一种流式分选活性细胞的精准涂片方法技术

本发明专利技术公开了一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方；在收集管的底部添加第一缓冲液；调整流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或收集管的位置，使分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中；在流式细胞仪上选择待分选的活性细胞，并输出包含有活性细胞的分选液流，使包含有活性细胞的分选液流输出至收集管的底部；将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上。通过上述方式，本发明专利技术的涂片方法将流式细胞仪和离心涂片机的结合，能够精准地把活性细胞特别是单个活性细胞直接涂到载玻片上且不丢失，方便后续形态观察。

【技术实现步骤摘要】
一种流式分选活性细胞的精准涂片方法
本专利技术涉及生物学和医学
，尤其是涉及一种流式分选活性细胞特别是单细胞的精准涂片方法。
技术介绍
生物样本包含细胞，细胞之间均有差异性，将活性细胞逐一分离出来进行研究，有助于了解生物样本的多样性。对含量稀少的细胞(低至百万分之一，甚至更低)，比如肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞、肿瘤患者体内积液中的肿瘤细胞、孕妇外周血中的胎儿有核红细胞，可取得的目的细胞极少，并且这些生物样本的时效性强，样本具有不可复制性，快速精准的活性细胞分离和分析对疾病的及时诊断或产前诊断尤为重要，活性细胞图像分析是重要的技术手段之一。流式细胞仪用于检测液流中的细胞特性，即流式细胞仪的显著特征为快速分析细胞的多个特性，并根据细胞的特性高效精准分选目的细胞。也就是说，流式细胞仪能将复杂样本中单个活性细胞快速精准地直接分选至载玻片上，但含细胞的液滴迅速干燥，形成盐结晶，导致细胞膜破裂，无法看到完整的细胞。又或者在载玻片上滴等渗液体，将活性细胞分选到等渗液体中，然后盖上盖玻片使细胞在等渗液体中保存较长时间，但盖玻片覆盖的过程，会造成细胞流失，并且这种情况下，无法对细胞进行染色处理，等渗液体干燥后，同样形成盐结晶，导致细胞破裂。这两种情况均破坏或影响了细胞的形态，无法进行完整的图像分析。也就是说，现有的各种技术均无法精准地把活性细胞特别是单细胞放到载玻片上，且容易丢失，不便于形态观察。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，解决了现有技术中无法精准地把活性细胞特别是单细胞放到载玻片上的技术问题。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方；在收集管的底部添加第一缓冲液；调整流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或收集管的位置，使分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中；在流式细胞仪上选择待分选的活性细胞，并输出包含有活性细胞的分选液流，使包含有活性细胞的分选液流输出至收集管的底部；将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上。其中，输出包含有活性细胞的分选液流的步骤之后，且在将收集管设置在离心涂片机上的步骤之前，该方法还包括：在收集管底部的第一缓冲液上再添加第二缓冲液，以通过第二缓冲液覆盖在包含有分选液流的第一缓冲液上。其中，在收集管的底部添加第一缓冲液的步骤包括：在收集管的底部添加包括有蛋白质的第一缓冲液。其中，在收集管底部的第一缓冲液上再添加第二缓冲液的步骤包括：在收集管底部的第一缓冲液上再添加包括有蛋白质的第二缓冲液。其中，收集管包括第一管体和第一管体连通的第二管体，其中第一管体和第二管体的连接呈L型状设置，且第一管体设置在流式细胞仪用于输出包含有活性细胞的分选液流的输出口的下方。其中，将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上的步骤包括：将收集管的第二管体与载玻片连接；将设有载玻片的收集管固定在离心涂片机上；启动离心涂片机，使得收集管跟随离心涂片机转动，从而将收集管中的活性细胞精准涂到载玻片上。其中，第二管体与载玻片的连接处设有吸水材料层。其中，第一缓冲液设置在第一管体和第二管体的连接处中。其中，收集容器的第一管体和第二管体的连接处的内壁呈弧形状。本专利技术的有益效果是：区别于现有技术的情况，本专利技术提供的流式分选活性细胞的精准涂片方法包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方；在收集管的底部添加第一缓冲液；调整流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或收集管的位置，使分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中；在流式细胞仪上选择待分选的活性细胞，并输出包含有活性细胞的分选液流，使包含有活性细胞的分选液流输出至收集管的底部；将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上。通过上述方式，本专利技术的涂片方法通过利用流式细胞仪和离心涂片机的结合，使活性细胞精准落入收集装置的缓冲液中，再利用离心涂片机将活细胞精准涂到载玻片上，易于进行后续的形态学分析。附图说明图1是本专利技术流式分选活性细胞的精准涂片方法的流程示意图；图2是图1中步骤S105的子步骤流程示意图；图3是本专利技术收集管的结构示意图；图4是本专利技术收集管与载玻片连接的结构示意图；图5是本专利技术实施例1的实验状态图；图6是本专利技术实施例2的实验状态图；图7是本专利技术实施例3的实验状态图。具体实施方式下面结合附图和实施方式对本专利技术进行详细说明。如图1所示，本专利技术流式分选活性活性细胞的涂片方法的流程示意图。该方法包括以下步骤：步骤S101：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方。在步骤S101中，可以通过固定装置将收集管固定在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方。又或者对流式细胞仪进行改造，在流式细胞仪设置有夹具，该夹具能够将收集管夹住，从而实现收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方。如图3-4所示，该收集管包括第一管体101和第一管体101连通的第二管体102，其中第一管体101和第二管体102的连接呈L型状设置，且第一管体101设置在流式细胞仪用于输出包含有活性细胞的分选液流的输出口的下方。应理解，本实施例的第一管体101呈漏斗状设置，第一管体101的内径较小的一端与第二管体102连通，这样第一管体101设置在流式细胞仪用于输出包含有活性细胞的分选液流的输出口的下方的内径比较大，更容易落入包含有活性细胞的分选液流。当然，本专利技术并不限定第一管体101呈漏斗状设置，在一些实施例中，第一管体101还可以呈其他形状，如矩形状或圆柱状，只要能够实现包含有活性细胞的分选液流落入第一管体101即可。步骤S102：在收集管的底部添加第一缓冲液。其中，第一缓冲液设置在第一管体101和第二管体102的连接处中。在本实施例中，收集容器的第一管体101和第二管体102的连接处的内壁呈弧形状，这样第一管体101和第二管体102的连接处不会储存有太多的第一缓冲液，方便全部输出第一缓冲液，以全部输出活性细胞，不会残留活性细胞在收集管内。在本实施例中，优选在收集管的底部添加包括有蛋白质的第一缓冲液。其中第一缓冲液的容量范围为50-200微升。步骤S103：调整流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或收集管的位置，使分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中。在步骤S103中，可以通过多种方式调整，即可以调整流式细胞仪，也可以调整收集管，使得分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中。步骤S104：在流式细胞仪上选择待分选的活性细胞，并输出包含有活性细胞的分选液流，使包含有活性细胞的分选液流输出至收集管的底部。步骤S105：将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上。应理解，在上述输出包含有单细胞的分选液流的步骤之后，且在将收集管设置在离心涂片机上的步骤之前，该方法还包括：在收集管底部的第一缓冲液上再添加第二缓冲液，以通过第二缓冲液覆盖在包含有分选液流的第一缓冲液上。本实施例通过第一缓冲液和第二缓冲液将包含有活本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，其特征在于，包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有所述活性细胞的分选液流的下方；在所述收集管的底部添加第一缓冲液；调整所述流式细胞仪输出包含有所述活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或所述收集管的位置，使所述分选液流恰好射入所述收集管的底部的第一缓冲液中；在所述流式细胞仪上选择待分选的所述活性细胞，并输出包含有所述活性细胞的分选液流，使包含有所述活性细胞的分选液流输出至所述收集管的底部；将所述收集管设置在离心涂片机上，并通过所述离心涂片机将所述活性细胞精准涂到载玻片上。

【技术特征摘要】
1.一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，其特征在于，包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有所述活性细胞的分选液流的下方；在所述收集管的底部添加第一缓冲液；调整所述流式细胞仪输出包含有所述活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或所述收集管的位置，使所述分选液流恰好射入所述收集管的底部的第一缓冲液中；在所述流式细胞仪上选择待分选的所述活性细胞，并输出包含有所述活性细胞的分选液流，使包含有所述活性细胞的分选液流输出至所述收集管的底部；将所述收集管设置在离心涂片机上，并通过所述离心涂片机将所述活性细胞精准涂到载玻片上。2.根据权利要求1所述的涂片方法，其特征在于，所述输出包含有所述活性细胞的分选液流的步骤之后，且在所述将所述收集管设置在离心涂片机上的步骤之前，该方法还包括：在所述收集管底部的第一缓冲液上再添加第二缓冲液，以通过所述第二缓冲液覆盖在包含有所述分选液流的所述第一缓冲液上。3.根据权利要求1所述的涂片方法，其特征在于，所述在所述收集管的底部添加第一缓冲液的步骤包括：在所述收集管的底部添加包括有蛋白质的第一缓冲液。4.根据权利要求1所述的涂片方法，其特征在于，所述在所述收...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：深圳市孔雀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44