用于分析结构不同的复杂脂质的方法、组合物和试剂盒技术

本发明专利技术提供了用于合成代表存在于感兴趣样品中的脂质的结构多样性的脂质混合物的方法。根据本公开的方法产生的脂质的复杂混合物可以用作用于检测和定量感兴趣样品中的脂质的内部标准。还提供了包括内部标准的试剂盒及其用于检测和定量感兴趣的样品中的脂质的说明书。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分析结构不同的复杂脂质的方法、组合物和试剂盒相关申请的交叉引用本申请要求美国临时申请号为62/031099、申请日为2014年7月30日专利的优先权，将其公开的全部内容以引用的方式合并。
当前公开的主题涉及脂质合成的方法、组合物和试剂盒以及使用复合脂质的混合物作为内标，用于分析生物样品和其它含有复合脂质的样品。
技术介绍
使用内标校准样品中目标物的浓度是一种公认的定量方法。简而言之，一种化合物加入到没有出现过的待测样品中，满足两个条件：（1）内标的作用类似于目标化合物在样品制备的所有阶段（例如萃取、色谱等等）和（2）通过选择的检测方法区别于目标化合物。因此，如果知道加到样品中的内标的浓度，和检测相关的目标化合物与内标的反应（例如，峰面积），就可计算出起初样品中目标化合物的量。生物样品中的脂质的通过内标来定量仍然存在问题，因为甚至在已经给出的脂质种类中，脂质也具有不同的化学属性。脂质还具有组合复杂性，例如，许多潜在的脂肪酸中的几种被酰化到十几个骨架之一上。所以，少量的内标不能满足上述两个条件中的第一个。一般来说，分析师使用少量内部标准化合物，并且通常仅选择单一化合物来代表用作大类脂质（例如磷脂，中性脂质）的内标。对于广泛的标准的选择，历史上更多地涉及生物样品中化合物的缺乏以及合成化合物的合成的容易性，而不是标准与目标分析物的化学性质的相似性。大部分的脂质内标是从单一的奇数链或者短链脂肪酸（例如PC12:0/12:0或TAG17:0/17:0/17:0）中选择的。大部分的内标混合物对每个脂质大类采用单一内标。然而，目前开发内标的方法有限，因为：1）短链脂肪酸或者完全饱和脂肪酸内标在测定中不像靶化合物那样起作用；2）使用简单的内标策略难以表示脂质的组合复杂性。需要结构上不同的一组标准，其具有用于每个脂质类的适当的化学性质以用作内标。这样一组内标提供了广泛的化学多样性，从而更好地覆盖分析。概要本专利技术描述的是质谱分析中用到的内标的组分物、试剂盒以及使用方法。复合脂质是具有与其连接的多种脂肪酸阵列的脂质类。本文提供了合成和使用组合物和试剂盒的方法，所述组合物和试剂盒包括具有足够不同组成的脂质分子作为内标的混合物，以有效地表示本专利技术所提供的感兴趣样品中的复合脂质类的脂肪酸。合成的内标包含本专利技术所描述的特征。合成的内标可以包装成试剂盒供脂质分析用。本专利技术所述的脂质内标可用于任何应用，包括例如质谱法。在本专利技术公开的一个实施例中，提供了一种用于合成脂质分子的一种或多种混合物的方法，该脂质分子代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类的组成，所述方法包括：通过具有至少两个酰基的脂质类的酰化反应在脂质主链的第一位点连接同位素标记的脂肪酸；通过酰化反应将至少两种不同脂肪酸的混合物连接到脂质主链上的不同位点，其中所述脂肪酸混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。在本专利技术公开的一个实施例中，提供了一种用于合成脂质分子的一种或多种混合物的方法，该脂质分子代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类的组成，所述方法包括：通过具有至少一个酰基的脂质类的酰化反应将至少两种不同脂肪酸的混合物连接到同位素标记的脂质主链上的单个位点上，其中所述脂肪酸混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。在本专利技术公开的一个实施例中，提供了一种用作内标的组合物，其包含代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成的脂质分子的一种或多种混合物，每种脂质分子混合物包含：在脂质主链的第一位点具有同位素标记的脂肪酸的脂质主链，所述脂质主链用于具有至少两个酰基的脂质类；和存在于脂质主链上的不同位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。在本专利技术公开的一个实施例中，提供了一种用作内标的组合物，其包含代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成的脂质分子的一种或多种混合物，每种脂质分子混合物包含：具有一个或多个同位素标记的脂质主链，其中所述脂质主链用于具有至少一个酰基的脂质类；和存在于脂质主链上的单个位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。在本专利技术公开的一个实施例中，提供一种试剂盒，包括：ⅰ）用作内标的一种或多种脂质分子的混合物，其中，每种脂质分子混合物都代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类的每一种中的脂质分子种类的组成，每种脂质分子混合物包含：在脂质主链上的第一位点处具有同位素标记的脂肪酸的脂质主链和在脂质主链上的不同位点存在的至少两种不同脂肪酸的混合物，其中脂质主链用于至少具有两个酰基的脂质类，或具有一个或多个同位素标记的脂质主链，和存在于脂质主链上单个位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，其中脂质主链用于至少具有一个酰基的脂质类，其中所述脂肪酸混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，并且，脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在；ⅱ）使用所述一种或多种脂质分子混合物作为内标物用于检测和定量存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类的说明书。在本专利技术公开的一个实施例中，提供一种用于检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法，包含：向感兴趣的样品中加入已知量的具有一种或多种脂质分子混合物的组合物，所述混合物代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成，其中，每种脂质分子混合物包含ⅰ）在脂质主链的第一位点具有同位素标记的脂肪酸的脂质主链，所述脂质主链用于具有至少两个酰基的脂质类，和ⅱ）存在于脂质主链上的不同位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在；通过使用脂质分子的代表性混合物作为内标，检测和定量存在于目标样品中的相应脂质类中的脂质分子种类。在本专利技术公开的一个实施例中，提供一种用于检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法，包含：向感兴趣的样品中加入已知量的具有一种或多种脂质分子混合物的组合物，所述混合物代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成，其中，每种脂质分子混合物包含ⅰ）具有一个或多个同位素标记的脂质主链，其中所述脂质主链用于具有至少一个酰基的脂质类；和ⅱ）存在于脂质主链上的单个位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于合成脂质分子的一种或多种混合物的方法，该脂质分子代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类的组成，所述方法包括：通过具有至少两个酰基的脂质类的酰化反应在脂质主链的第一位点连接同位素标记的脂肪酸；和通过酰化反应将至少两种不同脂肪酸的混合物连接到脂质主链上的不同位点，其中所述脂肪酸混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.30 US 62/031，0991.一种用于合成脂质分子的一种或多种混合物的方法，该脂质分子代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类的组成，所述方法包括：通过具有至少两个酰基的脂质类的酰化反应在脂质主链的第一位点连接同位素标记的脂肪酸；和通过酰化反应将至少两种不同脂肪酸的混合物连接到脂质主链上的不同位点，其中所述脂肪酸混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质类包括三酰基甘油、甘油二酯、磷脂、磷脂酰胆碱、O-磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、p-磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、心磷脂、磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇，磷脂酰甘油，磷脂酸，CDP二酰基甘油，神经酰胺，乳糖基神经酰胺，葡糖基神经酰胺，植物神经酰胺，6-羟基神经酰胺，脑苷脂，神经节苷脂或蜡二酯。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述同位素标记包括2H、13C、15N。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-1位点、sn-2位点或者sn-3位点。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-1位点，所述脂质主链上的不同位点为sn-2位点或者sn-3位点。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-2，所述脂质主链上的不同位点为sn-1位点或者sn-3位点。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-3，所述脂质主链上的不同位点为sn-1位点或者sn-2位点。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质类包含磷脂酰胆碱和O-磷脂酰胆碱；所述第一位点为sn-1位点，且所述不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，所述不同位点为sn-1位点，其中氘标记的十六烷酰基-d9（16：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括9Z-十六碳烯酰基（16：1n7）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酰基（20：5n3）、7Z，10Z，13Z，16Z-二十二碳四烯酰基（22：4n6）、7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳五烯酰基（22：5n3）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表2所示的比例存在。10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述样品包含人体样品。11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质类包括磷脂酰乙醇胺和p-磷脂酰乙醇胺，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点；氘标记的十八烷酰基-d9（18：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酰基（20：5n3）、7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳五烯酰基（22：5n3）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表3所示的比例存在。13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述样品包含人体样品。14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质类包含鞘磷脂，氘标记的鞘氨醇存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16:0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、二十四酰基（24：0）和15Z-二十四烯酰基（24：1n9）。15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表4所示的比例存在。16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述样品包含人体样品。17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质类包含二酰基甘油，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点；氘标记的棕榈酸盐（16：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16：0）、十八烷酰基（18：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z-二十碳五烯酰基（20：5n3）、和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z二十二碳六烯酰基（22：6n3）。18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表6所示的比例存在。19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述样品包含人体样品。20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂质类包含三酰基甘油，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点或sn-3位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点或sn-3位点；或者所述第一位点为sn-3位点，不同位点为sn-1位点或sn-2位点；氘标记的棕榈酸盐（16：0-d9）存在于第一位点，油酸酯（18：1n9）存在于不同位点，在另一个不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16：0）、十八烷酰基（18：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z-二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z二十二碳六烯酰基（22：6n3）。21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表6所示的比例存在。22.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述样品包含人体样品。23.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的样品是生物样品。24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述生物样品包括植物样品、动物样品或者人体样品。25.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的生物样品包括血液，血浆，血清，分离的脂蛋白组分，唾液，尿液，淋巴液和脑脊液，组织样品，细胞样品，皮肤样品。26.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括进行定量脂肪酸分析以定量混合物中每种脂肪酸的量。27.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述同位素标记的脂肪酸是饱和脂肪酸。28.一种用于合成脂质分子的一种或多种混合物的方法，该脂质分子代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类的组成，所述方法包括：通过具有至少一个酰基的脂质类的酰化反应将至少两种不同脂肪酸的混合物连接到同位素标记的脂质主链上的单个位点，其中，脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂肪酸，并且，混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述脂质类包括三酰基甘油、二酰基甘油、游离脂肪酸、1-单酰甘油、磷脂、磷脂酰胆碱、o-磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、p-磷脂酰乙醇胺、胆固醇酯、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血CDP-二酰基甘油、CDP-二酰基甘油、鞘磷脂、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、神经酰胺、乳糖基神经酰胺、葡糖基神经酰胺、植物神经酰胺、6-羟基神经酰胺、脑苷脂、神经节苷脂、蜡酯、或蜡二酯。30.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述同位素标记包括2H、13C或者15N。31.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述脂质类包括胆固醇酯，所述单个位点为羟基，并且连接到羟基上的所述脂肪酸的混合物包括十六烷酸盐（16：0）、9Z-十六碳烯酸（16：1n7）、9Z-十八烯酸酯（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酸酯（18：2n6）、8Z，11Z，14Z-二十碳三烯酸酯（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酸酯（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酸酯（20：5n3）、4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酸酯（22：6n3）。32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，在羟基处的脂肪酸混合物以表7所示的比例存在。33.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述生物样品包含人体样本。35.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。36.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述生物样品包括植物样品或者人体样品。37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的样品包括血液，血浆，血清，分离的脂蛋白组分，唾液，尿液，淋巴液和脑脊液，组织样品，细胞样品，皮肤样品。38.如权利要求28所述的方法，还包括进行定量脂肪酸分析以定量混合物中每种脂肪酸的量。39.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述脂肪酸为饱和脂肪酸。40.一种用作内标的组合物，其包含代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成的脂质分子的一种或多种混合物，每种脂质分子混合物包含：在脂质主链的第一位点具有同位素标记的脂肪酸的脂质主链，所述脂质主链用于具有至少两个酰基的脂质类；和存在于脂质主链上的不同位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。41.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质类包含磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、CDP-二酰基甘油、神经酰胺、乳糖酰神经酰胺、葡糖基神经酰胺、植物神经酰胺、6-羟基神经酰胺、脑苷脂、神经节苷脂、神经节苷脂、或蜡二酯。42.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述同位素标记包括2H、13C或者15N。43.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂肪酸上的第一位点为sn-1位点、sn-2位点或者sn-3位点。44.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-1，所述脂质主链上的不同位点为sn-2位点或者sn-3位点。45.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-2，所述脂质主链上的不同位点为sn-3位点或者sn-3位点。46.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-3，所述脂质主链上的不同位点为sn-1位点或者sn-2位点。47.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质类之一包含磷脂酰胆碱和O-磷脂酰胆碱；所述第一位点为sn-1位点，且所述不同位点为sn-2位点；或者或者所述第一位点为sn-2位点，所述不同位点为sn-1位点，其中氘标记的十六烷酰基-d9（16：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括9Z-十六碳烯酰基（16：1n7）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酰基（20：5n3）、7Z，10Z，13Z，16Z-二十二碳四烯酰基（22：4n6）、7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳五烯酰基（22：5n3）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。48.如权利要求47所述的组合物，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表2所示的比例存在。49.如权利要求47所述的组合物，其特征在于，所述样品包含人体样品。50.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质类中之一包括磷脂酰乙醇胺和对磷脂酰乙醇胺，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点；氘标记的十八烷酰基-d9（18：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酰基（20：5n3）、7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳五烯酰基（22：5n3）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。51.如权利要求50所述的组合物，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表3所示的比例存在。52.如权利要求50所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。53.如权利要求52所述的组合物，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。54.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质类之一包含鞘磷脂，氘标记的鞘氨醇存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16:0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、二十四酰基（24：0）和15Z-二十四烯酰基（24：1n9）。55.如权利要求54所述的组合物，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表4所示的比例存在。56.如权利要求54所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。57.如权利要求56所述的组合物，其特征在于，所述生物样品包括人体样品。58.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质类之一包含二酰基甘油，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点；氘标记的棕榈酸盐（16：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16：0）、十八烷酰基（18：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z-二十碳五烯酰基（20：5n3）、和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z二十二碳六烯酰基（22：6n3）。59.如权利要求58所述的组合物，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表6所示的比例存在。60.如权利要求58所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。61.如权利要求60所述的组合物，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。62.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述脂质类之一包含三酰基甘油，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点或sn-3位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点或sn-3位点；或者所述第一位点为sn-3位点，不同位点为sn-1位点或sn-2位点；氘标记的棕榈酸盐（16：0-d9）存在于第一位点，油酸酯（18：1n9）存在于不同位点，在另一个不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16：0）、十八烷酰基（18：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z-二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z二十二碳六烯酰基（22：6n3）。63.如权利要求62所述的组合物，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表5所示的比例存在。64.如权利要求62所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。65.如权利要求64所述的组合物，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。66.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。67.如权利要求66所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的生物样品为人体样品。68.如权利要求66所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的生物样品包含血液，血浆，血清，分离的脂蛋白组分，唾液，尿液，淋巴液和脑脊液，组织样品，细胞样品，皮肤样品。69.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，所述同位素标记的脂肪酸为饱和脂肪酸。70.一种用作内标的组合物，其包含代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成的脂质分子的一种或多种混合物，每种脂质分子混合物包含：具有一个或多个同位素标记的脂质主链，其中所述脂质主链用于具有至少一个酰基的脂质类；和存在于脂质主链上的单个位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂肪酸，所述脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在。71.如权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述脂质类包括三酰基甘油、游离脂肪酸、1-单酰甘油、磷脂、磷脂酰胆碱、o-磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、p-磷脂酰乙醇胺、胆固醇酯、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血CDP-二酰基甘油、CDP-二酰基甘油、鞘磷脂、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、神经酰胺、乳糖基神经酰胺、葡糖基神经酰胺、植物神经酰胺、6-羟基神经酰胺、脑苷脂、神经节苷脂、蜡酯、或蜡二酯。72.如权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述同位素标记包括2H、13C或者15N。73.如权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述脂质类之一包括胆固醇酯，所述单个位点为羟基，并且连接到羟基上的所述脂肪酸的混合物包括十六烷酰基（16：0）、9Z-十六碳烯酸（16：1n7）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、8Z，11Z，14Z-二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，1IZ，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酸酯（20：5n3）、4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。74.如权利要求73所述的组合物，其特征在于，在羟基处的脂肪酸混合物以表7所示的比例存在。75.如权利要求73所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。76.如权利要求75所述的组合物，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。77.如权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。78.如权利要求77所述的组合物，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。79.如权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述感兴趣的生物样品包括血液，血浆，血清，分离的脂蛋白组分，唾液，尿液，淋巴液和脑脊液，组织样品，细胞样品，皮肤样品。80.一种试剂盒，包括：ⅰ）用作内标的一种或多种脂质分子的混合物，其中，一种或多种脂质分子混合物中的每种都代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类的每一种中的脂质分子种类的组成，每种脂质分子混合物包含：在脂质主链上的第一位点处具有同位素标记的脂肪酸的脂质主链和在脂质主链上的不同位点存在的至少两种不同脂肪酸的混合物，其中脂质主链用于至少具有两个酰基的脂质类或具有一个或多个同位素标记的脂质主链；和存在于脂质主链上单个位点的至少两种不同脂肪酸的混合物，其中所述脂肪酸混合物代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂肪酸，并且，脂肪酸混合物中的每种脂肪酸以代表存在于感兴趣样品中的脂质类中的脂质分子种类中脂肪酸的存在比例的比例存在；ⅱ）使用所述一种或多种脂质分子混合物作为内标物用于检测和定量存在于感兴趣样品中的相应脂质类中的脂质分子种类的说明书。81.如权利要求80所述试剂盒，包含代表存在于感兴趣样品中的两种或多种相应脂质类中的脂质分子物质组成的两种或多种脂质分子的混合物。82.如权利要求81所述试剂盒，其特征在于，两种或多种脂质分子的混合物中的每一种被包装为单一组分。83.如权利要求81所述试剂盒，其特征在于，两种或多种脂质分子的混合物中的每一种被包装为独立的组分。84.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，一种或多种脂质分子混合物的每一种中的脂肪酸混合物包含表1，表2，表3，表4，表5，表6或表7中的一个或多个中所列的脂肪酸混合物。85.如权利要求80所述试剂盒，还包括用于检测和定量的试剂。86.如权利要求80所述试剂盒，还包括具有已知浓度的脂质分子种类的组合物的对照样品。87.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述同位素标记包括2H、13C或者15N。88.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述同位素标记的脂肪酸为饱和脂肪酸。89.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。90.如权利要求89所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。91.如权利要求89所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的生物样品包含血液，血浆，血清，分离的脂蛋白组分，唾液，尿液，淋巴液和脑脊液，组织样品，细胞样品，皮肤样品。92.如权利要求80所述试剂盒，还包括游离脂肪酸的混合物用作内标，其代表感兴趣的样品中游离脂肪酸的组成。93.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，具有至少两个羟基的所述脂质类包含磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、CDP-二酰基甘油、神经酰胺、乳糖酰神经酰胺、葡糖基神经酰胺、植物神经酰胺、6-羟基神经酰胺、脑苷脂、神经节苷脂、神经节苷脂、或蜡二酯。94.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂肪主链上的第一位点为sn-1位点、sn-2位点或sn-3位点。95.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-1，所述脂质主链上的不同位点为sn-2位点或者sn-3位点。96.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-2，所述脂质主链上的不同位点为sn-1位点或者sn-3位点。97.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质主链上的第一位点为sn-3，所述脂质主链上的不同位点为sn-1位点或者sn-2位点。98.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质类之一包含磷脂酰胆碱或者O-磷脂酰胆碱；所述第一位点为sn-1位点，且所述不同位点为sn-2位点；或者或者所述第一位点为sn-2位点，所述不同位点为sn-1位点，其中氘标记的十六烷酰基-d9（16：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括9Z-十六碳烯酰基（16：1n7）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酰基（20：5n3）、7Z，10Z，13Z，16Z-二十二碳四烯酰基（22：4n6）、7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳五烯酰基（22：5n3）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。99.如权利要求98所述试剂盒，其特征在于，在第一位点的脂肪酸混合物以表2所示的比例存在。100.如权利要求98所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。101.如权利要求100所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。102.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质类之一包括磷脂酰乙醇胺或者对磷脂酰乙醇胺，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点；氘标记的十八烷酰基-d9（18：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酰基（20：5n3）、7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳五烯酰基（22：5n3）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酰基（22：6n3）。103.如权利要求102所述试剂盒，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表3所示的比例存在。104.如权利要求102所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。105.如权利要求104所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。106.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质类之一包含鞘磷脂，其中氘标记的鞘氨醇存在于第一位点，并且其中在不同位点的脂肪酸混合物包含十六烷酰基（16：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、二十四烷酰基（24：0）和15Z-二十四碳烯酰基（24：1n9）。107.如权利要求106所述试剂盒，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表4所示的比例存在。108.如权利要求106所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。109.如权利要求109所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。110.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质类之一包含二酰基甘油，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点；氘标记的棕榈酸盐（16：0-d9）存在于第一位点，在不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16：0）、十八烷酰基（18：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z-二十碳五烯酰基（20：5n3）、和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z二十二碳六烯酰基（22：6n3）。111.如权利要求110所述试剂盒，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表6所示的比例存在。112.如权利要求110所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。113.如权利要求112所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。114.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质类包含三酰基甘油，其中，所述第一位点为sn-1位点，不同位点为sn-2位点或sn-3位点；或者所述第一位点为sn-2位点，不同位点为sn-1位点或sn-3位点；或者所述第一位点为sn-3位点，不同位点为sn-1位点或sn-2位点；氘标记的棕榈酸盐（16：0-d9）存在于第一位点，油酸酯（18：1n9）存在于不同位点，在另一个不同位点的脂肪酸混合物包括十六烷酰基（16：0）、十八烷酰基（18：0）、9Z-十八烯酰基（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酰基（18：2n6）、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯酰基（18：3n3）、8Z，11Z，14Z-二十碳三烯酰基（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酰基（20：4n6）和4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z二十二碳六烯酰基（22：6n3）。115.如权利要求114所述试剂盒，其特征在于，在不同位点的脂肪酸混合物以表5所示的比例存在。116.如权利要求114所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。117.如权利要求116所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。118.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，具有至少一个羟基的所述脂质类包括三酰基甘油、二酰基甘油、磷脂、磷脂酰胆碱，O-磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、p-磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、CDP-二酰基甘油、神经酰胺、乳糖基神经酰胺、葡糖基神经酰胺、植物神经酰胺、6-羟基神经酰胺、脑苷脂、神经节苷脂、蜡二酯、胆固醇酯、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血CDP-二酰基甘油、蜡酯、1-单酰甘油。119.如权利要求80所述试剂盒，其特征在于，所述脂质类之一包括胆固醇酯，所述单个位点为羟基，并且连接到羟基上的所述脂肪酸的混合物包括十六烷酸盐（16：0）、9Z-十六碳烯酸（16：1n7）、9Z-十八烯酸酯（18：1n9）、9Z，12Z-十八碳二烯酸酯（18：2n6）、8Z，11Z，14Z-二十碳三烯酸酯（20：3n6）、5Z，8Z，11Z，14Z-二十碳四烯酸酯（20：4n6）、5Z，8Z，11Z，14Z，17Z二十碳五烯酸酯（20：5n3）、4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-二十二碳六烯酸酯（22：6n3）。120.如权利要求119所述试剂盒，其特征在于，在羟基处的脂肪酸混合物以表7所示的比例存在。121.如权利要求119所述试剂盒，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。122.如权利要求121所述试剂盒，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。123.一种用于检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法，包含：向感兴趣的样品中加入已知量的根据权利要求40所述的具有一种或多种脂质分子混合物的组合物，所述混合物代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成；并且通过使用脂质分子的代表性混合物作为内标，检测和定量存在于目标样品中的相应脂质类中的脂质分子种类。124.如权利要求123所述方法，其特征在于，所述感兴趣的样品为生物样品。125.如权利要求124所述方法，其特征在于，所述生物样品包含人体样品。126.如权利要求123所述方法，其特征在于，检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法包括质谱法（MS）、高效液相色谱法（HPLC）、等度HPLC、梯度HPLC、正相色谱、反相HPLC、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、毛细管电泳、微流体、色谱、气相色谱（GC）或薄层色谱（TLC）及其组合。127.如权利要求123所述方法，其特征在于，检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法包括质谱法（MS）。128.一种用于检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法，包含：向感兴趣的样品中加入已知量的根据权利要求70所述的具有一种或多种脂质分子混合物的组合物，所述混合物代表存在于感兴趣样品中的一种或多种相应脂质类中的脂质分子种类组成；并且通过使用脂质分子的代表性混合物作为内标，检测和定量存在于目标样品中的相应脂质类中的脂质分子种类。129.如权利要求128所述方法，其特征在于，检测和定量存在于样品中的脂质分子的方法包括质谱法（MS）、高效液相色谱法（HPLC）、等度HPLC、梯度HPLC、正相色谱、反相HPLC、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、毛细管电泳、微流体、色谱、气相色谱（GC）或薄层色谱（TLC）及其组合。130.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蒂文·沃特金斯，
申请(专利权)人：麦特宝龙公司，
类型：发明
国别省市：美国,US