Tie2对视网膜及其他组织中静脉血管的保护作用及应用制造技术

本发明专利技术涉及Tie2对视网膜及其他组织中静脉血管的保护作用及应用，具体地，涉及Tie2调节化合物在制备用于治疗视网膜、皮肤、肝脏及肺等组织器官中静脉及相关血管病变的药物中的用途。本发明专利技术还涉及一种与视网膜等组织中静脉血管病变的程度密切相关的条件性酪氨酸激酶受体Tie2基因敲除非人动物模型和制备方法，及其在筛选Tie2调节化合物筛选中的用途。通过结合他莫昔酚不同剂量、及动物生长不同阶段进行处理，从而获得不同Tie2基因敲除效率的非人动物模型，以模拟不同程度的视网膜等组织中静脉血管病变，解决了视网膜等组织中静脉血管病变程度的可控性的难题。

Protective effects of Tie2 on venous vessels in retina and other tissues and its application

The invention relates to a protective function and application of Tie2 on retinal vein, and other organizations in particular, involving the regulation of Tie2 compound in preparation for the treatment of retina, skin, liver and lung vein and related vascular lesions in drug use. Conditional tyrosine kinase receptor Tie2 gene is closely related to the invention also relates to a vein vascular lesion and retinal tissues such as the degree of knockdown of non-human animal model and preparation method, and its use in screening screening compounds in Tie2 regulation. Through the combination of tamoxifen, and different doses of animal growth at different stages of processing, to obtain different Tie2 gene deficient non-human animal model in efficiency, with intravenous vascular lesions to simulate different degrees of retinal tissue, solves the problem of controllability of retina vein vascular lesions.

【技术实现步骤摘要】
Tie2对视网膜及其他组织中静脉血管的保护作用及应用
本专利技术Tie2调节化合物在制备用于治疗视网膜、皮肤、及肝脏等组织器官中静脉及相关血管病变的药物中的用途。本专利技术还涉及一种非人转基因动物模型及其构建方法和应用，尤其是涉及一种由不同剂量他莫昔酚在动物不同生长阶段诱导的可控的视网膜及其他组织静脉血管病Tie2基因敲除转基因小鼠动物模型及其构建方法。
技术介绍
静脉相关疾病包括静脉血栓、静脉曲张、与静脉炎症等。目前对于临床静脉血管病变的病理发生过程还了解较少，治疗手段也很有限。因此相关疾病模型的制备对于阐明静脉血管病变的发生机制、以及新药研发有重要的科学价值与应用意义。小鼠视网膜血管生成在小鼠出生之后开始，因此用于静脉及其他血管生成及疾病发生模型较为可行。现有应用较广的小鼠视网膜模型包括氧诱导的血管增生型视网膜病变模型和糖尿病视网膜病变模型。但这两种模型的共同缺点在于不能有效调控血管异常的程度。而不同病变程度的可控性，对于药物的筛选、以及临床病理状况不一的准确模拟至关重要。Tie2是促血管生成素家族(Angiopoietin1-4)的共同受体，属于受体酪氨酸激酶家族成员。Tie2特异性表达在内皮细胞表面和某些造血祖细胞。Tie2介导的信号通路在胚胎期的血管发生和在成人阶段的血管新生中发挥重要作用。Tie2的主要生物学作用参与血管网络的生成、成熟与重塑；另外，Tie2介导的信号异常也参与多种疾病的病理发生过程，包括肿瘤转移、炎症、及视网膜病变等。本专利技术利用Tie2条件性基因敲除小鼠模型，在小鼠出生后不同时间点诱导Tie2基因敲除，并结合基因敲除的不同剂量，以模拟静脉及相关血管的病理发生过程，并利用此疾病动物模型筛选静脉相关疾病的治疗药物。本专利技术基于Cre-loxP系统建立的他莫昔芬诱导条件性基因敲除系统，利用条件性酪氨酸激酶受体Tie2基因敲除小鼠，在不同时间点和不同的方法诱导Tie2敲除，并分析Tie2的敲除效率与视网膜、皮肤、肝脏等组织器官中静脉及相关血管的表型，从而建立视网膜等组织中静脉血管病变与基因敲除剂量、以及敲除时间之间的关系，达到构建一种新型、病变程度可控的静脉血管疾病模型。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提出了Tie2调节化合物在制备用于治疗视网膜、皮肤、肝脏、肺等组织器官中静脉及相关血管病变的药物中的用途。在本专利技术的实施例中，所述Tie2调节化合物是Tie2受体激动剂或Tie2表达诱导剂。在本专利技术的一些实施例中，所述受体激动剂包括激活Tie2的配体、多肽、抗体或小分子化合物。在本专利技术的一个具体实施例中，所述配体是血管生成素。在本专利技术的实施例中，所述Tie2表达诱导剂包括激活Tie2基因表达的酶、激素、生长因子、细胞因子或抗体。在本专利技术的一些实施例中，所述药物用于治疗视网膜静脉血管病变相关的疾病。在本专利技术的具体实施例中，所述视网膜静脉血管病变相关的疾病包括糖尿病视网膜病变、湿性年龄相关黄斑变性、视网膜静脉阻塞或炎症、及早产儿视网膜病变等。在本专利技术的一些实施例中，所述药物用于治疗皮肤静脉血管病变相关的疾病。在本专利技术的具体实施例中，所述皮肤静脉血管病变相关的疾病包括静脉曲张、静脉阻塞或炎症等。在本专利技术的一些实施例中，所述药物用于治疗肝脏静脉血管与肝组织病变相关的疾病。在本专利技术的具体实施例中，所述肝脏血管与肝组织病变相关的疾病包括肝脏静脉及相关血管出血性血管病变、静脉阻塞或炎症。在本专利技术的一些实施例中，所述药物用于治疗肺静脉血管病变相关的疾病。在本专利技术的具体实施例中，所述肺血管病变相关的疾病包括肺静脉血栓、静脉炎症等。本专利技术的目的之二在于提供了一种建立视网膜、皮肤、肝脏、肺组织中静脉血管病变模型的新方法，并且通过调控Tie2基因水平来控制视网膜血管病变的程度，具体可通过调节：不同时间点诱导基因敲除、以及不同处理方式诱导Tie2基因敲除的效率等方法来实现。在本专利技术的实施例中，所述动物为哺乳动物。在本专利技术的一些实施例中，所述哺乳动物为啮齿类动物。在本专利技术的具体实施例中，所述啮齿类动物为小鼠。在本专利技术的实施例中，所述基因敲除诱导剂包括四环素、干扰素、激素。在本专利技术的一些实施例中，所述激素为他莫昔酚。在本专利技术的一些实施例中，所述时间点为出生1-8天。在本专利技术的具体实施例中，中所述时间点为出生1-8天，所述他莫昔酚的剂量为50-100μg/天。在本专利技术的一个具体实施例中，所述时间点为出生1-4天，所述他莫昔酚的剂量为50-70μg/天。在本专利技术的另一个具体实施例中，所述时间点为出生5-8天，所述他莫昔酚的剂量为90-100μg/天。在本专利技术的又一个具体实施例中，所述时间点为出生2周到成年，所述他莫昔酚的剂量为500-1000μg/天。在本专利技术的实施例中，所述启动子包括泛素C(UBC)或血管内皮细胞-钙黏蛋白(VE-Cadherin)。在本专利技术的实施例中，所述非人转基因动物及其后代用作组织器官中血管病变的模型。在本专利技术的一些实施例中，所述组织器官为视网膜、皮肤、肝脏或肺。在本专利技术的一些实施例中，所述血管为静脉血管。在本专利技术的一个具体实施例中，所述非人转基因动物及其后代用作严重静脉血管瘤样病变的模型。在本专利技术的另一个具体实施例中，所述非人转基因动物及其后代用作较轻静脉血管病变的模型。在本专利技术的一些实施例中，所述非人转基因动物及其后代用于测试治疗视网膜静脉血管病变、皮肤静脉血管病变、肝脏血管病变或肺血管病变的药物或治疗方法。本专利技术的目的之三在于提供了一种筛选治疗视网膜静脉血管病变的药物的方法，其包括将药物给予如前面所述的非人转基因动物及其后代，并监测对病理学或行为的影响。本专利技术还提供了一种筛选治疗皮肤静脉及相关血管病变的药物的方法，其包括将药物给予如前面所述的非人转基因动物及其后代，并监测对病理学或行为的影响。本专利技术又提供了一种筛选治疗肝脏静脉及相关血管病变的药物的方法，其包括将药物给予如前面所述的非人转基因动物及其后代，并监测对病理学或行为的影响。本专利技术再又提供了一种筛选治疗肺静脉及相关血管病变的药物的方法，其包括将药物给予如前面所述的非人转基因动物及其后代，并监测对病理学或行为的影响。本专利技术的目的之四在于提供了一种构建视网膜等组织中静脉血管病变的程度密切相关的条件性酪氨酸激酶受体Tie2基因敲除小鼠模型的方法，其中，该方法的具体制备步骤为：利用Cre-LoxP系统，用Tie2+/-小鼠与表达UBC-Cre/ERT2或VE-Cadherin-Cre/ERT2的转基因小鼠交配得到Tie2+/-；Cre/ERT2小鼠，再用所述Tie2+/-；Cre/ERT2小鼠与Tie2flox/flox小鼠交配分别得到基因型为Tie2flox/-；UBC-Cre/ERT2或Tie2flox/-；VE-Cadherin-Cre/ERT2、和Tie2flox/+；UBC-Cre/ERT2或Tie2flox/+；VE-Cadherin-Cre/ERT2的小鼠模型。专利技术的有益效果本专利技术的有益效果在于提出了Tie2调节化合物在制备用于治疗视网膜、皮肤、及肝脏等组织器官中静脉及相关血管病变的药物中的用途。本专利技术的有益效果还在于所建立小鼠视网膜血管病变模型的严重程度是可控的，即利用Tie2条件性基因敲除小鼠模型与表达CR本文档来自技高网...

【技术保护点】
Tie2调节化合物在制备促进视网膜、皮肤、肝脏和肺的静脉及相关血管保护作用的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.Tie2调节化合物在制备促进视网膜、皮肤、肝脏和肺的静脉及相关血管保护作用的药物中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其中所述Tie2调节化合物是Tie2受体激动剂或Tie2表达诱导剂。3.如权利要求2所述的用途，其中所述受体激动剂包括激活Tie2的配体、多肽、抗体或小分子化合物。4.如权利要求3所述的用途，其中所述配体是血管生成素。5.如权利要求2所述的用途，其中所述Tie2表达诱导剂包括激活Tie2基因表达的酶、激素、生长因子、细胞因子或抗体。6.如权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述药物用于治疗视网膜静脉血管病变相关的疾病。7.如权利要求6所述的用途，其中所述视网膜静脉血管病变相关的疾病包括糖尿病视网膜病变、湿性年龄相关黄斑变性、视网膜静脉阻塞或炎症、及早产儿视网膜病变。8.如权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述药物用于治疗皮肤静脉血管病变相关的疾病。9.如权利要求8所述的用途，其中所述皮肤静脉血管病变相关的疾病包括静脉曲张、静脉阻塞或炎症。10.如权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述药物用于治疗肝脏静脉血管与肝组织病变相关的疾病。11.如权利要求10所述的用途，其中所述肝脏血管与肝组织病变相关的疾病包括肝脏静脉及相关血管出血性血管病变、静脉阻塞或炎症。12.如权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述药物用于治疗肺静脉血管病变相关的疾病。13.如权利要求12所述的用途，其中所述肺血管病变相关的疾病包括肺静脉血栓、静脉炎症。14.一种非人转基因动物及其后代，其中所述非人转基因动物及所述后代由基因敲除诱导剂的剂量和不同时间点诱导、受外源启动子控制地进行Tie2突变型等位基因的条件性表达。15.如权利要求14所述的非人转基因动物及其后代，其中所述动物为哺乳动物。16.如权利要求15所述的非人转基因动物及其后代，其中所述哺乳动物为啮齿类动物。17.如权利要求16所述的非人转基因动物及其后代，其中所述啮齿类动物为小鼠。18.如权利要求14-17任一项所述的非人转基因动物及其后代，其中所述基因敲除诱导剂包括四环素、干扰素、激素。19.如权利要求18所述的非人转基因动物及其后代，其中所述激素为他莫昔酚。20.如权利要求14-17任一项所述的非人转基因动物及其后代，其中所述时间点为出生1-8天。21.如权利要求19任一项所述的非人转基因动物及其后代，其中所述时间点为出生1-8天，所述他莫昔酚的剂量为50-100μg/天。22.如权利要求21所述的非人转基因动物及其后代，其中所述时间点为出生1-4天，所述他莫昔酚的剂量为50-70μg/天。23.如权利要求21所述的非人...

【专利技术属性】
技术研发人员：何玉龙，储蔓，李桃桃，
申请(专利权)人：何玉龙，
类型：发明
国别省市：江苏,32