本发明专利技术公开了一种硝化能力强的硝化细菌的筛选方法，包括如下步骤：（1）用同种堆肥料划分成2个以上的等份，在实验室中分别制堆肥；（2）测量不同肥堆、不同阶段的温度、pH值、有机质、氨态氮、亚硝酸盐氮及硝态氮的含量；（3）从升温腐熟块的堆肥样品中，筛选出圆形突起、边缘整齐、淡黄色表面光滑的菌株；（4）经过富集培养、菌种初筛、株菌种复筛得到亚硝酸盐转化成硝酸盐的菌株；株该菌株为芽孢细菌，命名为Bacillus sp. N7，已在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏号为CGMCC10231。本发明专利技术的优点：筛选获得的新菌株能有效促进氮素转化，减少堆肥过程中氨氮排放，改善环境污染，并能提高堆肥中氮素的含量，从而提高堆肥的质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，具体是硝化能力强的硝化细菌的筛选及其在有机固体废弃物处理中的应用。
技术介绍
堆肥是一种有效利用固体有机废弃物的方法，尤其是对禽畜粪便类，既可以将粪便无害化处理，减少臭味的排放，又可以将粪便中的养分和有机质循环利用到耕地土壤中，有利于废弃物的资源化利用。而传统的堆肥是一个完全由自然微生物参与的过程，其微生物数量和种类都十分有限，因此存在升温慢、腐熟时间长、腐熟不够彻底等缺陷，加入外源菌剂则可以解决传统堆肥存在的诸多问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为堆肥提供。 实现本专利技术目的的技术方案是: 一种硝化能力强的硝化细菌的筛选方法，包括如下步骤: 1、用同种堆肥料划分成2个以上的等份，在实验室中分别制堆肥； 2、测量不同肥堆、不同阶段的温度、pH值、有机质、氨态氮、亚硝酸盐氮及硝态氮的含量; 3、从升温腐熟块的堆肥样品中，筛选出圆形突起、边缘整齐、淡黄色、表面光滑的菌株; 4、经过富集培养、菌种初筛、菌种复筛得到亚硝酸盐转化成硝酸盐的菌株；该菌株为芽孢杆菌，分类命名为Bacillus sp.，已于2014年12月19日在北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研宄所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为 CGMCC N0.10231。 这种菌种的硝化能力的测试:从堆肥中筛选出的硝化细菌，在锥形瓶中，在温度35°C、初始pH=6、接种量为1%、转速140r/min进行测试，其亚硝酸盐转化率为35.42%。将该菌制成发酵菌剂添加到堆肥中能促进氮素代谢和转化，提高总氮含量0.6%以上。 所述的检测硝酸根转化率的方法是:同样取4支25 mL具塞比色管(一只作空白对照，三只作平行样品)，在样品管中加入I mL经8000 rmin-1离心2 min后的培养液，用去离子水定容至25 mL，加入0.1 M的HCl溶液0.5 mL，再加入8 gL_l的氨基磺酸溶液0.05 mL，盖上盖子并摇匀，在λ=220 nm及λ =275 nm处分别测吸光度值，用空白管校正仪器其中一处的零点，最后的吸光度按如下公式得出:A=A220-2A275 ； 分别测量并计算出三个样品的吸光度，取平均值，查标准曲线得出硝酸根含量，再根据初始的亚硝酸根含量得出其转化率。 本专利技术的优点:筛选获得的新菌株能有效促进氮素转化，硝化能力强，减少堆肥过程中氨氮排放，改善环境污染，并能提高堆肥中氮素的含量，从而提高堆肥的质量。【具体实施方式】一种硝化能力强的硝化细菌的筛选方法，包括如下步骤: 1、用同种堆肥料划分成2个以上的等份，在实验室中分别制堆肥； 2、测量不同肥堆、不同阶段的温度、pH值、有机质、氨态氮、亚硝酸盐氮及硝态氮的含量; 3、从升温腐熟块的堆肥样品中，筛选出圆形突起、边缘整齐、淡黄色表面光滑的菌株； 4、富集培养:在无菌条件下取5g堆肥样品，加入到装有100 mL无菌生理盐水的250mL锥形瓶中，于30°C摇床中震荡至样品完全分散，分别取I mL菌悬液接入到两瓶装有灭菌的100 mL富集培养基的250 mL三角瓶中，之后分别置于30°C、37°C的摇床中以转速180rmin-1培养I天； 5、菌种初筛:将经过富集培养后的菌悬液进行浓度梯度稀释，在稀释倍数为105、106、107的菌悬液中各吸取200 yL涂布于由筛选培养基制成的平板上，分别置于30°C、37°C培养箱培养3天。之后观察平板，挑取单菌落进行划线纯化培养； 6、菌种复筛:挑取经纯培养后的初筛的单菌落至装有已灭菌的5mL发酵培养基的指形瓶中，按其各自初筛时的生长温度置于180 rmin-1摇床培养5天。测定培养基中硝酸根的转化率，选取效率高的菌株进行下一步分析； 7、测定培养基中的硝酸根的转化率，株最后得到亚硝酸盐转化成硝酸盐的菌株；该菌株为芽孢细菌，命名为Bacillus sp.N7。 已在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏号为CGMCC10231。 这种菌种的硝化能力的测试:从堆肥中筛选出的硝化细菌，在锥形瓶中，在温度35°C、初始pH=6、接种量为1%、转速140r/min进行测试，其亚硝酸盐转化率为35.42%。将该菌制成发酵菌剂添加到堆肥中能促进氮素代谢和转化，减少氮素损失，提高总氮含量0.6%以上。【主权项】1.一种硝化能力强的硝化细菌的筛选方法，其特征是:包括如下步骤: (1)用同种堆肥料划分成2个以上的等份，在实验室中分别制堆肥； (2)测量不同肥堆、不同阶段的温度、pH值、有机质、氨态氮、亚硝酸盐氮及硝态氮的含量; (3)从升温腐熟块的堆肥样品中，筛选出圆形突起、边缘整齐、淡黄色、表面光滑的菌株; (4)经过富集培养、菌种初筛、菌种复筛得到亚硝酸盐转化成硝酸盐的菌株；该菌株为芽孢细菌，命名为Bacillus sp.N7。2.根据权利要求1所述硝酸菌硝酸根转化率的方法，其特征是:采用测硝酸根转化率的方法，同样取4支25 mL具塞比色管，一只作空白对照，三只作平行样品，在样品管中加入I mL经8000 r?min-l离心2 min后的培养液，用去离子水定容至25 mL，加入0.1 M的HCl溶液0.5 mL，再加入8 g*L_l的氨基磺酸溶液0.05 mL，盖上盖子并摇匀，在λ =220nm及λ=275 nm处分别测吸光度值，用空白管校正仪器其中一处的零点，最后的吸光度按如下公式得出:A=A220-2A275 ;分别测量并计算出三个样品的吸光度，取平均值，查标准曲线得出硝酸根含量，再根据初始的亚硝酸根含量得出其转化率。【专利摘要】本专利技术公开了一种硝化能力强的硝化细菌的筛选方法，包括如下步骤：（1）用同种堆肥料划分成2个以上的等份，在实验室中分别制堆肥；（2）测量不同肥堆、不同阶段的温度、pH值、有机质、氨态氮、亚硝酸盐氮及硝态氮的含量；（3）从升温腐熟块的堆肥样品中，筛选出圆形突起、边缘整齐、淡黄色表面光滑的菌株；（4）经过富集培养、菌种初筛、株菌种复筛得到亚硝酸盐转化成硝酸盐的菌株；株该菌株为芽孢细菌，命名为Bacillus sp. N7，已在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏号为CGMCC10231。本专利技术的优点：筛选获得的新菌株能有效促进氮素转化，减少堆肥过程中氨氮排放，改善环境污染，并能提高堆肥中氮素的含量，从而提高堆肥的质量。CGMCC No.1023120141219【IPC分类】C12N1-20, C05F17-00【公开号】CN104694426【申请号】CN201510079706【专利技术人】张德忠, 宋韶华, 李群良, 杨雄, 马溪曼, 刘立军 【申请人】桂林市环境保护科学研究所, 广西大学【公开日】2015年6月10日【申请日】2015年2月13日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种硝化能力强的硝化细菌的筛选方法，其特征是：包括如下步骤：（1）用同种堆肥料划分成2个以上的等份，在实验室中分别制堆肥；（2）测量不同肥堆、不同阶段的温度、pH值、有机质、氨态氮、亚硝酸盐氮及硝态氮的含量；（3）从升温腐熟块的堆肥样品中，筛选出圆形突起、边缘整齐、淡黄色、表面光滑的菌株；（4）经过富集培养、菌种初筛、菌种复筛得到亚硝酸盐转化成硝酸盐的菌株；该菌株为芽孢细菌，命名为Bacillus sp. N7。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张德忠，宋韶华，李群良，杨雄，马溪曼，刘立军，
申请(专利权)人：桂林市环境保护科学研究所，广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
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