一种ASE‑HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE‑HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，属于化学检测领域，旨在进一步提高大叶紫珠的质量标准，确保大叶紫珠的质量和临床效果。该方法采用ASE萃取方法萃取粉碎过的大叶紫珠并制备供试品溶液；采用HPLC法检测大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量。本发明专利技术用于测定大叶紫珠中毛蕊花糖苷的含量。

A method for the determination of callicarpamacrophyllavahl in verbascoside content ASE HPLC

The invention discloses a method for the determination of HPLC ASE callicarpamacrophyllavahl in verbascoside content, belonging to the chemical field test, to further improve the quality standard of callicarpamacrophyllavahl, ensure the quality and clinical effect of callicarpamacrophyllavahl. This method adopts ASE extraction method for extraction of crushed callicarpamacrophyllavahl and preparation of the test solution; verbascoside content by HPLC method in the detection of callicarpamacrophyllavahl. The invention is used for the determination of acteoside in Callicarpa macrophylla.

【技术实现步骤摘要】
一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法
本专利技术涉及化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法。
技术介绍
紫珠(Callicarpanudiflorae)为马鞭草科小灌木植物，有止血、抗菌、收敛、解毒、镇痛、以及促进愈合的作用。其抗菌、抗病毒作用，尤其对金葡萄球菌、伤寒杆菌、肺炎双球菌等均有不同的抑制作用，其中对金葡萄球菌，伤寒杆菌抑菌作用最强。紫珠还可抑制毛细血管的通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反应作用，同时可明显缩短出、凝血时间，止血效果显著。紫珠的主要成分为黄酮甙、缩合鞣酸、中性树脂、酚类、多糖、羟基化合物及镁、钙、铁盐等，其中，紫珠萜酮、芹菜素、毛蕊花糖苷、木犀草素及其配糖体等黄酮类物质的含量约为5％。当以毛蕊花糖苷为指标探讨裸花紫珠浸膏的抗菌、抗炎和止血的药理效果时，实验结果表明，随着毛蕊花糖苷含量的升高，裸花紫珠浸膏的抑菌抗炎和止血作用都增强。目前市场上紫珠制剂主要有颗粒剂、胶囊、片剂、分散片、合剂、软胶囊、栓剂等，上述制剂的质量标准仅部分制剂进行了总黄酮的含量测定，测定方法为紫外分光光度法，定量很不准确，没有关于紫珠制剂中毛蕊花糖苷的含量测定方法。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种能准确测定含量的ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的大叶紫珠并制备供试品溶液；步骤2：采用HPLC法检测大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量。进一步的，所述的步骤1包括下述的子步骤：步骤S1：将大叶紫珠粉碎，过四号筛，取过筛后的粉末0.25g，与1g硅藻土混合均匀；步骤S2：将混合物加入到底部铺设有纤维滤膜的萃取池中，再加入硅藻土至达到萃取池池口，采用ASE法进行萃取；步骤S3：收集萃取液，用甲醇定容至50ml，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。进一步的，所述的步骤S2中，萃取参数为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度为120℃；静态萃取时间为10min；循环次数为3次；冲洗体积为100％；吹扫时间为100s。进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱：ThermoAQC18；流动相：乙腈-0.5％磷酸；流速：0.3mL/min；检测波长：332nm；柱温：35℃；进样量：1μl。进一步的，所述的所述的色谱柱的规格为2.1mm×50mm，3μm。进一步的，所述的流动相中的乙腈-0.5％磷酸的体积比为17:83。本专利技术的有益效果如下：能准确有效的测定大叶紫珠中毛蕊花糖苷的含量，误差小，可进一步提高大叶紫珠的质量标准，确保大叶紫珠的质量和临床效果。附图说明图1为毛蕊花糖苷对照品图谱；图2为快速溶剂萃取样品图谱；图3为药典方法样品图谱；图4为毛蕊花糖苷以浓度(μg)-峰面积进行线性回归图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。1、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Agilent1290超高速液相色谱仪1.2试剂(除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯)：水：符合GB/T6682规定的一级水；甲醇(CH3OH)：色谱纯(液相色谱用)；乙腈(CH3CN))：色谱纯(液相色谱用)。1.3样品：大叶紫珠购于玉林药材市场，经广西梧州食品药品检验所副主任中药师黄蘅鉴别。对照品毛蕊花糖苷由中国生物制品检定研究院提供，批号：111530-201512。2方法2.1对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含毛蕊花糖苷50μg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末(过四号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，密塞，称定重量，放置过夜，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，过四号筛，取0.25g，精密称定，与约1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好纤维滤膜的ASE10mL萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖，放入快速萃取仪中进行萃取。萃取结束后，把萃取液转移至50mL容量瓶中，用少量甲醇清洗萃取瓶3次合并至容量瓶中，使用甲醇定容至刻度，即得。2.3ASE萃取条件萃取溶剂为甲醇；萃取温度为120℃；静态萃取时间为10min；循环次数为3次；冲洗体积为100％；吹扫时间为100s。2.4色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸(17:83)为流动相；检测波长为332nm。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于3000。2.5测定法照高效液相色谱法(通则0512)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。检测参数为：色谱柱：ThermoAQC18；流动相：乙腈-0.5％磷酸；流速：0.3mL/min；检测波长：332nm；柱温：35℃；进样量：1μl。2.6标准限值要求本品按干燥品计算，含毛蕊花糖苷(C29H36O15)不得少于0.15％。2.7计算(外标法)式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；AX——供试品的峰面积；AR——对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3结果3.1线性关系取毛蕊花糖苷对照品溶液(浓度0.06914mg/mL)，分别精密吸取该溶液0.2μl、0.5μl、0.8μl、1μl、1.2μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果见表1。以浓度(μg)-峰面积进行线性回归，详见图4，求得回归方程：毛蕊花糖苷y＝3003.7x+11.318，R2＝0.99966,毛蕊花糖苷在0.013828～0.082968μg围内呈良好的线性关系。表13.2重复性试验取相同批号的样品(广西玉林购买)0.25g，共3份，精密称定，按4.2.2ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中毛蕊花糖苷的含量RSD为2.5％，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表2。表2重复性1重复性2重复性3RSD％结果％1.101.071.052.53.3精密度和稳定性试验取毛蕊花糖苷对照品溶液(0.06914mg/mL)，连续进样6次，记录峰面积，详见图1，峰面积RSD为0.4％，表明仪器精密度良好。取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，8，12h依法测定。结果毛蕊花糖苷峰面积的RSD为0.7％，详见图2，表明供试品溶液在12h内稳定。3.4样品不同仪器提取结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE‑HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的大叶紫珠并制备供试品溶液；步骤2：采用HPLC法检测大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量。

【技术特征摘要】
1.一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的大叶紫珠并制备供试品溶液；步骤2：采用HPLC法检测大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量。2.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述的子步骤：步骤S1：将大叶紫珠粉碎，过四号筛，取过筛后的粉末0.25g，与1g硅藻土混合均匀；步骤S2：将混合物加入到底部铺设有纤维滤膜的萃取池中，再加入硅藻土至达到萃取池池口，采用ASE法进行萃取；步骤S3：收集萃取液，用甲醇定容至50ml，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。3.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，其特征在于，所述的步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙良广，王丽丽，陈学松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45