一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，具体步骤如下：步骤一，准备亚硝酸盐溶液，具体包括配置亚硝态氮NO

Quick detection method for nitrifying effect of nitrifying bacteria

The invention discloses a rapid detection method for nitrifying effect of nitrifying bacteria, and the concrete steps are as follows: Step 1. Preparing nitrite solution, including configuring nitrite nitrogen NO;

【技术实现步骤摘要】
一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法
本专利技术属于水产养殖领域，具体指一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法。
技术介绍
硝化细菌是一种环境生态微生物，它在促进水域生态系统的氮循环和保持健康的水产养殖环境发挥着巨大的作用。近年来，随着水产养殖规模日益扩大和集约化程度不断提高，水质污染的问题也随之日益加重。在养殖水域形成的众多污染物中，亚硝酸盐尤其突出，也最为有害，它对养殖动物有显著毒性。如水体中的亚硝酸盐含量较高，预示水质状况恶化，会引起养殖动物中毒，许多疾病症状由此发生，严重者会导致死亡。一般的水产养殖规律是，在养殖的中后期，随着水体中残饵和排泄物增加和逐渐积累，并伴随着藻体突发死亡等因素，水体的亚硝态氮往往不能向硝态氮正常转化，硝化通道受阻，使得水体亚硝酸盐含量急剧升高。在居高不下的情况下，很容易使鱼虾等水产品在生长后期在将临近收获的时候发生亚硝酸盐中毒，从而造成巨大损失。所以解决好亚硝酸盐中毒问题，是水产养殖取得成功的一个关键。目前，对于处理亚硝酸盐中毒的具体措施，虽然有物理方法或化学方法或生物学方法等多种多样，但比较安全也比较有效的措施，还是采用专业生态微生物硝化细菌，这是国内外水产养殖的共识，也是目前解决亚硝酸盐中毒采用的主要办法。硝化细菌的作用机理，主要是通过生物氧化通常称为硝化反应的转化途径，在一定温度环境和反应时间条件下，可将养殖水体中有毒的亚硝酸盐转化为无毒的硝酸盐，具体的生物化学反应步骤如图1所示。在现有技术中，对于水体亚硝酸盐实际含量水平，可按国标GB/T7493-1987水质亚硝基态氮的分光光度法进行测定，也可采用国内外生产的各种形式和规格的水质测定仪进行测定，但这些测定方法都不是直接测定硝化细菌硝化效果的方法。对所有水产养殖企业来说，如采用了硝化细菌来降低亚硝酸盐含量，最迫切需要知道的是，当产品在投入养殖水体后是不是有效、效果高低如何、能不能把水体中的亚硝酸盐降下来。因此希望能找到预测硝化效果的快速方法的同时，又能够检测出市场上各种硝化细菌产品的真正效果，一直是本领域技术人员有待解决的技术难题。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中存在的问题，公开了一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，该方法采用多个有盖的塑料瓶或玻璃瓶作为硝化反应容器，建立亚硝酸盐底物溶液的不同梯度，分别加入1g或1ml单位硝化细菌，组成硝化反应液，形成硝化反应体系。然后在保证一定温度和反应时间的条件下，进行一系列的硝化反应。最后采用格利斯比色试剂比色，应用该比色系统对反应物亚硝酸盐显玫瑰红色，而对反应产物硝酸盐显无色这一特征反应，通过比色就可直接观察到亚硝酸盐的转化结果，并通过硝化反应所转化形成的无色体积，来具体量化硝化细菌在降低亚硝酸盐浓度的作用效果。本专利技术是这样实现的，一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，具体步骤如下：步骤一，准备亚硝酸盐溶液；步骤二，配置亚硝酸盐硝化反应体系；步骤三，硝化反应；步骤四，制备比色试剂；步骤五，比色检测；步骤六，比色结果和硝化效果评估。进一步，所述的亚硝酸盐溶液，具体指配置的亚硝基态氮标准工作液，或取含亚硝酸盐的水产养殖水。进一步，所述的步骤二具体为：2.1，采用有盖的容器作为硝化反应容器，将步骤一中一定浓度的亚硝酸盐溶液，在瓶中配置成不同体积梯度的反应底物溶液，反应容器包括塑料瓶或玻璃瓶；2.2，再向各个不同体积梯度的反应底物溶液反应瓶中分别加入1g或1ml单位硝化细菌，形成不同体积梯度的硝化反应体系。可以根据需要选择反应底物量与菌种的比例确定检测范围；进一步，所述的步骤三具体为：3.1，将上述硝化反应瓶盖紧，充分振摇，使硝化细菌溶出分散，与底物混合均匀；3.2，把硝化反应瓶放入25℃～35℃的恒温箱，维持16～22小时进行硝化反应。进一步，所述的步骤四具体为：4.1，制备格利斯试剂Ⅰ：称取分析纯对氨基苯磺酸0.5g溶于150mL30％冰醋酸，避光保存；4.2，制备格利斯试剂Ⅱ：称取分析纯α-萘胺0.5g加入50mL蒸馏水中，煮沸至刻度，然后缓缓加入30％冰醋酸溶液15mL，使α-萘胺完全溶解，过滤，0℃～10℃冰箱保存。进一步，所述的步骤五具体为：5.1，将各个硝化反应瓶中的硝化反应液以及不加硝化细菌作为对照的硝化反应底物溶液，分别加到各比色管25ml刻度处，按体积梯度从小到大排列；5.2，对每个比色管各加入0.5ml格利斯试剂Ⅰ，后再加入0.5ml格利斯试剂Ⅱ，摇匀，静置，在比色后5～8分钟观察结果；进一步，所述的步骤六具体为：，6.1，第一种情况：若步骤5中所有硝化反应液的比色管都显示玫瑰红色，且色度与对应的对照管没有差异，显示硝化反应不产生硝化效果，可认为此硝化细菌无效，亚硝酸盐的去除率为0％；6.2，第二种情况：若步骤5中有的硝化反应液的比色管没有红色生成，显示为无色，即表明这个硝化反应瓶中反应液所含的亚硝酸盐已经完全转化为硝酸盐，亚硝酸盐的去除率为100％；若在多个显示为无色的体积梯度硝化反应瓶中，取梯度中最大的无色体积表示硝化效果；6.3，第三种情况：若步骤5中有的体积梯度硝化反应瓶对应的比色管还显红色，但与对照管的色度相比有明显差异，只需对色度最淡、最接近无色的硝化反应瓶溶液，采用与对照稀释液对比检测的方法确定硝化效果。具体操作过程如下：分别吸取作为对照液的亚硝酸盐底物溶液2.5mL或5mL或10mL或15mL或20mL到各比色管，各加水到25mL刻度稀释，然后再与硝化反应液的比色管同时比色对比，找到色度相同或最接近的两者，则可按如下公式计算出此硝化反应比色管对应的硝化反应瓶中亚硝酸盐去除率(％)：然后再按如下公式计算出它的等同无色体积(ml)来表示它的硝化效果：等同无色体积(ml)＝反应液体积(ml)×亚硝酸盐去除率(％)。比较上述两种硝化效果表示，取其中最大无色体积或等同无色体积(ml计)表示此硝化细菌最高硝化效果，即当最大无色体积大于等同无色体积时，以最大无色体积表示此硝化细菌最高硝化效果；当等同无色体积大于最大无色体积时，则取等同无色体积表示此硝化细菌最高硝化效果。本方法在上述中提到的硝化细菌最高硝化效果的含义，具体是指1毫升或1克单位硝化细菌，作用于一定浓度的亚硝酸盐底物溶液，通过硝化反应后，因硝化细菌具有转化溶液中亚硝酸盐为硝酸盐的功能，当采用格利斯试剂比色，基于其对亚硝酸盐显示红色，而对硝酸盐显示无色的特有反应，把硝化反应液比色后显示的无色作为硝化效果的特征标志，并取不同体积梯度硝化反应产生的最大无色体积或等同无色体积作为代来量化硝化细菌的最高硝化效果。根据硝化细菌在硝化反应中所形成的最大无色(或等同无色)体积作为硝化效果的数据，可把硝化细菌产生的硝化效果划分为无效(无色或等同无色体积为0ml)、有效(无色或等同无色体积在0ml以上，500ml以下)、显效(无色或等同无色体积在500ml以上，1000ml以下)和高效(无色或等同无色体积在1000ml尽快以上)四种效果等级。本专利技术相对于现有技术的有益效果在于：1)本专利技术的快速检测方法，可广泛用于水产养殖领域。亚硝酸盐中毒是水产养殖中经常发生的严重问题，尤其是养虾业。目前解决这个问题的最有效措施主要是及时向中毒养殖水域投放有效硝化细菌，尽早地使养殖水的亚硝酸盐浓度降下来，尽快产生解毒效果。但是目本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤一，准备亚硝酸盐溶液；步骤二，配置亚硝酸盐硝化反应体系；步骤三，硝化反应；步骤四，制备比色试剂；步骤五，比色检测；步骤六，比色结果和硝化效果评估。

【技术特征摘要】
1.一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤一，准备亚硝酸盐溶液；步骤二，配置亚硝酸盐硝化反应体系；步骤三，硝化反应；步骤四，制备比色试剂；步骤五，比色检测；步骤六，比色结果和硝化效果评估。2.根据权利要求1所述的一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，所述的步骤一中的亚硝酸盐溶液包括配置的亚硝基态氮标准工作液，或取含亚硝酸盐的养殖水。3.根据权利要求1所述的一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，所述的步骤二具体为：2.1，采用有盖的容器作为硝化反应容器，将步骤一中准备的亚硝酸盐溶液在瓶中配置成不同体积梯度的硝化反应底物溶液；2.2，再向各个不同体积梯度的硝化反应底物溶液瓶分别加入1g或1ml单位的硝化细菌，组成硝化反应溶液，形成梯度硝化反应体系。4.根据权利要求3所述的一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，所述的步骤三具体为：3.1，将上述不同体积梯度的硝化反应瓶盖紧，充分振摇，使硝化细菌溶出分散，与底物混合均匀；3.2，把硝化反应瓶放入25℃～35℃的恒温箱，维持16～22小时进行硝化反应。5.根据权利要求1所述的一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，所述的步骤四具体为：4.1，制备格利斯试剂Ⅰ：称取分析纯对氨基苯磺酸0.5g溶于150mL30％冰醋酸，避光保存；4.2，制备格利斯试剂Ⅱ：称取分析纯α-萘胺0.5g加入50mL蒸馏水中，煮沸至刻度，然后缓缓加入30％冰醋酸溶液15mL，使α-萘胺完全溶解，过滤，0℃～10℃冰箱保存。6.根据权利要求5所述的一种硝化细菌硝化效果的快速检测方法，其特征在于，所述的步骤五具体为：5.1，将各个不同梯度硝化反应瓶中的硝化反应液以及不加硝化细菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹益东，邹苏燕，薛宏基，邢华，刘凤琴，
申请(专利权)人：无锡市中渔健宝生物有限公司，江苏天石生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32