一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法。具体而言，本发明专利技术优化了阳离子交换色谱分离纯化PEG‑G‑CSF，并进行适当的缓冲液置换制备PEG‑G‑CSF原液的方法，通过一步柱层析纯化并置换缓冲液即可获得HPLC、电泳纯度均在98％以上的PEG‑G‑CSF。本发明专利技术纯化工艺不仅简化了工艺路线，节省了生产时间，并且蛋白回收率高，获得的蛋白原液纯度高，加入适当的药用辅料即可制备成药物制剂，十分适合大规模工业化放大生产。

【技术实现步骤摘要】
一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法
本专利技术涉及高纯度药用蛋白质溶液的纯化领域，具体涉及聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(Peglylationrecombinanthumangranulocytecolonystimulatingfactor，PEG-G-CSF)修饰产物的纯化，属于医药

技术介绍
近几年来，随着生物技术的突飞猛进，越来越多的蛋白和多肽类药物被发现并成功的应用于人类疾病的治疗。其中，重组人粒细胞集落刺激因子(recombinanthumangranulocytecolonystimulatingfactor，rhG-CSF)是一个非常成功的基因工程药物。G-CSF由单核细胞及成纤维细胞产生，可刺激粒细胞集落形成，对中性粒细胞有刺激作用，因此常用于接受放射治疗或化疗的癌症病人以及骨髓移植后白血病患者的辅助治疗，其序列是公知的，如序列1所示。1991年，Amgen公司的rhG-CSF获得FDA批准上市用于化疗引起的中性粒细胞减少症的治疗，但是，由于蛋白药物自身的特性，该药物在临床上的使用受到了很大的限制，比如较短的体内半衰期、容易受到体内的酶解作用从本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，包括：将PEG‑G‑CSF修饰产物上样至Sepharose HP阳离子交换层析柱进行层析纯化，先采用缓冲液进行杂质洗脱，再采用缓冲液A液与B液进行线性梯度洗脱，收集样品峰。

【技术特征摘要】
2016.04.15 CN 20161023601381.一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，包括：将PEG-G-CSF修饰产物上样至SepharoseHP阳离子交换层析柱进行层析纯化，先采用缓冲液进行杂质洗脱，再采用缓冲液A液与B液进行线性梯度洗脱，收集样品峰。2.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液包含1-100mmol/L磷酸氢二钠–柠檬酸，pH为4.5-5.5，优选20mmol/L磷酸氢二钠–柠檬酸，pH为5.0。3.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液A包含1-100mmol/L磷酸氢二钠–柠檬酸，pH4.5-5.5，缓冲液B液包含1-100mmol/L磷酸氢二钠–柠檬酸，pH6.0-9.0，优选缓冲液A液包含20mmol/L磷酸氢二钠–柠檬酸，pH5.0，缓冲液B液包含20mmol/L磷酸氢二钠–柠檬酸，pH7.0。4.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于所述线性梯度洗脱的梯度体积为10-30倍柱体积，优选15倍柱体积。5.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于所述杂质洗脱的梯度体积为3-5倍柱体积，优选5倍柱体积。6.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，还包括在上样前对PEG-G-CSF修饰产物进行缓冲液置换的步骤。7.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，还包括将收集得到的纯化样品进行缓冲液置换的步骤。8.根据权利要求6或7所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，所述缓冲液置换的方法选自透析、脱盐柱层析、超滤中的一种或多种，所述超滤优选中空纤维超滤或膜包超滤。9.根据权利要求8所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，所述中空纤维超滤的超滤膜孔径为3KD-30KD，优选5KD或10KD，更优选为10KD。10.根据权利要求6或7所述的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，其特征在于，所述缓冲液置换使用的缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晨光，王宏伟，陈磊，汪铖，孙金星，孔祥林，汪军，
申请(专利权)人：江苏恒瑞医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32