一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法技术

本发明专利技术公开了一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法，包括如下步骤：金针菜母株选择，外植体剥取，对外植体进行消毒，初代培养，增殖培养，壮苗培养，生根培养，组培苗炼苗移栽，穴盘苗炼苗，本发明专利技术操作简单、成本低、能有效的促使大乌嘴金针菜在短期内进行快速繁殖，在繁殖的过程中保持大乌嘴金针菜的原种性、稳定性及一致性，采用本发明专利技术的方式进行组织培养，在穴盘中培育2～3个月后，穴盘苗长至10～15 cm，苗健壮、挺拔和新鲜，叶片在8片叶以上，形态完整，叶片大小协调，叶色具原品种特性，有光泽，具有完整而发达的根系，根系充满穴盘孔，能轻易拔出而基质不散，同一批次90%以上的苗高达到标准，适合宿迁地区大面积区域种植。

Method of purification and rejuvenation of a large black lily of the mouth

The invention discloses a method for purification and rejuvenation of a large beak lily, which comprises the following steps: lily plant selection, explant stripping, explant disinfection, primary culture, proliferation culture, tissue culture, rooting culture, the plantlets were transplanted seedlings, seedling, the invention has simple operation and low cost, can effectively promote the Ukraine mouth for rapid propagation of Lily in the short term, keep the Ukraine mouth lily species, stability and consistency in the process, the mode of the invention for tissue culture, cultivation tray in 2 ~ 3 months after seedling length from 10 to 15 cm, and, strong seedling and fresh leaves in more than 8 leaf morphology, leaf size, leaf color coordination, with the original variety characteristic, shiny, with a complete and well-developed root system, root full aperture disk, can light Easy to pull out and the matrix does not disperse, the same batch of more than 90% of the seedlings to the standard, suitable for large areas of Suqian planting.

【技术实现步骤摘要】
一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法
本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法。
技术介绍
金针菜又名“黄花菜”，属百合科萱草属植物，具有丰富的营养成分，与香菇、木耳、冬笋，同为素菜中的珍品。主要分布在江苏、湖南、湖北、四川等地，宿迁是江苏省金针菜主要产地之一，尤以“大乌嘴”花蕾长而粗壮，色泽黄亮，肉质紧实，口感甜香脆，品质优而闻名中外；然而，由于一直采用传统的栽培技术，忽视了大乌嘴的提纯复壮工作，导致其混杂严重、种性退化、品质和产量下降；针对这一问题，本专利技术提供一种大乌嘴金针菜组培快繁方法，包括外植体的建立、启动培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤。
技术实现思路
本专利技术针对
技术介绍
中的不足，提供一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法，目的在于：促使大乌嘴金针菜能在短期内进行快速繁殖，在繁殖的过程中保持大乌嘴金针菜的原种性、稳定性及一致性。本专利技术的目的是通过如下途径实现的：一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法，包括如下步骤：（1）金针菜母株选择选择环境：需在连续晴天为3天以上的上午，无大风和空气污染的情况下；对母株的形态要求：具有典型性状，无病害，形态健壮；取株要求：离根部5cm处挖出整株，轻轻抖落根部泥土，减少植株表面附带的微生物和害虫；（2）外植体剥取剥去外层叶片，用刀片切取茎尖作为外植体，注意刀口要平整，切割次数尽量少，一般大小约为0.5cm*0.5cm*0.5cm；（3）对外植体进行消毒将茎尖放入大烧杯中，用水摇晃冲洗3次后，加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液，再放在水龙头下，流水冲洗2小时后用镊子夹取，之后再用无菌水冲洗3次，然后放入3%的山农一号杀灭剂，灭菌18小时；（4）初代培养在无菌滤纸上将表面灭菌处理后的外植体擦干，切除外表皮，之后放入初代培养基中进行培养；3天后观察有无污染，7～15天后，幼芽生出；所述初代培养基包括MS4.74g/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；（5）增殖培养将初代培养生出的幼芽切割掉，留下茎尖部分接入到增殖培养基1中进行培养；培养周期为45～60天，诱导出愈伤组织，然后再放入增殖培养基2中进行培养，培养周期为45～60天，诱导出新芽；所述增殖培养基1包括MS4.74g/L+6-BA3.0mg／L+NAA0.3～0.5mg／L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；所述增殖培养基2包括MS4.74g/L+6-BA3.0mg／L+NAA0.1～0.2mg／L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；（6）壮苗培养将经过增殖培养基2培养后的幼芽上的愈伤去除后，接入壮苗培养基中，培养周期为20～30天后，幼苗高度可达2～5cm；所述壮苗培养基包括MS4.74g/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；（7）生根培养将经过壮苗培养基培养后的幼苗中生长健壮、叶色正常、叶片舒展、适于生根的无根苗，接种在生根培养基中进行培养，培养20～30天后幼苗基部长出数根新根；所述生根培养基包括1/2MS39.3g/L+NAA0.2mg/L（或者IBA0.2mg/L）+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L,pH5.8～6.0；（8）组培苗炼苗移栽①组培苗选取标准幼苗基部长出3条以上、长1～3cm的新根，长势好、色白健壮，基本无愈伤组织，苗高一般3～5cm，叶片数一般不少于3片，作为组培苗；②组培苗炼苗将选取的组培苗，进行炼苗处理，先旋松瓶盖1～3天，然后打开瓶盖2～4天，之后炼苗3～7天；③移瓶用手指或镊子轻轻取出瓶中的组培苗，放入清水内洗去琼脂，并将其进行分级等待移栽，冬季水温为20℃～25℃；④组培苗定植将经过移瓶清洗的组培苗放入混合基质的穴盘中，首先用竹签在混合基质的穴盘每个穴位上打下能容纳根系的孔，然后再把组培苗逐一放入每个穴位的孔中，最后覆土压实，分类，分日期摆放整齐；所述混合基质包括泥碳土、珍珠岩和蛭石，三者的体积比为3：1：1，此时组培苗成了穴盘苗；（9）穴盘苗炼苗将穴盘苗放在温室大棚中，先用遮阳网覆盖，第一天上午8：00-10:00进行采光、通风，然后每日逐渐增加采光和通风时间，7天后，待穴盘苗长出新根后，进行正常的管理，温度保持在15～25℃，相对湿度保持在60～80%，移栽第4周～8周，每周喷施叶面肥一次，氮:磷:钾=15:15:15，浓度为1000倍，移栽8周后，视穴盘苗生长情况，浓度逐渐增加；培育2～3个月，穴盘苗长至10～15cm，苗健壮、挺拔和新鲜，叶片在8片叶以上。本专利技术的有益效果：本专利技术操作简单、成本低、能有效的促使大乌嘴金针菜在短期内进行快速繁殖，在繁殖的过程中保持大乌嘴金针菜的原种性、稳定性及一致性，采用本专利技术的方式进行组织培养，在穴盘中培育2～3个月后，穴盘苗长至10～15cm，苗健壮、挺拔和新鲜，叶片在8片叶以上，形态完整，叶片大小协调，叶色具原品种特性，有光泽，具有完整而发达的根系，根系充满穴盘孔，能轻易拔出而基质不散，同一批次90%以上的苗高达到标准，并且无病虫害，经过多次实验反复研究表明，本专利技术重复利用率高，适合宿迁地区大面积区域种植。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。实施例准备工作，购买济南普朗特生物科技有限公司生产的山农一号（III型），许可证号：201300720；购买上海雨涵生物科技有限公司生产的MS培养基，编号为A0025-500G；购买济南普朗特生物科技有限公司生产的1/2MS干粉培养基，许可号：20120805；制作初代培养基：称取MS4.74g/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L溶于蒸馏水中，调节pH5.8～6.0；制作增殖培养基1：在制作完成的初代培养基中+6-BA3.0mg／L+NAA0.3～0.5mg／L，制作增殖培养基2：在制作完成的初代培养基中+6-BA3.0mg／L+NAA0.1～0.2mg／L；制作壮苗培养基：与初代培养基相同；制作生根培养基：1/2MS39.3g/L+NAA0.2mg/L或IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L溶于蒸馏水中，调节pH5.8～6.0；所述一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法，包括如下步骤：（1）金针菜母株选择：需在连续晴天为3天以上的上午，无大风和空气污染的情况下；母株具有典型性状，无病害，形态健壮；离根部5cm处挖出整株，轻轻抖落根部泥土，减少植株表面附带的微生物和害虫；（2）外植体剥取：剥去外层叶片，用刀片割去根系2-5cm，直接剥取茎尖做外植体，一般大小约为0.5cm*0.5cm*0.5cm；（3）外植体消毒:将茎尖放入大烧杯中，用水摇晃冲洗3次后，加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液，流水冲洗2小时后用镊子夹取，之后再用无菌水冲洗3次，然后放入3%的山农一号杀灭剂，灭菌18小时；所述山农一号是一种杀灭剂，可以直接从市场中买到；（4）初代培养，用无菌滤纸将灭菌处理后的外植体表面擦干，在不锈钢托盘上切割掉外表层，之后放入初代培养基中进行培养；3天后检查有无污染，初代培养7～15天后，幼芽生出；（5）增殖培养：将初代培养生出的幼芽切除，留下茎尖部分接种到增殖培养基1中进行培养；培养周期为45～60天，诱导出愈伤组织，然后再放入增殖培养基2中进行培养，培养周期为45～60天，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）金针菜母株选择选择环境：需在连续晴天为3天以上的上午，无大风和空气污染的情况下；对母株的形态要求：具有典型性状，无病害，形态健壮；取株要求：离根部5cm处挖出整株，轻轻抖落根部泥土，减少植株表面附带的微生物和害虫；（2）外植体剥取 剥去外层叶片，用刀片切取茎尖作为外植体，注意刀口要平整，切割次数尽量少，一般大小约为0.5 cm*0.5 cm *0.5 cm；（3）对外植体进行消毒 将茎尖放入大烧杯中，用水摇晃冲洗3次后，加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液，再放在水龙头下，流水冲洗2小时后用镊子夹取，之后再用无菌水冲洗3次，然后放入3%的山农一号杀灭剂，灭菌18小时；（4）初代培养在无菌滤纸上将表面灭菌处理后的外植体擦干，切除外表皮，之后放入初代培养基中进行培养；3天后观察有无污染，7～15 天后，幼芽生出；所述初代培养基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L，pH 5.8～6.0；（5）增殖培养将初代培养生出的幼芽切割掉，留下茎尖部分接入到增殖培养基1中进行培养；培养周期为45～60 天，诱导出愈伤组织，然后再放入增殖培养基2中进行培养，培养周期为45～60天，诱导出新芽；所述增殖培养基1包括MS 4.74g/L+6‑BA3.0mg／L+ NAA 0.3～0.5mg／L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L，pH 5.8～6.0；所述增殖培养基2包括MS 4.74g/L +6‑BA3.0mg／L +NAA 0.1～0.2mg／L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L，pH 5.8～6.0；（6）壮苗培养将经过增殖培养基2培养后的幼芽上的愈伤去除后，接入壮苗培养基中，培养周期为20～30天后，幼苗高度可达2～5cm；所述壮苗培养基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L，pH 5.8～6.0；（7）生根培养 将经过壮苗培养基培养后的幼苗中生长健壮、叶色正常、叶片舒展、适于生根的无根苗，接种在生根培养基中进行培养，培养20～30天后幼苗基部长出数根新根；所述生根培养基包括1/2MS 39.3g/L + NAA 0.2 mg/L（或者IBA 0.2 mg/L）+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L, pH 5.8～6.0；（8）组培苗炼苗移栽① 组培苗选取标准幼苗基部长出3条以上、长1～3 cm的新根，长势好、色白健壮，基本无愈伤组织，苗高一般3～5 cm，叶片数一般不少于3片，作为组培苗；② 组培苗炼苗将选取的组培苗，进行炼苗处理，先旋松瓶盖1～3天，然后打开瓶盖2～4天，之后炼苗3～7 天；③ 移瓶用手指或镊子轻轻取出瓶中的组培苗，放入清水内洗去琼脂，并将其进行分级等待移栽，冬季水温为20 ℃～25 ℃；④ 组培苗定植将经过移瓶清洗的组培苗放入混合基质的穴盘中，首先用竹签在混合基质的穴盘每个穴位上打下能容纳根系的孔，然后再把组培苗逐一放入每个穴位的孔中，最后覆土压实，分类，分日期摆放整齐；所述混合基质包括泥碳土、珍珠岩和蛭石，三者的体积比为3：1：1，此时组培苗成了穴盘苗；（9）穴盘苗炼苗将穴盘苗放在温室大棚中，先用遮阳网覆盖，第一天上午8：00‑10:00进行采光、通风，然后每日逐渐增加采光和通风时间，7天后，待穴盘苗长出新根后，进行正常的管理，温度保持在15～25℃，相对湿度保持在60～80%，移栽第4周～8周，每周喷施叶面肥一次，氮: 磷: 钾=15:15:15，浓度为1000倍，移栽8周后，视穴盘苗生长情况，浓度逐渐增加；培育2～3个月，穴盘苗长至10～15cm，苗健壮、挺拔和新鲜，叶片在8片叶以上。...

【技术特征摘要】
1.一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）金针菜母株选择选择环境：需在连续晴天为3天以上的上午，无大风和空气污染的情况下；对母株的形态要求：具有典型性状，无病害，形态健壮；取株要求：离根部5cm处挖出整株，轻轻抖落根部泥土，减少植株表面附带的微生物和害虫；（2）外植体剥取剥去外层叶片，用刀片切取茎尖作为外植体，注意刀口要平整，切割次数尽量少，一般大小约为0.5cm*0.5cm*0.5cm；（3）对外植体进行消毒将茎尖放入大烧杯中，用水摇晃冲洗3次后，加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液，再放在水龙头下，流水冲洗2小时后用镊子夹取，之后再用无菌水冲洗3次，然后放入3%的山农一号杀灭剂，灭菌18小时；（4）初代培养在无菌滤纸上将表面灭菌处理后的外植体擦干，切除外表皮，之后放入初代培养基中进行培养；3天后观察有无污染，7～15天后，幼芽生出；所述初代培养基包括MS4.74g/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；（5）增殖培养将初代培养生出的幼芽切割掉，留下茎尖部分接入到增殖培养基1中进行培养；培养周期为45～60天，诱导出愈伤组织，然后再放入增殖培养基2中进行培养，培养周期为45～60天，诱导出新芽；所述增殖培养基1包括MS4.74g/L+6-BA3.0mg／L+NAA0.3～0.5mg／L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；所述增殖培养基2包括MS4.74g/L+6-BA3.0mg／L+NAA0.1～0.2mg／L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L，pH5.8～6.0；（6）壮苗培养将经过增殖培养基2培养后的幼芽上的愈伤去除后，接入壮苗培养基中，培养周期为20～30天后，幼苗高度可达2～5cm；所述壮...

【专利技术属性】
技术研发人员：周玲玲，张黎杰，田福发，姜若勇，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院宿迁农科所，
类型：发明
国别省市：江苏,32