BRD4抑制剂JQ1在角膜瘢痕抑制中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种BRD4抑制剂JQ1在角膜瘢痕抑制中的应用，包括将角膜基质细胞与一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物进行接触，或给予受试者一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物；本发明专利技术发现通过所述方法可以使角膜基质细胞，接触有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物，由此减少角膜瘢痕形成、或反转、改善或治疗角膜瘢痕。本发明专利技术以BRD4为靶点，提供一种预防或治疗角膜瘢痕的药物小分子化合物JQ1，可用于该病的早期干预治疗。

Application of BRD4 inhibitor JQ1 in corneal scar inhibition

The invention provides an application of BRD4 inhibitor JQ1 on corneal scar inhibition, including reagents inhibit BRD4 expression of corneal stromal cells with an effective amount of the reagent or its derivatives contact inhibition of BRD4 expression or subjects were given an effective amount or its derivatives; the invention is found by the the method can make the corneal stromal cells, with an effective amount of the reagents to inhibit the expression of BRD4 or its derivatives, thereby reducing corneal scarring, or reverse, improving or treating corneal scar. The invention takes BRD4 as the target and provides a small molecule compound JQ1, which is used for preventing or treating corneal scar, and can be used for early intervention treatment of the disease.

【技术实现步骤摘要】
BRD4抑制剂JQ1在角膜瘢痕抑制中的应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种BRD4抑制剂JQ1在角膜瘢痕抑制中的应用。
技术介绍
角膜瘢痕是继发于多种角膜疾病的病理性改变，是许多角膜疾病造成视力不同程度损害甚至丧失的直接原因。角膜组织中含有角膜上皮细胞、基质细胞和内皮细胞，角膜的上皮细胞层受损后可迅速再生，而基质层和内皮细胞层在损伤后不可再生，角膜在外伤、炎症瘢痕愈合后引起角膜混浊、屈光力改变等。角膜损伤后，角膜基质细胞会死亡或者转变为修复表型，而修复表型可以使角膜基质细胞再生或导致纤维化瘢痕形成。在创伤修复过程中，受伤部位周围的角膜基质细胞分化为肌成纤维细胞，它们介导了细胞迁移、伤口收缩以及ECM重塑堆积，这些都严重影响了角膜的透明性及屈光性。角膜瘢痕是个较难治愈的顽症，目前针对角膜瘢痕尚无有效治疗方法，临床上尝试过多种治疗方法，如雷帕霉素、氟米龙眼液治疗，或手术治疗，如采用激光、冷冻、手术切除(植皮)、放疗或用激素局部封闭等方法，但疗效预后均不理想。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的第一目的在于提供一种BRD4抑制剂JQ1在角膜瘢痕抑制中的应用，该用途是基于专利技术人的下列发现而完成的：当角膜损伤时，TGFβ被激活，促使角膜基质细胞转化为成纤维细胞或肌成纤维细胞，并同时增强炎症反应，刺激胶原蛋白大量增多，引起ECM堆积，最终角膜瘢痕形成，平滑肌肌动蛋白α-SMA是肌成纤维细胞合成的标志，其水平的高低代表成纤维细胞活化的程度。专利技术人发现，在人角膜基质细胞HCF的分离培养过程中，于培养基中加入一定剂量的TGFβ能诱导HCF向肌成纤维细胞转化，在诱导的过程中加入不同浓度的JQ1(50-500nM)，JQ1呈浓度梯度抑制HCF向肌成纤维细胞分化，另外与对照相比，TGFβ能提高BRD4表达，而JQ1呈梯度依赖作用抑制BRD4的表达，表明表观调控蛋白BRD4与成纤维细胞分化密切相关。以正常C57小鼠建立角膜瘢痕模型，采用3mm环钻作痕，上皮刮刀刮除角膜上皮后，用刮胡刀片刮除浅基质层建立角膜瘢痕模型，成模后结膜下注射7μlJQ1(浓度为500nM，小鼠体重为25g/只)作为治疗组(PBS为对照组)，治疗后1,3,5天照相观察瘢痕治疗情况，结果表明建模后7天小鼠角膜出现显著瘢痕，JQ1结膜下注射后5天治疗组与对照组相比瘢痕显著改善，免疫荧光、westernblot结果都显示治疗后α-SMA表达量降低，表明JQ1能部分反转、治疗角膜瘢痕。以上发现促成了本专利技术。其中，本专利技术术语为以下含义：TGF-β转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)；BRD4，BET家族的一个成员，能够特异性识别并结合染色质组蛋白H3/H4乙酰化赖氨酸残基，调节基因转录，是细胞生长所必需，与细胞周期调控、DNA复制及基因重排等密切相关，并在肿瘤发生发展过程中起重要作用。JQ1作为一种小分子化合物，是BET蛋白家族的抑制剂，作用于BRD4。ECM，细胞外基质；HCF，人角膜基质细胞；α-SMA，α平滑肌肌动蛋白。即本专利技术的第一目的在于提供一种制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用，包括将角膜基质细胞与一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物进行接触。优选地，在本专利技术所述的制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用中，所述应用为使角膜基质细胞，接触有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物，由此减少角膜瘢痕形成、或反转、改善或治疗角膜瘢痕。更优选地，在本专利技术所述的制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用中，所述角膜基质细胞为人角膜基质细胞。优选地，在本专利技术所述的制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用中，所述抑制BRD4表达的试剂为JQ1或其衍生物。优选地，在本专利技术所述的制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用中，所述JQ1的浓度为50-500nM。本专利技术的另一目的在于提供一种用于制备预防或治疗受试者中的角膜瘢痕的药物中的应用，所述应用包括给予受试者一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物。优选地，在本专利技术用于制备预防或治疗受试者中的角膜瘢痕的药物中的应用中，所述应用包括使角膜基质细胞，接触有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物，由此减少角膜瘢痕形成、或反转、改善或治疗角膜瘢痕。更优选地，在本专利技术用于制备预防或治疗受试者中的角膜瘢痕的药物中的应用中，所述受试者为哺乳动物；更优选地，所述受试者为小鼠；最优选地，所述受试者为人。优选地，在本专利技术用于制备预防或治疗受试者中的角膜瘢痕的药物中的应用中，所述抑制BRD4表达的试剂为JQ1或其衍生物。优选地，在本专利技术用于制备预防或治疗受试者中的角膜瘢痕的药物中的应用中，所述JQ1的浓度为50nM～500nM。由上可见，本专利技术至少有以下优点，即：现有技术中JQ1是一种BET蛋白家族抑制剂，可抑制多发性骨髓瘤、脑胶质瘤、卵巢癌、乳腺癌、胶质母细胞瘤、中线癌等多种肿瘤的生长。而本专利技术发现TGFβ由角膜上皮细胞释放，在正常角膜中处于静止状态，当角膜损伤时，TGFβ被激活，促使基质细胞转化为成纤维细胞或肌成纤维细胞，并同时增强炎症反应，刺激胶原蛋白大量增多，引起ECM堆积，最终角膜瘢痕形成。平滑肌肌动蛋白α-SMA是一种新陈代谢活跃和具有高度收缩性的细胞，是肌成纤维细胞合成的标志，其水平的高低代表成纤维细胞活化的程度。组蛋白乙酰化是表观遗传研究的重要组成部分，BRD4通过与乙酰化赖氨酸结合调节基因的转录表达，是慢性纤维化的驱动因子，而小分子化合物JQ1则是其抑制剂，本专利技术以BRD4为靶点，提供一种预防或治疗角膜瘢痕的药物小分子化合物JQ1，可用于该病的早期干预治疗。附图说明图1为本专利技术的一个实施例中的α-SMA表达水平的免疫荧光检测图；图2为本专利技术的一个实施例中的α-SMA表达水平的westernblot检测图；图3为本专利技术的一个实施例中的结膜注射JQ1治疗角膜瘢痕对照图；图4为本专利技术的一个实施例中的JQ1对α-SMA表达水平的免疫荧光检测图；图5为本专利技术的一个实施例中的JQ1对α-SMA表达水平的westernblot检测图。具体实施方式在本专利技术的一个实施例中，给出了治疗或预防角膜瘢痕形成的方法，该方法包括将角膜基质细胞与一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物进行接触。优选地，在本专利技术的一个实施例中，所述方法为使角膜基质细胞，接触有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物，由此减少角膜瘢痕形成、或反转、改善或治疗角膜瘢痕。优选地，在本专利技术的一个实施例中，所述角膜基质细胞为人角膜基质细胞。优选地，在本专利技术的一个实施例中，所述抑制BRD4表达的试剂为JQ1或其衍生物。优选地，在本专利技术的另一个实施例中，所述JQ1的浓度为50nM～500nM。优选地，在本专利技术的一个实施例中，还提供了一种预防或治疗受试者中的角膜瘢痕的方法，所述方法包括给予受试者一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物。优选地，在本专利技术的一个实施例中，所述方法包括使角膜基质细胞，接触有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物，由此减少角膜瘢痕形成、或反转、改善或治疗角膜瘢痕。优选地，在本专利技术的一个实施例中，所述受试者为哺乳动物；更优选地，所述受试者为小鼠；最优选地，所述受试者为人。优选地，在本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用，所述应用包括将角膜基质细胞与一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物进行接触。

【技术特征摘要】
1.一种用于制备治疗或预防角膜瘢痕形成的药物中的应用，所述应用包括将角膜基质细胞与一种有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物进行接触。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为使角膜基质细胞，接触有效量的抑制BRD4表达的试剂或其衍生物，由此减少角膜瘢痕形成、或反转、改善或治疗角膜瘢痕。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述角膜基质细胞为人角膜基质细胞。4.根据权利要求1～3所述的应用，其特征在于，所述抑制BRD4表达的试剂为JQ1或其衍生物。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述JQ1的浓度为50nM～500nM。6.一种用于制...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲明俐，周庆军，陈敏，张晓萍，田乐，
申请(专利权)人：山东省眼科研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37