复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法。包括以下步骤：将氨基酸类凝胶因子加热溶于细胞培养基中，过滤、除菌，用含有凝胶因子的细胞培养基制备细胞悬浮液；在0‑4℃下向所述细胞悬浮液中滴加含有复合冷冻保护剂的细胞培养基，混合均匀；所述复合冷冻保护剂是由渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂的混合；将冻存管放入程序冻存盒在‑80℃下冷冻24h后，再将冻存管移入液氮中冻存。氨基酸类凝胶因子自组装形成的超分子凝胶具有独特的三维网状结构，在滴加冷冻保护剂时，细胞被超分子凝胶所包裹，减小了冷冻保护剂的渗透损伤；在降温和复温过程中，因为超分子凝胶的三维网状结构限制了冰晶的生长和再结晶，从而减小了冰晶损伤。

【技术实现步骤摘要】
复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法
本专利技术属于细胞低温冻存
，具体涉及一种冷冻雪旺细胞的方法。
技术介绍
神经的修复和再生一直是生物学和组织工程的研究热点，而雪旺细胞(Schwanncell)在神经的再生方面起到了重要的作用。因此许多相关的的研究都需要用到雪旺细胞，那么如何体外大量的存储雪旺细胞就成了一大难题，而低温冻存是目前最常见且有效的保存方法。低温冻存是将细胞置于在超低温(通常为-80℃或更低)环境中，抑制细胞的新陈代谢以达到长期储存的目的。目前，低温冻存技术已经成功应用到干细胞、血红细胞、肝细胞、精子、卵母细胞、骨骼细胞、皮肤、角膜等细胞和组织的保存过程中。关于细胞的低温冻存国内外已有相关文献报道。低温冻存的方法主要有程序化慢速冻存和玻璃化冻存两种，在冷冻过程中的损伤主要由如下两个的因素造成：(1)溶液损伤：降温过程中细胞外溶液中水先结晶，使得细胞外液渗透压加大，细胞内的水分会大量渗透到细胞外溶液中，导致细胞脱水急剧收缩，造成细胞损伤甚至死亡；(2)细胞内冰晶损伤：同样在降温过程中，当温度达到细胞内液的冰点时，细胞内液中的水会开始结晶，对细胞造成不可避免的损伤，而冷本文档来自技高网...

【技术保护点】
复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：1)将氨基酸类凝胶因子加热溶于细胞培养基中，过滤、除菌，用含有凝胶因子的细胞培养基制备细胞悬浮液；2)在0‑4℃下形成超分子凝胶；3)滴加含有复合冷冻保护剂的细胞培养基，待体系达到溶胀平衡；所述复合冷冻保护剂是由渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂的混合；4)放入冻存管在程序冻存盒冷冻，再将冻存管移入液氮中冻存。

【技术特征摘要】
1.复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：1)将氨基酸类凝胶因子加热溶于细胞培养基中，过滤、除菌，用含有凝胶因子的细胞培养基制备细胞悬浮液；2)在0-4℃下形成超分子凝胶；3)滴加含有复合冷冻保护剂的细胞培养基，待体系达到溶胀平衡；所述复合冷冻保护剂是由渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂的混合；4)放入冻存管在程序冻存盒冷冻，再将冻存管移入液氮中冻存。2.如权利要求1所述复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法，其特征在于所述氨基酸类凝胶因子按以下方法制备而来：以Boc-L-酪氨酸甲酯通过烷基化反应制备得到十二烷基-Boc-L-酪氨酸甲酯；十二烷基-Boc-L-酪氨酸甲酯通过水...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈万煜，陈熹，
申请(专利权)人：武汉理工大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42