本发明专利技术公开了一种深绿卷柏提取物及其在制备痴呆症药物方面的应用。将深绿卷柏经过乙醇水溶液提取，再对提取液浓缩后进行柱层析，用乙醇水溶液洗脱，收集体积分数65‑90%的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液；将收集的洗脱液浓缩、干燥得到深绿卷柏提取物。经过动物实验证明，该提取物对痴呆症的治疗是有效的；且提取物的制备方法具有毒性低，成本低，时间短等特点。
Selaginella extract and its application in the preparation of drugs for dementia
The invention discloses a Selaginella extract and its application in the preparation of dementia drugs. After the Selaginella doederleinii aqueous ethanol extraction, then the extract was concentrated on column chromatography, eluted with ethanol water solution, aqueous solution of ethanol volume fraction of 65 collected 90% eluted with the eluent; collect the eluent is concentrated and dried to obtain Selaginella extract. It has been proved by animal experiments that the extract is effective for the treatment of dementia, and the preparation method of the extract has the characteristics of low toxicity, low cost and short time.
【技术实现步骤摘要】
深绿卷柏提取物及其在制备痴呆症药物方面的应用
本专利技术涉及深绿卷柏提取物及其在制备痴呆症药物方面的应用。
技术介绍
深绿卷柏含双黄酮、生物碱、木质素、有机酸等化合物，具有良好的消肿止痛，祛风散寒，止血生肌的功效，而最近的研究也表明深绿卷柏具有一定的抗癌作用。痴呆症是一种因脑部伤害或疾病所导致的渐进性认知功能退化，且此退化的幅度远高于正常老化的进展，痴呆症会影响到记忆、注意力、语言、解题能力，严重时会无法分辨人事时地物。最常见的痴呆症种类是老年痴呆症(即阿尔兹海默氏症)。其典型之起始症状为记忆障碍。病人会遗忘刚刚发生的事(短期记忆差)，而较久以前的记忆(长期记忆)则相对在发病初期不受影响。目前，并没有发现深绿卷柏提取物可以用于治疗痴呆症。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是，提供一种可以用于制备痴呆症药物的深绿卷柏提取物，并提供深绿卷柏提取物有效部位的提取方法。本专利技术的技术方案是，提供深绿卷柏提取物在制备痴呆症药物方面的应用。本专利技术还提供一种深绿卷柏提取物，将深绿卷柏经过乙醇水溶液提取，再对提取液浓缩后进行柱层析，用乙醇水溶液洗脱，收集体积分数65-90％的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液；将收集的洗脱液浓缩、干燥得到深绿卷柏提取物。优选地，收集体积分数75-85％的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液。优选地，柱层析使用聚酰胺柱或/和羟丙基葡聚糖凝胶柱。优选地，所述柱层析包括两次，第一次柱层析使用聚酰胺色谱柱，第二次柱层析使用羟丙基葡聚糖凝胶柱。优选地，第一次柱层析先用体积分数40％以下的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液A，再用体积分数60％以上的乙醇水溶液洗脱得到洗脱液B；洗脱液B浓缩后再进行第二次柱层析。优选地，第一次柱层析先用体积分数30％以下的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液A，再用体积分数80％以上的乙醇水溶液洗脱得到洗脱液B；洗脱液B浓缩后再进行第二次柱层析。优选地，第一次柱层析先用体积分数30％的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液A，再用体积分数90％的乙醇水溶液洗脱得到洗脱液B；洗脱液B浓缩后再进行第二次柱层析。优选地，第二次柱层析先用体积分数50％以下的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液C；再用体积分数65-90％的乙醇水溶液洗脱得到洗脱液D；洗脱液D经浓缩后得到深绿卷柏提取物。优选地，所述第二次柱层析先用体积分数50％的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液C；再用体积分数75-85％的乙醇水溶液洗脱得到洗脱液D；洗脱液D经浓缩后得到深绿卷柏提取物。优选地，对深绿卷柏全草进行提取。优选地，用乙醇水溶液对深绿卷柏进行回流提取。优选地，用体积分数40-80％的乙醇水溶液对深绿卷柏进行提取。作用于痴呆症的靶酶有很多种，虽然某些药物单体对其中某种靶酶的抑制效果较好，但是仍难以有效地作用于痴呆症。本专利技术为保证药物的有效性，需要对深绿卷柏提取物进行选择性地分离和提纯。乙醇水溶液的提取和洗脱都大大地降低了溶剂毒性，基于吸附作用，使用不同浓度的洗脱剂进行两次柱层析纯化，可以缩短纯化的时间，也可以充分回收溶剂。经实验对比，本专利技术发现低浓度的乙醇水溶液(如体积分数30％以下)不能洗脱出药物的有效部位，有效部位主要富集于由体积分数80％左右的乙醇水溶液的洗脱出的洗脱液中。本专利技术的有益效果是，提供一种深绿卷柏提取物，经过动物实验证明，该提取物对痴呆症的治疗是有效的；本专利技术还提供该深绿卷柏提取物的制备方法，且该制备方法具有毒性低，成本低，时间短等特点。附图说明图1表示本专利技术初步确定的最佳提取工艺，(图1中的百分数表示对应浓度的乙醇提取液，如30％乙醇部位表示体积分数30％的乙醇水溶液洗脱出的部位)。图2表示Morris水迷宫空间探索试验动物活动轨迹图(A：正常对照组；B：模型对照组；C：SLJB-FLA低剂量组；D：SLJB-FLA高剂量组)。图3表示Morris水迷宫测试试验动物活动轨迹图(A：正常对照组；B：模型对照组；C：SLJB-FLA低剂量组；D：SLJB-FLA中剂量组；E：SLJB-FLA高剂量组)。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例11.深绿卷柏提取物的制备初步确定最佳制备工艺：药材经含水乙醇提取2次，醇沉，提取液浓缩经聚酰胺色谱柱吸附后，收集95％乙醇洗脱液，再经SephadexLH20，收集80％乙醇洗脱部分，浓缩，冷冻干燥即得。其对应的提取工艺如图1所示，图1中，30％部位即表示体积分数为30％的乙醇水溶液洗脱的部位。本实施例最后得到的有效部位是80％乙醇洗脱的部位，实验中用代号SLJB-FLA表示该有效部位。2.有效部位(SLJB-FLA)对D-半乳糖拟痴呆小鼠学习记忆的影响2.1试验材料2.1.1供试品SLJB-FLA，为棕褐色粉末，由上述实验得到的深绿卷柏提取物。2.1.2溶媒羧甲基纤维素钠(CMC-Na)(批号：20150210，国药集团化学试剂有限公司产品)。配制方法：称取CMC-Na以蒸馏水加热搅拌溶解，配制成0.5％CMC-Na溶液，放置4℃冰箱中保存，每周配制一次。2.1.3主要仪器Morris水迷宫，成都泰盟科技技术有限公司。2.1.4实验动物雄性SD小鼠32，SPF级，体重19.8～22.g，动物合格证号：No.43004700021508，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2011-0003；在湖南省药物安全评价研究中心屏障环境饲养。2.2试验方法2.2.1造模与分组雄性ICR小鼠32只，体重18～22g，按体重随机分为模型对照组、供试品低剂量(40mg/kg)、高剂量(80mg/kg)，每组8只，另取8鼠作为正常对照组。其余小鼠皮下注射D-半乳糖120mg/kg，每天1次，连续56天(8周)，正常对照组颈背部皮下注射等容积生理盐水。注射14天后，各组分别灌胃给予相应药液，连续给药6周，末次给药后进行水迷宫定位航行与空间探索试验检测行为学检测。2.2.2检测指标(a)水迷宫定位航行试验历时3天，检测小鼠空间记忆的获得能力。将平台固定于第3象限的中央，水池中注入自来水，倒入白色染料使平台不可见，水位高于平台1.5cm。实验过程中水温稳定在25℃±1℃，水迷宫位置及周围环境(如实验人员、工作台、椅子、门、窗、动物饲养架、墙壁、电灯等)保持不变。每天每只动物测试3次，测试前先将动物放在平台上适应10s，随机选取3个入水点，检测60s，若找到平台则让其在平台上停留10s再归笼，若未找到平台则引导至平台，停留10s(潜伏期记为60s)。系统自动记录动物找到平台的时间(逃避潜伏期/总时间)、目标象限停留时间比率、目标象限游程比率、总路程、平均速度等指标评价小鼠学习记忆能力。(b)水迷宫空间探索实验第4天撤除平台，检测动物对平台空间位置的准确记忆，即空间记忆的保持能力。从原实台的对角象限中点将动物面向池壁放入水中，系统记录动物在60s内穿越原实台象限的次数(穿台次数)、原平台象限游程比率及停留时间比率、总路程、平均速度等指标。(图2)2.2.3数据处理与统计分析采用SPSS16.0进行统计分析。计量资料采用均数±标准差(x±s)。用Leven’stest方法检验正态性和方差齐性，如果符合正态性和方差齐性，用单因素方差分析(One-wayANOVA)和postHocL本文档来自技高网...
【技术保护点】
深绿卷柏提取物在制备痴呆症药物方面的应用。
【技术特征摘要】
1.深绿卷柏提取物在制备痴呆症药物方面的应用。2.一种深绿卷柏提取物，其特征在于，将深绿卷柏经过乙醇水溶液提取，再对提取液浓缩后进行柱层析，用乙醇水溶液洗脱，收集体积分数65-90%的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液；将收集的洗脱液浓缩、干燥得到深绿卷柏提取物。3.如权利要求2所述的深绿卷柏提取物，其特征在于，所述柱层析包括两次，第一次柱层析使用聚酰胺色谱柱，第二次柱层析使用羟丙基葡聚糖凝胶柱。4.如权利要求3所述的深绿卷柏提取物，其特征在于，第一次柱层析先用体积分数40%以下的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液A，再用体积分数60%以上的乙醇水溶液洗脱得到洗脱液B；洗脱液B浓缩后再进行第二次柱层析。5.如权利要求3所述的深绿卷柏提取物，其特征在于，第一次柱层析先用体积分数30%以下的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液A，再用体积分数80%以上的乙醇水...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭桂山，邹振兴，徐康平，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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