【技术实现步骤摘要】
一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法
本专利技术属于环境微生物
，具体涉及一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法。
技术介绍
目前，运用生物工程等高科技生物技术，培育能够用于固定重金属的植物和土壤微生物超级工程菌，并运用于土壤污染治理是目前环境科学、环境工程学、植物生理学、微生物学等研究中最活跃的前沿领域之一。微生物能通过氧化还原、甲基化和去甲基化作用转化重金属，将有毒物质转化成动植物不可利用的形态。硫酸盐还原菌(Sulfate-ReducingBacterium，简称SRB下同)是自然界中能把硫酸盐、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等硫氧化物以及元素硫还原形成硫离子，由于重金属硫化物的溶度积普遍较小，硫离子能够立即与微量重金属离子结合生成生物不能利用的形态，因此硫酸盐还原菌可以用作处理固定环境中的重金属离子。SRB菌在工业管道的腐蚀、受重金属污染的废水及酸性矿山废水的环境修复中都扮演着重要角色。SRB为严格的厌氧菌，但随着研究的深入，已有研究结果表明SRB并非严格意义上的绝对厌氧而是兼性厌氧，但总体上来说SRB对氧还是极其敏感的，因此对其培养...
【技术保护点】
一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)将预处理后的土壤加入到硫酸盐还原菌液体富集培养基中进行厌氧培养，所得富集液接种至新的硫酸盐还原菌液体富集培养基中再次进行厌氧培养，转接培养多次后得到富集菌液；(b)将富集菌液稀释成不同浓度，向其中加入L‑半胱氨酸、抗坏血酸和硫酸亚铁铵备用，将筛选培养基倒入培养皿中，待其冷凝后分别将不同浓度的稀释液涂布在平板上，待稀释液渗透后先后两次倒入筛选培养基，冷凝后依次形成第二层、第三层，将培养皿密闭后恒温培养；(c)将灭菌后的筛选培养基倒入培养皿中冷凝备用，挑取步骤(b)第二层菌株生长层中生长明显的黑...
【技术特征摘要】
1.一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)将预处理后的土壤加入到硫酸盐还原菌液体富集培养基中进行厌氧培养，所得富集液接种至新的硫酸盐还原菌液体富集培养基中再次进行厌氧培养，转接培养多次后得到富集菌液；(b)将富集菌液稀释成不同浓度，向其中加入L-半胱氨酸、抗坏血酸和硫酸亚铁铵备用，将筛选培养基倒入培养皿中，待其冷凝后分别将不同浓度的稀释液涂布在平板上，待稀释液渗透后先后两次倒入筛选培养基，冷凝后依次形成第二层、第三层，将培养皿密闭后恒温培养；(c)将灭菌后的筛选培养基倒入培养皿中冷凝备用，挑取步骤(b)第二层菌株生长层中生长明显的黑色单菌，在新配制的平板上划线分离，再将筛选培养基倒入划线分离后的平板上，密封后反复多次分离培养；(d)将划线分离得到的单菌落接种到保存培养基内，恒温培养即得。2.根据权利要求1所述的一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，所述硫酸盐还原菌液体富集培养基的成分包括：0.4-0.6g/的K2HPO4，1-2g/L的MgSO4·7H2O，0.4-0.6g/L的Na2SO4，0.1-0.2g/L的CaCl2，1-2g/L的NaCl，0.8-1.0g/L的NH4Cl，1.0-2.0g/L的酵母膏，配制好后在121℃下灭菌20min，调节pH至8.0-8.5。3.根据权利要求1所述的一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，所述筛选培养基的成分包括：0.4-0.6g/L的K2HPO4,0.1-0.2g/L的CaCl2，0.8-1.0g/L的NH4Cl，1-2g/L的MgSO4·7H2O，1-2g/L的NaCl，0.4-0.6g/L的Na2SO4,2.0-3.0g/L的C3H5O3Na,0.5-0.6g/L的L-半胱氨酸，0.5-0.6g/L的抗坏血酸，0.5-0.6g/L的Fe(NH4)2(SO)2以及2wt％的琼脂，配制时先将其他原料混合并在121℃下灭菌20min，接着降温至55℃后加入L-半胱氨酸、抗坏血酸、Fe(NH4)2(SO4)2，调节pH至8.0-8.5。4.根据权利要求1所述的一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，所述保存培养基的成分包括：0.5-0.7g/L的K2HPO4,0.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：王继勇，陈加立，江英杰，肖挺，
申请(专利权)人：武汉理工大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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