一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法技术

本发明专利技术公开了一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法，包括以下步骤：选取鸭胚的卵巢组织，将卵巢组织置于灭菌PBS中，将卵巢组织剪碎；在剪碎的卵巢组织碎片中加入混合酶消化液，将卵巢组织碎片和混合酶消化液置于细口消化瓶中，并放置在摇床上进行消化处理；用移液枪吹打卵巢组织碎片，加入胎牛血清终止消化，用细胞筛网过滤；收集滤液，并进行离心处理；弃滤液，在沉淀的细胞中加细胞培养基，用移液器轻柔吹打，使细胞悬浮，将细胞悬浮液铺板培养皿；分离提取得到基于鸭胚的卵母细胞。本发明专利技术不需要解剖成年家禽，减少细胞污染并且减少了试验成本，能够快速高效的获取卵母细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法
本专利技术属于家禽育种
，具体地说，涉及一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法。
技术介绍
目前，在家畜中卵母细胞体外成熟是一项繁殖生物技术，通过体外成熟培养卵巢有腔卵泡来源的卵母细胞可以为育种、克隆及转基因动物提供丰富的卵源，并且该技术已经在生产上被广泛应用。在此技术中最重要的就是分离出大量并且活性好的卵母细胞，在此方面家畜研究已经非常成熟，然而家禽却鲜有报道。现研究报道中，家畜卵母细胞体外培养是采用胶原酶消化法从腔前卵泡获得到大量来源于0.2-0.3mm腔前卵泡的卵母细胞-颗粒细胞复合物。但是该方法提取并非单一的卵母细胞，影响后续研究，并且对于卵泡结构与哺乳动物不一样的家禽来说该方法是不适合的，因为家禽卵泡体积不仅比家畜小并且卵泡中还有大量的卵黄，影响卵母细胞提取。现有的方法一般选取成年家畜分离提取卵母细胞，这样耗时长。为了全面了解蛋鸭卵母细胞成熟期间的生理过程，本专利技术提供了一种低成本，省时，高效的蛋鸭卵母细胞分离提取方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对上述的问题，提供了一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法。为了解决上述技术问题本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选取鸭胚的卵巢组织4‑6个，将卵巢组织置于灭菌PBS中，将卵巢组织剪碎；步骤2、在剪碎的卵巢组织碎片中加入10ml混合酶消化液，将卵巢组织碎片和混合酶消化液置于细口消化瓶中，并放置在摇床上进行消化处理；步骤3、用移液枪吹打卵巢组织碎片，加入胎牛血清终止消化，用细胞筛网过滤；步骤4、收集滤液，并进行离心处理；弃滤液，在沉淀的细胞中加细胞培养基，移液器轻柔吹打20‑30次，使细胞悬浮，将细胞悬浮液铺板培养皿；分离提取得到基于鸭胚的卵母细胞。

【技术特征摘要】
1.一种基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选取鸭胚的卵巢组织4-6个，将卵巢组织置于灭菌PBS中，将卵巢组织剪碎；步骤2、在剪碎的卵巢组织碎片中加入10ml混合酶消化液，将卵巢组织碎片和混合酶消化液置于细口消化瓶中，并放置在摇床上进行消化处理；步骤3、用移液枪吹打卵巢组织碎片，加入胎牛血清终止消化，用细胞筛网过滤；步骤4、收集滤液，并进行离心处理；弃滤液，在沉淀的细胞中加细胞培养基，移液器轻柔吹打20-30次，使细胞悬浮，将细胞悬浮液铺板培养皿；分离提取得到基于鸭胚的卵母细胞。2.根据权利要求1所述的基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法，其特征在于，所述步骤1中的鸭胚的胚龄为24-26天。3.根据权利要求1所述的基于鸭胚的卵母细胞的分离提取方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗茜，夏伟光，郑春田，陈伟，何静怡，董春琳，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44