The invention provides a common mutation in mitochondrial deafness fluorescent quantitative PCR detecting kit A1555G, containing quantitative PCR reaction solution, the first positive control, second positive control, negative control, product specification and box body, wherein the quantitative PCR reaction liquid containing PCR buffer, MgCl2, dNTPs, DNA polymerase, upstream primer resistant first, the downstream primers, second fluorescent probes and fluorescent probes. The kit provided by the invention, the mtDNA 1555th locus A> G single nucleotide mutation design two MGB probes were detected by fluorescence quantitative PCR on mitochondrial deafness related nucleotide 1555th, clear the site is A> G mutation, has the features of simple, rapid and accurate, and can be applied to the mitochondrial A1555G mutation the clinical diagnosis and treatment related deafness, provide the basis for prevention and treatment of deafness caused by mutations of mitochondrial and A1555G.

【技术实现步骤摘要】
线粒体耳聋A1555G突变的荧光定量PCR检测试剂盒及其应用
本专利技术属分子生物学和基因工程
，具体涉及一种线粒体耳聋A1555G突变的荧光定量PCR检测试剂盒，及其在线粒体耳聋A1555G突变检测中的应用。
技术介绍
耳聋是全球关注的公共卫生问题，由遗传和环境因素共同作用引起，其中超过50％的耳聋患者由遗传因素导致。在遗传性耳聋中，30％为综合征耳聋，70％为非综合征耳聋。耳聋的遗传方式可表现常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X连锁遗传和母系遗传，线粒体DNA(mtDNA)突变是母系遗传性耳聋发生的重要原因之一，在遗传性耳聋中的发病率约为1％～2％。位于mtDNA12SrRNA上的A1555G突变是氨基糖苷类抗生素如链霉素、庆大霉素、卡那霉素等的作用靶点，与药物性耳聋的发生密切相关。该突变的主要致聋机制是人类mtDNA的第1555位核苷酸相当于细菌16SrRNA的第1491位核苷酸，当发生A1555G突变时，mtDNA12SrRNA的A区能形成一个新的碱基配对，导致12SrRNA的二级结构与细菌16SrRNA对应部位的相似度更高，从而促进氨基糖苷类抗生素与之结合，结合后的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种线粒体耳聋A1555G突变的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液、第一阳性对照品、第二阳性对照品、阴性对照品组成，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶、上游扩增引物、下游扩增引物、第一荧光探针和第二荧光探针；上游扩增引物序列为：5’‑CATTTAACTAAAACCCCTACGCATTT‑3’下游扩增引物序列为：5’‑GCACTTTCCAGTACACTTACCATGTT‑3’第一荧光探针序列为：5’‑FAM‑AGGAGGCAAGTCG‑MGB‑3’第二荧光探针序列为：5’‑HEX‑TAGAGGAGACAAGTCG‑MGB‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种线粒体耳聋A1555G突变的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液、第一阳性对照品、第二阳性对照品、阴性对照品组成，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶、上游扩增引物、下游扩增引物、第一荧光探针和第二荧光探针；上游扩增引物序列为：5’-CATTTAACTAAAACCCCTACGCATTT-3’下游扩增引物序列为：5’-GCACTTTCCAGTACACTTACCATGTT-3’第一荧光探针序列为：5’-FAM-AGGAGGCAAGTCG-MGB-3’第二荧光探针序列为：5’-HE...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒强，尚世强，李伟，陶然，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33