染井吉野樱的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种染井吉野樱组培快繁方法，该以染井吉野樱半木质化单芽茎段及扦插繁殖萌发的小芽为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了吉野樱组培快速繁殖方法，建立了染井吉野樱组织培养快繁技术体系，为今后染井吉野樱组织培养繁殖苗木，加速樱花其他良种繁育满足市场需求提供技术支持。

Tissue culture and propagation method of Zomerai Yoshinosakura

The invention discloses a Zomerai Yoshinosakura micropropagation method, the Yoshino cherry semi lignified stem segment with single bud germination and cutting propagation of bud as explants, after sterilization of explants, early bud induction culture, proliferation, rooting, seedling cultivation of seedling and transplanting steps to establish the Yoshino Sakura tissue culture rapid propagation method the establishment of the system, Zomerai Yoshinosakura tissue culture propagation technology, seedling propagation for future Zomerai Yoshinosakura tissue culture, accelerate the Sakura other breeding to meet the market demand and provide technical support.

【技术实现步骤摘要】
染井吉野樱的组培快繁方法
本专利技术涉及园林植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种日本樱花－染井吉野樱组培快繁方法。
技术介绍
染井吉野樱(学名:Prunus×yedoensis)，又名东京樱花，是国内樱花市场上炙手可热的高档樱花品种，遗传分析是由大岛樱和小松乙女樱杂交产生，分别继承了两者花朵大和先花后叶的特点。花期3月中下旬，花朵有五枚花瓣，花色在花朵绽放时是淡红色，而在完全绽放时会逐渐转白，整株在叶子长出前就盛开略带淡红色的白花，丽而不媚，繁茂如云。经多年的选育提纯，成为日本樱花中的珍品，作为最受欢迎的樱花而推广到日本全国各地，被日本誉为樱花之花王。染井吉野樱生长健壮，树形潇洒，高度可达10至12米，是非常优秀的樱花品种，可孤植，可群植，也可作为行道树栽植。在北至辽宁、南至广东、东至上海、西至新疆等不同地域引种栽植并且生长良好，大连、北京、成都、上海、江西等地都有生长七十多年乃至百年的大树。它耐旱性强，耐盐碱，对土壤条件要求不严，各种土壤条件经改良后都能正常生长且长势良好。因为是人工育种，它无法自然结果繁衍，只能以插枝移植。但由于繁殖系数小，远不能满足造景需要，严重影响了染井吉野樱的的开发利用。因此有必要建立完整的染井吉野樱离体快繁体系，加速染井吉野樱种苗繁育以满足市场需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种樱花组培快速繁殖方法，本专利技术以染井吉野樱半木质化单芽茎段及扦插繁殖萌发的小芽为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了吉野樱组培快速繁殖方法，建立了染井吉野樱组织培养快繁技术体系，为今后染井吉野樱组织培养繁殖苗木，加速樱花其他良种繁育满足市场需求提供技术支持。本专利技术樱花组培快速繁殖方法中，所述外植体处理和消毒步骤包括：A、选取健壮吉野樱植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用洗衣粉水浸泡20-30min，再轻轻清洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流动的自来水冲洗2-4h后置于超净工作台中；在鼓风状态下于超净工作台上先用质量分数70-75％乙醇消毒8-15s后用无菌水清洗3-6次，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8-15min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后转接到芽初代诱导培养基中培养；或B、于冬末春初在壮龄树上选择一年生、生长健壮、生活力旺盛的发育枝条，剪有饱满芽的木质化或半木质化枝条作为插穗，插穗长度为10—15厘米，有2-3个芽；温室高架苗床上下铺电加热设施，上铺10cm厚的基质珍珠岩，扦插之前基质及插穗都用1000ppm浓度的多菌灵或福尔马林溶液消毒；插好之后采用电加热促进土壤升温从而加快插穗发芽，同时10天后对穗条用500ppm浓度的多菌灵溶液进行喷雾消毒减少有害微生物到最低状态；待20天新芽长到5-7cm左右时，切取几近未木质化的单芽茎段或顶芽作为外植体按A步骤进行常规消毒后置于超净工作台中；在鼓风状态下在超净工作台上先用70-75％酒精消毒3s后，用无菌水清洗3-6次，再用0.1％升汞溶液消毒8min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后转接到芽初代诱导培养基中培养。本专利技术方法中，所述芽初代诱导培养步骤为：将经过外植体处理和消毒处理后的染井吉野樱单芽茎段或顶芽切成1.5－2.5cm小段并接种到芽诱导培养基中，在MS+BA0.5－1.0mg/L+NAA0.02mg/L+TDZ2.0－3.0mg/L+蔗糖20－30克/L+琼脂5.5-6.5克/L中，先在22-25℃条件下全暗培养养5-7天，然后置于每天光照10-12小时，光照强度2000lx的培养室中培养，25天左右继代一次，直至诱导形成丛生芽。本专利技术方法中，所述增殖壮苗培养步骤为：将经过芽初代诱导培养获得的丛生芽分切成芽块至增殖壮苗培养基(1/2MS+BA0.5－0.8+NAA0.05-0.08)上进行继代培养，接种后置于每天光照10-12小时，光照强度为2000lx，培养温度22-25℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到健壮丛生芽。本专利技术方法中，所述生根培养步骤为：将增殖壮苗培养获得的高度约为2.5-3.5cm的健壮芽分切接种到生根培养基(1/2MS+NAA0.01-0.02)上进行生根培养，接种后先在22-25℃左右条件下暗培养0-5天，然后置于光照10-12小时，光照强度2000lx，培养温度为22-25℃左右的培养室中培养30-35天即可出瓶。本专利技术方法中，所述炼苗移栽步骤为：将经生根培养后获得的高约3.5-5.5cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去盖置于培养室光下炼苗3-5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，并用800-1000PPM多菌灵浸泡10min后栽入由泥炭土：珍珠岩＝7：3混合并用1000PPM多菌灵进行喷淋过的基质中；放于温室培养，栽后前5-10天精心管护，每天至少分5次给幼苗喷雾浇水，保持叶面湿度，移栽成活率达80％以上。待幼苗成活后再移栽大田。与已有技术相比，本专利技术有益效果体现在：本专利技术通过无性快繁技术快速获得大量染井吉野樱优良品种苗。以染井吉野樱半木质化单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了染井吉野樱组织培养快繁技术体系，为今后染井吉野樱组织培养繁殖苗木，加速樱花其他良种繁育满足市场需求提供技术支持。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：(1)外植体处理和消毒：选取健壮吉野樱植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用洗衣粉水浸泡20min，再轻轻清洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流动的自来水冲洗2h后置于超净工作台中。在鼓风状态下于超净工作台上先用质量分数75％乙醇消毒12s后用无菌水清洗5次，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒15min后用无菌水洗6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后备用；该方法的污染率高，达到90％。(2)芽初代诱导培养：将步骤(1)处理后的染井吉野樱半木质化单芽茎段切成1.5－2.5cm小段并接种到芽诱导培养基(MS+BA0.5+NAA0.02+TDZ2.0+蔗糖20克+琼脂5.8)中，先在22-25℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度2000lx的培养室中培养，25天左右继代一次，直至诱导形成丛生芽，丛生芽分化率为11.9；(3)增殖壮苗培养基：将步骤(2)培养获得的丛生芽分切至增殖壮苗培养基(1/2MS+BA0.8+NAA0.08)上进行继代培养，接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，培养温度为22-25℃的条件下培养，25-30天切割一次，多次反复切割进行继代培养，得到高度约为2.5-3.5cm的健壮丛生芽；(4)生根培养基：将步骤(3)获得的健壮芽分切接种到生根培养基(1/2MS+NAA0.02)上进行生根培养，接种后先在25℃左右条件下暗培养5天，然后置于光照12小时，光照强度2000lx，培养温度为22-25℃左右的培养室中培养，一般20天就可生根，30天即可出瓶，30天后试管苗高约3.5-5.5cm，有5-8个不定根，根系粗壮。(5)炼苗移栽：将步本文档来自技高网...

【技术保护点】
染井吉野樱组培快繁方法，其特征在于，所述方法以染井吉野樱半木质化单芽茎段或经扦插繁殖萌发的小芽为外植体，经过外植体处理和消毒、芽初代诱导培养、增殖壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽步骤建立染井吉野樱组织培养快繁体系。

【技术特征摘要】
1.染井吉野樱组培快繁方法，其特征在于，所述方法以染井吉野樱半木质化单芽茎段或经扦插繁殖萌发的小芽为外植体，经过外植体处理和消毒、芽初代诱导培养、增殖壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽步骤建立染井吉野樱组织培养快繁体系。2.根据权利要求1所述的染井吉野樱组培快繁方法，其特征在于，所述外植体处理和消毒步骤包括：A、选取健壮吉野樱植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用洗衣粉水浸泡20-30min，再轻轻清洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流动的自来水冲洗2-4h后置于超净工作台中；在鼓风状态下于超净工作台上先用质量分数70-75％乙醇消毒8-15s后用无菌水清洗3-6次，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8-15min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后转接到芽初代诱导培养基中培养；或B、于冬末春初在壮龄树上选择一年生、生长健壮、生活力旺盛的发育枝条，剪有饱满芽的木质化或半木质化枝条作为插穗，插穗长度为10—15厘米，有2-3个芽；温室高架苗床上下铺电加热设施，上铺10cm厚的基质珍珠岩，扦插之前基质及插穗都用1000ppm浓度的多菌灵或福尔马林溶液消毒；插好之后采用电加热促进土壤升温至22-25℃从而加快插穗发芽，同时10天后对穗条用500ppm浓度的多菌灵溶液进行喷雾消毒减少有害微生物到最低状态；待20天新芽长到5-7cm左右时，切取几近未木质化的单芽茎段或顶芽作为外植体按A步骤进行常规消毒后置于超净工作台中；在鼓风状态下在超净工作台上先用70-75％酒精消毒3s后，用无菌水清洗3-6次，再用0.1％升汞溶液消毒8min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后转接到芽初代诱导培养基中培养。3.根据权利要求1所述的染井吉野樱组培快繁方法，其特征在于，所述芽初代诱导培养步骤为：将经过外植体处理和消毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：许早时，朱谦，李春生，汪耀，熊翠林，张贤萍，李葵阳，殷勇，孟可，姚瑶，
申请(专利权)人：安徽省林业高科技开发中心，
类型：发明
国别省市：安徽,34