一种含有氯霉素的蜂蜜标准物质制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含有氯霉素的蜂蜜标准物质制备方法，以氯霉素空白蜂蜜为基体，利用60℃条件下，蜂蜜的粘度降低，流动性增大的特性，通过水浴60℃加热搅拌、逐步稀释混匀的方法，均匀添加氯霉素溶液至蜂蜜中，获得含有2.3μg/kg痕量氯霉素残留的蜂蜜基体标准物质。该标准物质具有良好的均匀性和稳定性，该标准物质的使用有利于提高蜂蜜中氯霉素痕量残留检测的准确性和可靠性，也可用于校准计量器具和评价测量方法。

Method for preparing honey standard substance containing chloramphenicol

The invention discloses a honey containing chloramphenicol standard material preparation method, using chloramphenicol blank honey as substrate, the temperature of 60 DEG C, honey viscosity decreased, the increase of the flow characteristics, through 60 DEG C water bath for heating and stirring, stepwise dilution method for blending, adding to chloramphenicol in honey, which contains honey matrix 2.3 g/kg standard substance of trace chloramphenicol residues. The standard material has good uniformity and stability, the use of the standard material is helpful to improve the accuracy and reliability of detection of chloramphenicol residues in honey, can also be used for calibration of measuring instruments and measurement and evaluation method.

【技术实现步骤摘要】
一种含有氯霉素的蜂蜜标准物质制备方法
本专利技术涉及一种含有氯霉素的蜂蜜基体标准物质制备方法，蜂蜜中氯霉素标准物质是一种计量标准，主要用于校准计量器具和评价测量方法的准确度。
技术介绍
氯霉素(chloramphenicol，CAP)，学名D-苏式-(-)-N-[α-(羟基甲基)-β-羟基-对硝基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺，分子式为C11H12Cl2N2O5，白色针状或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶性粉末，熔点149-153℃，比旋光度19.5℃，水溶性为2.5g/L。易溶于水和甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇等。CAS号为56-75-7，分子量323.1294。化学结构式如图1所示。我国国家安全标准GB14963-2011中要求蜂蜜中兽药残留限量应符合相关标准的规定。相关标准规定包括:1.卫生部在2011年4月发布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中指出蜂蜜中可能添加了氯霉素。2.无公害蜂蜜(NY5134-2008)中对抗生素的安全指标是四环素族抗生素≤0.5mg/kg，氯霉素不得检出，磺胺类≤0.05mg/kg，其他兽药限量应符合国家有关规定。欧盟早在96/23/EC中就对蜂蜜中磺胺类和喹啉等抗生素药物残留作出明确的限量标准。2002年禁运我国蜂蜜事件后，欧盟理事会通过《关于对产自中国的进口动物产品实行某些保护性措施的决议》(2002/69/EC)，将氯霉素残留限量改为0.1μg/kg。在2005年欧盟解禁中国蜂蜜后，但从中国进口的动物源食品的保护措施2005/573/EC决议中指出，中国出口的蜂蜜必须附加氯霉素和硝基呋喃及其代谢物等残留检验报告(2005/573/EC)。2009年12月欧盟委员会条例(EU)No.37/2010中指出蜂蜜中氯霉素、硝基呋喃等为禁用药理活性物质，其他抗生素为非法使用药物。目前，蜂蜜中氯霉素的检测主要按照GB/T18932.19-2003和GB/T18932.20-2003，但还没有具有量值可溯源的蜂蜜标准物质。标准物质在保证分析方法的准确性及可溯源性方面具有重要作用。分析基体的差异使得在分析过程中不能简单地采用传统的高纯度溶液标准物质来校准或进行质量控制，需要采用相应基体的标准物质以提高检测结果的准确度。与传统的高纯度溶液标准物质相比，含有氯霉素的蜂蜜标准物质具有量值溯源性，对仪器的校准、检测实验室的质量控制、蜂蜜中氯霉素检测方法的开发等具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供一种含有氯霉素的蜂蜜标准物质制备方法，包括：样品预处理：取蜂蜜样品，60℃水浴充分溶解混匀；标准物质添加制备：采用逐步添加法，具体包括：1)称取氯霉素标准物质溶液适量，加入50g蜂蜜中，60℃水浴条件下80rpm自动搅拌1小时；2)取步骤1)中的50g蜂蜜加入1000g空白蜂蜜中，60℃水浴条件下150rpm自动搅拌2小时；3)取步骤2)中1000g蜂蜜加入3000g空白蜂蜜中，60℃水浴条件下200rpm自动搅拌2小时；标准物质分装：氮气保护条件下分装于60mL棕色样品瓶中，每瓶15g，不透明包装袋真空密封包装。所述方法还包括：标准物质保存：0-4℃条件下避光保存。所述方法还包括：冲氮保护时，氮气的流量10psi。本专利技术实施例中，以氯霉素空白蜂蜜为基体，利用60℃条件下，蜂蜜的粘度降低，流动性增大的特性，通过水浴加热搅拌、逐步稀释混匀的方法，均匀添加氯霉素溶液至蜂蜜中，获得含有2.3μg/kg痕量氯霉素残留的蜂蜜基体标准物质。该标准物质具有良好的均匀性和稳定性，该标准物质的使用有利于提高蜂蜜中氯霉素痕量残留检测的准确性和可靠性，也可用于校准计量器具和评价测量方法。本专利技术的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。本专利技术的目的和其他优点可通过在所写的说明书、权利要求书中所特别指出的结构来实现和获得。下面结合附图，通过实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为氯霉素分子结构图；图2为蜂蜜样品中氯霉素的LC-MS/MS的MRM检测谱图。具体实施方式以下对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。为了叙述方便，本实施例中采用了在枣花蜜中添加氯霉素抗生素的方法来进行蜂蜜标准物质的制备，实际上，不同的蜂蜜中添加氯霉素的方式大同小异，只要不脱离本实施例的整体思路和实验方式，均为本专利技术实施例的保护范围，本实施例中不对具体的蜂蜜种类、来源和氯霉素的具体来源做限定。实验仪器：KIA搅拌器EUROSTAR20digital。实验试剂：蜂蜜：枣花蜂蜜。氯霉素：纯度为99.80％；来源为中国计量科学研究院NIM。实验方法：1、配置母液。配置氯霉素抗生素母液，溶剂用水，浓度为1.0262mg/g。以甲醇/水＝50：50(v/v)为溶剂，配制浓度为0.7331ug/g的添加标准液。2、蜂蜜添加。标准物质添加制备：采用逐步添加法。1)称取氯霉素标准物质溶液适量，加入50g蜂蜜中，60℃水浴条件下80rpm自动搅拌1小时；2)取1)步骤中的50g蜂蜜加入1000g空白蜂蜜中，60℃水浴条件下150rpm自动搅拌2小时；3)取2)步骤中1000g蜂蜜加入3000g空白蜂蜜中，60℃水浴条件下200rpm自动搅拌2小时。3、分装。分装在精度为0.1g的天平上进行待分装蜂蜜置于60℃水浴条件下。样品瓶首先倒置冲入氮气5s，然后置于天平上称取15g样品，期间保持氮气以100ml/min的流速持续进入样品瓶中，待样品完全冷却后，盖上盖子，放4℃冰箱保存。存放在4℃冰箱，0-4℃条件下避光保存。均匀性检验均匀性是标准物质的基本属性，用于描述标准物质特性的空间分布特征。在标准物质的研制(生产)过程中必须进行均匀性评估，以证明其具有良好的均匀性。均匀性的检测方法：样品预处理：称取5g蜂蜜样品于50mL一次性离心管，加入5mL去离子水，经60℃水浴后涡旋至蜂蜜完全溶解。添加15mL乙酸乙酯后振荡提取10min，以3000rpm的速率离心5min，移取上层清液至15mL离心管。在上清液中加入5mL去离子水，振荡10min，3000rpm离心5min，取上清液。重复用水反萃一次，取上清液10mL。45℃水浴，氮气吹干后用5mL水溶解残渣，待净化。HLB固相萃取柱依次经5mL甲醇，5mL水，5mL10mmol/L的盐酸活化；上样；然后用5mL水，5mL甲醇/水＝5/95洗涤；最后用6mL甲醇洗脱。45℃下氮气吹干，用2mL20％乙腈复溶，过0.22GHP滤膜，供LC-MS/MS检测。仪器分析方法：色谱柱：WatersXTerraMSC183.5μm2.1×100mm；流动相：A相：乙腈，B相：纯水；梯度洗脱程序见表1；流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL。表1TimePumpB0.01801.00805.00307.00307.018010Stop质谱条件：负离子扫描方式；多反映监测(MRM)；电喷雾电压(IS)：-4500V；气帘气压本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有氯霉素的蜂蜜标准物质制备方法，其特征在于，包括：样品预处理：取蜂蜜样品，60℃水浴充分溶解混匀；标物添加制备：采用逐步添加法，具体包括：1)称取氯霉素标准物质溶液适量，加入50g蜂蜜中，60℃水浴条件下80rpm自动搅拌1小时；2)取步骤1)中的50g蜂蜜加入1000g空白蜂蜜中，60℃水浴条件下150rpm自动搅拌2小时；3)取步骤2)中1000g蜂蜜加入3000g空白蜂蜜中，60℃水浴条件下200rpm自动搅拌2小时；标准物质分装：氮气保护条件下分装于60mL棕色样品瓶中，每瓶15g，不透明包装袋真空密封包装。

【技术特征摘要】
2016.04.06 CN 20161021232401.一种含有氯霉素的蜂蜜标准物质制备方法，其特征在于，包括：样品预处理：取蜂蜜样品，60℃水浴充分溶解混匀；标物添加制备：采用逐步添加法，具体包括：1)称取氯霉素标准物质溶液适量，加入50g蜂蜜中，60℃水浴条件下80rpm自动搅拌1小时；2)取步骤1)中的50g蜂蜜加入1000g空白蜂蜜中，60℃水浴...

【专利技术属性】
技术研发人员：李秀琴，张庆合，许森，李红梅，张燕，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11