VEGF变体多肽组合物制造技术

本文提供了VEGF变体多肽和Fc‑VEGF变体多肽融合体，其包含通过肽接头或二硫桥连接至第二VEGF单体的第一VEGF单体。在一些实施方案中，VEGF变体多肽包括下式：A‑L‑B，其中A为第一VEGF单体亚基；B为第二VEGF单体亚基；并且L为具有14至20个氨基酸的肽接头。在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体的血管生成病症的方法，所述方法包括向个体施用VEGF变体多肽或Fc‑VEGF变体多肽融合体。在某些实施方案中，本文公开了包括VEGF变体多肽或Fc‑VEGF变体多肽的试剂盒。

VEGF variant polypeptide composition

This paper provides a variant of VEGF peptide and Fc peptide fusion VEGF variant, which comprises a first VEGF monomer is connected to the second VEGF monomer by peptide or two sulfur bridge joint. In some embodiments, the VEGF variant polypeptide comprises the following formula: A L B, where A is the first VEGF monomer subunit; B second VEGF monomer subunit; and L peptide linker with 14 to 20 amino acids. In some embodiments, the disclosed method angiogenic disorders need individual treatment, said method comprising administering to the VEGF or Fc VEGF variant polypeptides variant polypeptides fusion. In some embodiments, the disclosed kit includes VEGF or Fc variant polypeptides VEGF variant polypeptides.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】VEGF变体多肽组合物交叉参考本申请要求2015年1月16日提交的美国临时专利申请序列号62/104,590和2015年1月16日提交的美国临时专利申请序列号62/104,588和2015年1月16日提交的美国临时专利申请序列号62/104,621的权益，每个所述临时专利申请以引用的方式整体并入本文。专利技术概述在某些实施方案中，本文公开了包含通过肽接头或二硫桥连接至第二VEGF单体的第一VEGF单体的VEGF变体多肽。在一些实施方案中，VEGF变体多肽包括下式：A-L-B，其中A为第一VEGF单体亚基；B为第二VEGF单体亚基；并且L为具有14至20个氨基酸的肽接头。在一些实施方案中，L为具有选自以下的式的肽接头：(GS)n，其中n为6至15的整数；(G2S)n，其中n为4至10的整数；(G3S)n，其中n为3至8的整数；(G4S)n，其中n为2至6的整数；(G)n，其中n为12至30的整数；以及(S)n，其中n为12至30的整数。在一些实施方案中，L选自由以下组成的组：GSTSGSGKSSEGKGGGGGS(SEQIDNO:42)；GGGGSGGGGSGGGG(SEQIDNO:43)；和GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:44)。在一些实施方案中，VEGF变体多肽包括下式：A-L1-B-(L2-A-L1-B)n-L2-A-L1-B，其中A为第一VEGF单体亚基，B为第二VEGF单体亚基，L1为具有14至20个氨基酸的肽接头；L2为肽接头；并且n为0至4的整数。在一些实施方案中，L1为具有选自以下的式的肽接头：(GS)n，其中n为6至15的整数；(G2S)n，其中n为4至10的整数；(G3S)n，其中n为3至8的整数；(G4S)n，其中n为2至6的整数；(G)n，其中n为12至30的整数；以及(S)n，其中n为12至30的整数。在一些实施方案中，L1选自由以下组成的组：GSTSGSGKSSEGKGGGGGS(SEQIDNO:42)；GGGGSGGGGSGGGG(SEQIDNO:43)；和GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:44)。在一些实施方案中，L2选自由以下组成的组：(GS)n，其中n＝10-30；(G2S)n，其中n＝6-20；(G3S)n，其中n＝5-15；(G4S)n，其中n＝4-12；(G)n，其中n＝20-60；以及(S)n，其中n＝20-60。在一些实施方案中，VEGF变体多肽为双功能拮抗剂。在一些实施方案中，VEGF变体多肽拮抗VEGFR、整联蛋白或其组合。在一些实施方案中，VEGFR为VEGFR1。在一些实施方案中，VEGFR为VEGFR2。在一些实施方案中，整联蛋白为αvβ3、αvβ5或α5β1整联蛋白或其任何组合。在一些实施方案中，至少一个VEGF单体亚基为VEGF-A单体。在一些实施方案中，VEGF-A单体为VEGF165。在一些实施方案中，VEGF-A单体为VEGF165b。在一些实施方案中，VEGF-A单体为VEGF121。在一些实施方案中，VEGF-A单体为VEGF145。在一些实施方案中，VEGF-A单体为VEGF189。在一些实施方案中，VEGF-A单体为VEGF206。在一些实施方案中，至少一个VEGF单体亚基为VEGF-B亚基。在一些实施方案中，至少一个VEGF单体亚基为VEGF-C亚基。在一些实施方案中，至少一个VEGF单体亚基为VEGF-D亚基。在一些实施方案中，至少一个VEGF单体亚基为PlGF。在一些实施方案中，第一VEGF单体亚基和第二VEGF单体亚基各自独立地为VEGF-A单体。在一些实施方案中，第一VEGF单体亚基包含选自由以下组成的组的突变：V14A、V14I、V15A、K16R、F17L、M18R、D19G、Q22R、R23K、I29V、L32S、I35V、F36L、F36S、D41N、E42K、E44G、Y45H、F47S、K48E、P49L、S50P、P53S、G58S、C60Y、D63H、D63N、D63G、I76T、M78V、M81T、M81V、R82G、H86Y、Q87R、Q89H、H90R、I91T、I91V、N100D和K101E。在一些实施方案中，第一VEGF单体亚基包含选自由F36L、E44G、D63G和Q87R组成的组的突变。在一些实施方案中，第一VEGF单体亚基包含选自由F36L、E44G和Q87R组成的组的突变。在一些实施方案中，第二VEGF单体亚基包含选自由以下组成的组的突变：V14A、V14I、V15A、K16R、F17L、M18R、D19G、Q22R、R23K、I29V、L32S、I35V、F36L、F36S、D41N、E42K、E44G、Y45H、F47S、K48E、P49L、S50P、P53S、G58S、C60Y、D63H、D63N、D63G、I76T、M78V、M81T、M81V、R82G、H86Y、Q87R、Q89H、H90R、I91T、I91V、N100D和K101E。本领域的技术人员应该理解，关于VEGF单体的“第一”和“第二”的指示始终为任意区别，并且任一链可以为“第一”或“第二”。在一些实施方案中，第二VEGF单体亚基包含选自由K16R、D41N和D63N组成的组的突变。在一些实施方案中，第二VEGF单体亚基包含选自由D63N组成的组的突变。在一些实施方案中，第一VEGF单体亚基或第二VEGF单体亚基或两者包含RGD环。在一些实施方案中，RGD环与选自由SEQIDNO:1-40、66-72组成的组的序列至少90％、至少95％、至少99％或100％相同。在一些实施方案中，含有RGD的环置换第一VEGF单体亚基或第二VEGF单体亚基的环1、环2或环3或其任何组合。在一些实施方案中，VEGF变体多肽与mE7I(SEQIDNO:75)的序列至少90％、至少95％、至少99％或100％相同。在一些实施方案中，VEGF变体多肽与mA7I(SEQIDNO:76)的序列至少90％、至少95％、至少99％或100％相同。在一些实施方案中，VEGF变体多肽与mJ7I(SEQIDNO:77)的序列至少90％、至少95％、至少99％或100％相同。在一些实施方案中，VEGF变体多肽与mE7I-R1null(SEQIDNO:78)的序列至少90％、至少95％、至少99％或100％相同。在一些实施方案中，VEGF变体多肽还包含毒素。在一些实施方案中，毒素选自由以下组成的组：假单胞菌属外毒素(PE)、白喉毒素(DT)、蓖麻毒素、相思豆毒素、炭疽热毒素、志贺毒素、肉毒杆菌毒素、破伤风毒素、霍乱毒素、刺尾鱼毒素、水螅毒素(palytoxin)、雪卡毒素、组织毒素、蟾毒素、α芋螺毒素、太攀蛇毒素(taipoxin)、河豚毒素、α蝎毒素(tityustoxin)、蛤蚌毒素、类毒素、微囊藻素、乌头碱、表皮剥脱毒素A、表皮剥脱毒素B、肠毒素、中毒性休克综合征(TSST-I)、鼠疫杆菌毒素和气性坏疽毒素。在一些实施方案中，毒素连接至VEGF变体的N末端。在一些实施方案中，毒素连接至VEGF变体的C末端。在一些实施方案中，毒素连接至第一VEGF单体亚基或第二VEGF单体亚基。在某些实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种VEGF变体多肽，其包括下式：A‑L‑B，其中A为第一VEGF单体亚基；B为第二VEGF单体亚基；并且L为具有选自以下的式的肽接头：(GS)n，其中n为6至15的整数；(G2S)n，其中n为4至10的整数；(G3S)n，其中n为3至8的整数；(G4S)n，其中n为2至6的整数；(G)n，其中n为12至30的整数；以及(S)n，其中n为12至30的整数。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.16 US 62/104,590;2015.01.16 US 62/104,588;1.一种VEGF变体多肽，其包括下式：A-L-B，其中A为第一VEGF单体亚基；B为第二VEGF单体亚基；并且L为具有选自以下的式的肽接头：(GS)n，其中n为6至15的整数；(G2S)n，其中n为4至10的整数；(G3S)n，其中n为3至8的整数；(G4S)n，其中n为2至6的整数；(G)n，其中n为12至30的整数；以及(S)n，其中n为12至30的整数。2.如权利要求1所述的VEGF变体多肽，其包括下式：A-L1-B-(L2-A-L1-B)n-L2-A-L1-B，其中A为第一VEGF单体亚基，B为第二VEGF单体亚基，L1为具有14至20个氨基酸的肽接头；L2为肽接头；并且n为0至4的整数。3.如权利要求2所述的VEGF变体多肽，其中L1为具有选自以下的式的肽接头：(GS)n，其中n为6至15的整数；(G2S)n，其中n为4至10的整数；(G3S)n，其中n为3至8的整数；(G4S)n，其中n为2至6的整数；(G)n，其中n为12至30的整数；以及(S)n，其中n为12至30的整数。4.如权利要求1或2所述的VEGF变体多肽，其中L或L1选自由以下组成的组：GSTSGSGKSSEGKGGGGGS(SEQIDNO:42)；GGGGSGGGGSGGGG(SEQIDNO:43)；和GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:44)。5.如权利要求2或3所述的VEGF变体多肽，其中L2选自由以下组成的组：(GS)n，其中n＝10-30；(G2S)n，其中n＝6-20；(G3S)n，其中n＝5-15；(G4S)n，其中n＝4-12；(G)n，其中n＝20-60；以及(S)n，其中n＝20-60。6.如权利要求1-5中任一项所述的VEGF变体多肽，其中所述VEGF变体多肽为双功能拮抗剂。7.如权利要求1-6中任一项所述的VEGF变体多肽，其中所述VEGF变体多肽拮抗VEGFR、整联蛋白或其组合。8.如权利要求7所述的VEGF变体多肽，其中所述VEGFR为VEGFR1或VEGFR2。9.如权利要求7所述的VEGF变体多肽，其中所述整联蛋白为αvβ3、αvβ5或α5β1整联蛋白或其任何组合。10.如权利要求1-9中任一项所述的VEGF变体多肽，其中至少一个所述VEGF单体亚基为VEGF-A单体。11.如权利要求10所述的VEGF变体多肽，其中所述VEGF-A单体为VEGF165；VEGF165b；VEGF121；VEGF145；VEGF189；VEGF206中的一个。12.如权利要求1-9中任一项所述的VEGF变体多肽，其中至少一个所述VEGF单体亚基为VEGF-B亚基；VEGF-C亚基；VEGF-D亚基；PlGF。13.如权利要求1-9中任一项所述的VEGF变体多肽，其中所述第一VEGF单体亚基和所述第二VEGF单体亚基各自独立地为VEGF-A单体。14.如权利要求13所述的VEGF变体多肽，其中一个VEGF单体亚基包含选自由以下组成的组的至少一个突变：V14A、V14I、V15A、K16R、F17L、M18R、D19G、Q22R、R23K、I29V、L32S、I35V、F36L、F36S、D41N、E42K、E44G、Y45H、F47S、K48E、P49L、S50P、P53S、G58S、C60Y、D63H、D63N、D63G、I76T、M78V、M81T、M81V、R82G、H86Y、Q87R、Q89H、H90R、I91T、I91V、N100D和K101E。15.如权利要求14所述的VEGF变体多肽，其中一个VEGF单体亚基包含选自由F36L、E44G、D63G和Q87R组成的组的至少一个突变。16.如权利要求14所述的VEGF变体多肽，其中一个VEGF单体亚基包含选自由F36L、E44G和Q87R组成的组的至少一个突变。17.如权利要求14所述的VEGF变体多肽，其中一个VEGF单体亚基包含选自由以下组成的组的至少一个的突变：V14A、V14I、V15A、K16R、F17L、M18R、D19G、Q22R、R23K、I29V、L32S、I35V、F36L、F36S、D41N、E42K、E44G、Y45H、F47S、K48E、P49L、S50P、P53S、G58S、C60Y、D63H、D63N、D63G、I76T、M78V、M81T、M81V、R82G、H86Y、Q87R、Q89H、H90R、I91T、I91V、N100D和K101E。18.如权利要求14所述的VEGF变体多肽，其中所述VEGF单体亚基包含选自由K16R、D41N和D63N组成的组的至少一个突变。19.如权利要求14所述的VEGF变体多肽，其中所述VEGF单体亚基包含D63N突变。20.如权利要求1-19中任一项所述的VEGF变体多肽，其中所述第一或所述第二VEGF...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹妮弗·R·科克伦，希文·卡普尔，马克·S·博鲁门克兰兹，
申请(专利权)人：小利兰斯坦福大学理事会，
类型：发明
国别省市：美国,US