一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒，包括保存液及储样杯，所述保存液包括以下组分：氯化钠75mM、氯化钾1.5mM、十二水·磷酸氢二钠5.6mM、磷酸二氢钾1.0mM、叠氮化钠3.1mM、乙二胺四乙酸2mM、45％的丙三醇。本发明专利技术的用于组织冰冻切片保存的试剂盒，配制简单，保存液的配制原料均为常规的生化试剂，使用方便，只需有冰箱即可，提高了珍贵样本的利用率，为科研工作节省了人力成本和物质成本。

A kit for preserving frozen sections of tissue

The invention discloses a kit for tissue frozen preservation, including the preservation of liquid and sample storage cup, the stored liquid comprises the following components: glycerol 75mM sodium chloride, potassium chloride, twelve 1.5mM water and two sodium hydrogen phosphate 5.6mM, potassium dihydrogen phosphate 1.0mM, sodium azide, 3.1mM ethylenediamine four acetic acid and 45% 2mM the. For the kit of the invention, the preservation of frozen tissue sections has the advantages of simple preparation, preparation of raw materials for preserving liquid conventional biochemical reagent, easy to use, only need to have the refrigerator can improve the utilization of precious, sample rate, save labor cost and material cost for scientific research.

【技术实现步骤摘要】
一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒
本专利技术属于分子生物学
，尤其涉及一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒。
技术介绍
组织切片是绝大多数形态学的基础，不管是临床病理诊断还是基础医学研究，都离不开组织形态学的支撑。常规的组织切片主要包括冰冻切片和石蜡切片，两者的优缺点主要体现在以下几个方面：1、冰冻切片操作简单快捷，能较好地保存组织抗原，但易产生冰晶破坏组织细胞结构，并且组织切片不能太薄(10-100μm)；2、石蜡切片可将组织切得非常薄(3-5μm)；但操作繁琐耗时，常导致组织抗原的丢失。组织经蔗糖浸泡后，可以避免冰冻切片时组织内冰晶的产生。同时由于共聚焦显微成像的专利技术，即便是针对较厚的组织切片时也能清晰地呈现组织细胞结构。因此在许多生命科学研究工作中，尤其是神经科学领域，冰冻切片日益成为主导的组织切片。组织冰冻切片虽有上述诸多优势，但在实际的研究工作中还存在以下致命缺点：组织块(如1mm3大小)常常可以切出几百张切片，但一次只需用到十张左右的组织切片，剩下的绝大多数切片来不及有效利用，主要是因为这些组织切片在一周内会腐烂变质，即便是加入叠氮钠等防腐剂也很难保存一个月。如果是不重要的组织，存在这种缺点无关紧要；但针对珍贵的研究材料，任何组织切片的浪费显得尤为可惜。有鉴于此，有必要提供一种能长久保存组织冰冻切片的试剂盒。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的一个方面提供了一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒，包括保存液及储样杯。所述保存液包括以下组分：氯化钠75mM(mmol/L)、氯化钾1.5mM、十二水·磷酸氢二钠5.6mM、磷酸二氢钾1.0mM、叠氮化钠3.1mM、乙二胺四乙酸2mM、45％的丙三醇(Vol/Vol)。所述储样杯包括杯体与所述杯体配套密封的杯盖，所述杯体是带有底部、顶部开口大于底部的结构，所述杯盖盖于所述杯体上时，所述杯盖上有延伸出杯体的盖耳。所述杯体顶部设有外螺纹，与所述杯盖上设有的内螺纹密封。所述杯体为圆柱形或方形。所述杯盖为软胶顶盖。所述杯体的材质为透明硬质塑料。所述杯体的容量为12-17mL。所述杯体为圆柱形时，其底部直径为1.3-1.8cm，高度为2.0-2.8cm，顶部直径为1.4-2.0cm，高度为底部直径的1.5-1.7倍。所述保存液的量为200mL。所述储样杯的量为100个。由于采用上述技术方案，本专利技术具有以下优点和有益效果：本专利技术的用于组织冰冻切片保存的试剂盒，配制简单，保存液的配制原料均为常规的生化试剂，使用方便，只需有冰箱即可，提高了珍贵样本的利用率，为科研工作节省了人力成本和物质成本。本专利技术的用于组织冰冻切片保存的试剂盒，利用了丙三醇能保鲜的特性，将其与磷酸盐缓冲液按适当比例混合，同时加上其它防腐剂和金属离子螯合剂，使其不仅能长久地保存组织冰冻切片(长达两年以上)，而且其较低的粘稠度也方便研究人员使用。附图说明图1是本专利技术实施例的用于组织冰冻切片保存的试剂盒中储样杯的杯体的结构示意图。图2是本专利技术实施例的用于组织冰冻切片保存的试剂盒中储样杯的杯盖的结构示意图。其中：1为杯体，2为杯盖，3为盖耳。具体实施方式为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例对本专利技术做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。本专利技术实施例所用原料如下：氯化钠(NaCl)，购自国药集团化学试剂有限公司；氯化钾(KCl)，购自国药集团化学试剂有限公司；十二水·磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，购自国药集团化学试剂有限公司；磷酸二氢钾(KH2PO4)，购自国药集团化学试剂有限公司；丙三醇(C3H8O3)，购自Sigma公司；叠氮化钠(NaN3)，购自Sigma公司；乙二胺四乙酸(EDTA)，购自国药集团化学试剂有限公司。实施例1一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒，包括保存液200mL，储样杯一包(100个)，使用说明书一份。保存液的配方如下：NaCl75mM，KCl1.5mM，Na2HPO4·12H2O5.6mM，KH2PO41.0mM，NaN33.1mM，EDTA2mM，45％的丙三醇(Vol/Vol)；溶于去离子水中，过滤，真空除氧，4℃避光保存。保存液的制备方法包括以下步骤：第一步，将8克NaCl、0.2克KCl、3.63克Na2HPO4·12H2O、0.24克KH2PO4、0.37克NaN3和10.6克EDTA分别加入800毫升的去离子水中，并用玻璃棒搅拌使其充分溶解，然后定容到1000毫升。第二步，取110毫升的上述缓冲液与90毫升的丙三醇充分混匀。第三步，用0.4微米的过滤器(millipore，美国)过滤，再用真空泵(北京六一，中国)除氧，然后密封并放入4℃冰箱避光保存。保存液中最主要的保鲜成分为丙三醇，其浓度为30％以上时均有保鲜作用，随着浓度的提高其保鲜效果越强，但是浓度越高粘稠度增加不利于使用。综合权衡利弊，将其浓度设定为45％，使用效果最好(试验证明即便保存三年以上的组织仍未损坏)。此处用的溶剂为磷酸盐缓冲液，其它等渗液(如三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲液、生理盐水等)也可考虑，但在这些所有可能的配方中，本专利技术的技术方案相对效果最好。本专利技术实施例的用于组织冰冻切片保存的试剂盒中储样杯包括杯体1与所述杯体1配套密封的杯盖2，所述杯体1是带有底部、顶部开口大于底部的结构，所述杯盖2盖于所述杯体1上时，所述杯盖2上有延伸出杯体1的盖耳3；其结构示意图如图1和图2所示，图1是本专利技术实施例的用于组织冰冻切片保存的试剂盒中储样杯的杯体的结构示意图，图2是本专利技术实施例的用于组织冰冻切片保存的试剂盒中储样杯的杯盖的结构示意图。本实施例中，杯体1顶部设有外螺纹，与杯盖2上设有的内螺纹密封，杯体1的容量为12-17mL，材质为透明硬质塑料，杯体1的形状可以为圆柱形或方形，当其为圆柱形时，底部直径为1.3-1.8cm，高度为2.0-2.8cm，顶部直径为1.4-2.0cm，高度为底部直径的1.5-1.7倍，储样杯优选的底部直径为1.5cm，顶部直径为1.8cm，高度为2.5cm，杯盖2为软胶顶盖。本实施例中，杯体1的容量为12-17mL，储样杯为平底、透明、硬质塑料、广口的设计。现有产品没有专门用于组织切片的小号容器，虽可临时借用其它的小号试剂瓶，但大规模使用仍然不是非常方便。本实施例中的储样杯是专为组织长期保存而设计，不仅保存的组织切片取用方便，而且也非常适合实验室内的大批量使用。用于组织冰冻切片保存的试剂盒的使用方法如下：对于需要进行长期保存的组织冰冻切片，首先将需要保存的切片转入储样杯，并用PBS缓冲液洗涤三次(3×5分钟)；然后吸干PBS缓冲液并加入4mL保存液混匀；最后密闭，4℃避光保存。实施例2以15月龄阿尔茨海默病(AD)转基因小鼠脑组织切片的保存和取用为例。第一步，组织冰冻切片如下：1、设置好冰冻切片机温度(样品座固定器-18℃，机箱-20℃)，切片厚度30微米；2、将小鼠脑组织进行冠状面连续切片，并分成6等份。第二步，脑组织切片的洗涤和保存如下：1、将6份切片分别转入6个储样杯中，每个储样杯中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒，其特征在于：包括保存液及储样杯。

【技术特征摘要】
1.一种用于组织冰冻切片保存的试剂盒，其特征在于：包括保存液及储样杯。2.根据权利要求1所述的用于组织冰冻切片保存的试剂盒，其特征在于：所述保存液包括以下组分：氯化钠75mM、氯化钾1.5mM、十二水·磷酸氢二钠5.6mM、磷酸二氢钾1.0mM、叠氮化钠3.1mM、乙二胺四乙酸2mM、45％的丙三醇。3.根据权利要求1所述的用于组织冰冻切片保存的试剂盒，其特征在于：所述储样杯包括杯体与所述杯体配套密封的杯盖，所述杯体是带有底部、顶部开口大于底部的结构，所述杯盖盖于所述杯体上时，所述杯盖上有延伸出杯体的盖耳。4.根据权利要求3所述的用于组织冰冻切片保存的试剂盒，其特征在于：所述杯体顶部设有外螺纹，与所述杯盖上设有的内螺纹密封。5.根据权利要求3所述的用于组织冰...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜欢欢，鲁友明，
申请(专利权)人：武汉瑞福宁科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42