降低干扰的方法技术

本发明专利技术涉及用于测定疑似含有所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使至少所述分析物的第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，且其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。本发明专利技术还涉及用于改善用于测定分析物的间接免疫测定的特异性的方法，其包括通过不同的捕获化合物替代至少10％的捕获化合物；其中被替代的捕获化合物与引入的捕获化合物竞争结合所述分析物。本发明专利技术还涉及与上述方法相关的试剂盒、设备和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】降低干扰的方法专利
本专利技术涉及用于测定疑似包含所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使至少所述分析物的第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，且其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。本专利技术还涉及用于改善用于测定分析物的间接免疫测定的特异性的方法，其包括通过不同的捕获化合物替代至少10％的捕获化合物；其中被替代的捕获化合物与引入的捕获化合物竞争结合所述分析物。本专利技术还涉及与上述方法相关的试剂盒、设备和用途。相关技术实验室测试，特别是免疫学测试，已成为疾病诊断中的无价工具。具体地，免疫测定已提供了在复杂混合物，例如体液诸如血液或血浆中特异性检测单一分析物或分析物组的可能性。然而，已经鉴定了免疫测定中的干扰的几个原因，例如，干扰物质与捕获化合物的交叉反应性，检测剂化合物与固相的非特异性结合，通过异嗜性抗体或特别是人抗小鼠抗体(HAMA)对捕获化合物和检测剂化合物的“桥接”结合，仅举几例(参见例如Park&Kricka(2013),Ch.5.3-InterferencesinImmunoassay,inTheImmunoassayHandbook(FourthEdition),由DavidWild编辑,Elsevier,Oxford:403;Schiettecatte(2012),InterferencesinImmunoassays,AdvancesinImmunoassayTechnology,Dr.NormanH.L.Chiu(Ed.))。在竞争性免疫测定中，包含在样品中的分析物与标记的分析物(指定剂)竞争结合捕获化合物，其通常为抗体，或者在测试血清样品中例如病原体的抗体的存在的情况下，所述病原体的抗原。在样品中分析物的浓度高的情况下，则存在强烈竞争，导致指定剂与捕获化合物的结合减少，引起信号降低，其取决于测试形式，导致定量或定性测试结果。本领域已知的免疫测定的缺点是用作捕获化合物的抗原也可以被来自样品的干扰化合物结合。这些干扰化合物与指定剂竞争结合捕获化合物的表位。根据竞争的严重程度，假测试结果是可能的，其引起相应免疫测定的特异性降低。如果使用潜在地甚至由具有大量构象表位的几个亚单位组成的复合捕获化合物，例如病毒衣壳，则特异性的这种降低可以是特别显著的。在这种情况下，消除干扰的经典方法，例如，添加干扰化合物的替代靶标，可能是低效的。在非竞争性免疫测定中，通过使分析物与特异性结合分析物并携带标记本身或作为携带标记的第二分子的靶标的化合物接触来检测分析物。因此，在非竞争性免疫测定中，通过测定分析物和携带标记的检测剂化合物之间形成的复合物的量来测定分析物的量。因此，可能如上所述面临类似的特异性问题。仅免疫学轻微不同的抗原(例如通过在不同表达系统中产生，不同的氨基酸序列，糖基化的差异，纯化和重折叠程序的差异以及缓冲液和储存条件的差异)具有各自的干扰范围。因此，导致用抗原X1进行免疫测定的错误结果的样品可以在用抗原X2的测试中提供正确的结果，反之亦然。因此，频繁用抗原交换不同抗原不会导致特异性的改善，但仅导致引起错误结果的样品范围的变化。待解决的问题因此，本专利技术的目的是提供避免上述问题的改善的免疫测定法。专利技术概述这些问题通过具有独立权利要求的特征的方法、试剂盒、设备和组合物来解决。在从属权利要求中列出了可能以分离的方式或任何任意组合实现的典型实施方案。因此，本专利技术涉及用于测定疑似含有所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使至少所述分析物的第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，且其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。如以下中所使用，术语“具有”、“包含”或“包括”或其任意语法变体以非排他性的方式使用。因此，这些术语既可以是指其中除了这些术语引入的特征之外在本上下文中描述的实体中没有另外特征存在的情况，而且可以是指其中存在一个或多个另外特征的情况。作为实例，表述“A具有B”、“A包含B”和“A包括B”既可以是指其中除了B之外在A中没有另外要素存在的情况(即其中单独且仅由B组成的情况)，而且可以是指其中除了B之外在实体A中存在一种或多种另外要素诸如要素C、要素C和D或甚至其它要素的情况。此外，如下所用，术语“优选”、“更优选”、“最优选”、“具体地”、“更具体地”、“特别地”、“更特别地”或类似术语与任选的特征结合使用，而不限制可替代的可能性。因此，这些术语引入的特征是任选的特征，并不意图以任何方式限制权利要求的范围。如本领域技术人员将认识到，可以通过使用替代特征来执行本专利技术。类似地，通过“在本专利技术的实施方案中”或类似表述引入的特征意图是任选的特征，关于本专利技术的替代实施方案没有任何限制，关于本专利技术的范围没有任何限制，并且关于将以这样的方式引入的特征与本专利技术的其它任选或非任选特征组合可能性的没有任何限制。在本专利技术的具体值或比率的上下文中的术语“约”是指所述值或比率+/-30%、+/-20%、+/-10%，或者在一个实施方案中+/-5%的给定值或比率。在一个实施方案中，本专利技术的方法是体外方法。此外，它可以包括除了具体提到的步骤之外的步骤。具体地，步骤b)可以包括提供样品的步骤，或者步骤c)可以包括添加其它化合物以促进结合和检测。此外，一些或所有步骤可以通过自动化设备辅助。如本文中所使用，术语“测定”是指通过本专利技术的方法测定样品中的待测定的分析物的至少一种免疫学特征。在一个实施方案中，根据本专利技术的免疫学特征是分析物的结构特征，其促进通过免疫学方式检测样品中的分析物。在一个实施方案中，所述免疫学特征促进鉴定，在另一个实施方案中，通过免疫学方式定量分析物。因此，典型的免疫学特征是促进区分所述分析物与样品中其它化合物的特征。在一个实施方案中，测定分析物是确定分析物是否以高于方法检测限值的浓度存在于样品中。确定检测限值的方法是本领域技术人员已知的。在另一个实施方案中，测定是半定量或定量地测定样品中分析物的量或浓度。为了进行定量测定，将测定分析物的绝对或精确量，或将测定分析物的相对量。可以在分析物的精确量无法测定或不应测定的情况下测定相对量。在所述情况下，可以确定分析物的存在量相对于包含第二量的分析物的第二样品是增加还是减少。如本领域技术人员将理解，通常不需要分别测定第一捕获化合物/分析物和第二捕获化合物/分析物复合物。因此，在一个实施方案中，一起测定第一捕获化合物和分析物的复合物以及第二捕获化合物和分析物的复合物，即在所述第一和所述第二捕获化合物之间不加区分。因此，在一个实施方案中，测定与第一捕获化合物或第二捕获化合物的复合物中存在的分析物的总量。如本领域技术人员将进一步理解，分析物/捕获化合物复合物的测定将取决于所选择本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于测定疑似包含所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使所述分析物的至少第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，其在至少一种化学和/或物理性质方面可测量地不同，所述化学和/或物理性质与所述捕获化合物与固体表面的结合不相关，其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物，且其中所述捕获化合物是多肽；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.18 EP 14198784.21.用于测定疑似包含所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使所述分析物的至少第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，其在至少一种化学和/或物理性质方面可测量地不同，所述化学和/或物理性质与所述捕获化合物与固体表面的结合不相关，其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物，且其中所述捕获化合物是多肽；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。2.权利要求1的方法，其中竞争结合分子是结合所述分子的基本上相同或相同的亚结构。3.权利要求1或2的方法，其中所述不同的捕获化合物是多肽，优选HB核心(HBc)抗原。4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述第二捕获化合物通过以下至少一种来衍生或可衍生自所述第一捕获化合物：(i)将至少一个氨基酸交换引入所述第一捕获化合物的氨基酸序列，(ii)在与所述第一捕获化合物相比不同的细胞背景中产生所述第二捕获化合物，(iii)与所述第一捕获化合物相比，除去或阻止所述第二捕获化合物的糖基化，(iv)通过与所述第一捕获化合物相比不同的方式和/或通过不同的方法纯化所述第二捕获化合物，(v)在与所述第一捕获化合物相比不同的条件下变性和/或重折叠所述第二捕获化合物，和(vi)在与所述第一捕获化合物相比不同的条件下储存所述第二捕获化合物。5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述分析物是针对病毒抗原的抗体。6.权利要求1至5中任一项的方法，其中步骤a)包括使2至3种所述分析物的捕获化合物与所述样品接触。7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述第一和第二捕获化合物不竞争结合干扰化合物。8.用于改善用于测定分析物的间接免疫测定的特异性的方法，其包括通过不同的捕获化合物替代10％至90%的捕获化合物，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：B乌普迈尔，T扎恩特，J波尔茨，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH