一种微生物多功能肥的制备方法与发酵培养基组成技术

本发明专利技术公开了一种微生物多功能肥的制备方法与发酵培养基组成，属于微生物肥料制备技术领域，特别涉及一种微生物肥的制备方法。该微生物多功能肥的制备方法包括如下操作步骤：（1）培养基配制；（2）菌种活化；（3）液体种子制备；（4）液态发酵；（5） 拌种肥、叶面肥制备；（6）地面肥制备。发酵培养基组成为：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH

Preparation method of microbial multifunctional fertilizer and fermentation medium composition

The invention discloses a preparation method of a microbial multifunctional fertilizer and a fermentation culture medium, belonging to the technical field of microbial fertilizer preparation, in particular to a preparation method of microbial fertilizer. The multifunctional microbial fertilizer preparation method comprises the following steps: (1) medium; (2) strain activation; (3) liquid seed preparation; liquid fermentation; (4) (5) seed fertilizer, foliar fertilizer preparation; (6) the ground fertilizer preparation. The fermentation medium was made up of glucose, 15000g, peptone, 10000g, yeast extract, 5000g, KH

【技术实现步骤摘要】
一种微生物多功能肥的制备方法与发酵培养基组成
本专利技术涉及微生物肥料制备
，具体涉及一种微生物多功能肥的制备方法与发酵培养基组成。
技术介绍
我国人口多，人均耕地面积少，提高农作物产量具有重要意义。土壤施肥是一种常用的增产途径。目前，农业上使用的肥料包括微生物肥料和化学肥料。长期施用化学肥料会造成土壤板结；且当前基于“绿色”、“环保”的健康理念，人们对无污染、安全、卫生的绿色食品的需求日益增加，使得微生物肥料备受青睐。另外，施用微生物肥料可减少化学肥料的施用，改善土壤，提高农产品品质；而且微生物肥料具有长效、无毒、无污染、节约资源、成本低等特点，可弥补化学肥料的缺点和不足。地面肥是植物吸收营养成分的重要途径，叶面肥是植物吸收营养成分的重要补充。随着植物生长过程中各种病虫害影响的加剧，如果施用既能促进植物生长又能拮抗植物病害的微生物肥料，将有利于植物、作物的增产增收，提高农户经济利益。因此，可以利用研发的优良菌株，进行发酵，获得的发酵产物，制备成地面肥、叶面肥、拌种肥等多功能微生物肥。
技术实现思路
本专利技术涉及一种应用枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）BS501a制备微生物肥的方法和发酵生产微生物肥的培养基配方，制得的微生物多功能肥既能防治植物病害，又能促进植物生长，解决了现有技术中存在的问题。本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种微生物多功能肥的制备方法，包括如下操作步骤：（1）培养基配制：分别配制菌种活化培养基、种子培养基和发酵培养基，高温灭菌后备用；所述菌种活化培养基为：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述种子培养基为：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述发酵培养基为：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH2PO41300g，K2HPO41000g，MgSO4·7H2O500g，MnSO4·H2O100g，FeSO4·7H2O100g，CaC12·2H2O1500g，加水至1000L，pH7.0-7.5；（2）菌种活化：挑取斜面保藏的BacillussubtilisBS501a接种于步骤（1）制得的菌种活化培养基中，于35-37℃，180-220r/min摇床振荡培养16-24h，得活化枯草芽孢杆菌菌液；（3）液体种子制备：按5％-10％（体积百分数）的接种量将步骤（2）活化的枯草芽孢杆菌菌液接种于步骤（1）制得的种子培养基中，于35-37℃，通无菌空气培养16-24h，得到液体种子；（4）液态发酵：按5％-10％（体积百分数）的接种量将步骤（3）制得的液体种子接种于步骤（1）制得的发酵培养基中，于30℃，通无菌空气培养48h，经平板细菌计数，活菌数达1×109-9×109CFU/mL，即得活菌体培养物；（5）叶面肥和拌种肥制备：将步骤（4）制得的活菌体培养物静置，菌体沉淀。除去菌体，即得微生物叶面肥和拌种肥；（6）地面肥的制备：将步骤（4）获得的活菌体培养物通风干燥，即获得地面肥。上述微生物多功能肥的使用方法：拌种使用时，拌种肥用水100倍稀释，拌种使用；叶面喷洒使用时，叶面肥用水100倍稀释，在农作物苗期叶面喷施、果实期喷洒；地面肥于耕种时地面播撒。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术枯草芽孢杆菌兼具促进植物生长和拮抗植物病原菌功能，经其发酵制备所得的微生物多功能肥兼具促进作物生长、防治植物叶面病害和果实病害的双重作用，可减少化肥和农药用量，改善土壤，改善农田环境质量，提高农产品的品质。本专利技术枯草芽孢杆菌可成功定殖于植物根际、体表或体内，分泌抗菌物质抑制病原菌生长，具有生防效果，对多种植物、农作物病原真菌都有很强的抑制作用；2、在本专利技术制备方法中，发酵培养基可提升发酵产物中枯草芽孢杆菌的数量；通过微生物代谢，提高拮抗代谢产物的分泌量，在充分发挥活菌体促植物生长的同时，能保证在植物或作物的整个生长周期内发挥有效的生物杀菌剂作用，增强植物或作物抗病能力。培养基中富含氮、磷、钾，及各种矿物质，可增强土壤肥力，减少土壤施肥量。具体实施方式实施例1正交实验法优化获得发酵培养基为提高B.subtilisBS501a发酵产物的拮抗能力，采用单因素试验和正交试验优化了发酵培养基组成和发酵条件，得到最佳培养基组成为：葡萄糖1.5%，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，KH2PO40.13%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O0.05%,MnSO4·H2O0.01%,FeSO4·7H2O0.01%,CaC12·2H2O0.15%,pH7.0；最适发酵温度30℃,最适发酵时间48h。实施例2枯草芽孢杆菌BS501a发酵液抗菌谱采用对峙试验测枯草芽孢杆菌BS501a的抗菌谱。由于植物病原真菌生长速度不同，为准确判断枯草芽孢杆菌BS501a的拮抗活性，采用枯草芽孢杆菌BS501a与植物病原真菌分期或同期培养的方法。对生长速度较快的植物病原真菌，先在新鲜PDA平板上呈对角线接种枯草芽孢杆菌BS501a，26℃培养24h后，在平板中央移入受试真菌菌饼，而后继续培养48h，测量拮抗带宽度。对生长速度中等的植物病原真菌，采用在新鲜PDA平板中央接种受试真菌菌饼，同时围绕菌饼呈对角线接种枯草芽孢杆菌BS501a菌株，26℃培养72h，测量拮抗带宽度。对生长速度较慢的植物病原真菌，采用在新鲜PDA平板中央接种受试真菌菌饼，26℃培养24h后，在平板上呈对角线接种枯草芽孢杆菌BS501a，继续培养72h，测量拮抗带宽度。结果如表1所示。表1枯草芽孢杆菌BS501a抗菌谱受试真菌拮抗带宽度/mm稻瘟病菌（7.4±0.23）a黄瓜镰刀菌（6.98±0.21）a禾生腐霉（3.06±0.15）b西瓜枯萎病菌（5.25±0.34）c辣椒枯萎病菌（4.73±0.30）c玉米串珠镰孢（3.50±0.21）d玉米青枯病菌（4.25±0.16）cd小麦根腐病菌（8.58±0.47）a玉米小斑病菌（7.18±0.32）b小麦赤霉病菌（5.38±0.36）c苹果腐烂病菌（5.00±0.20）c苹果轮纹病菌（4.72±0.38）c黄瓜灰霉病菌（8.03±0.71）ab小麦纹枯病菌（9.10±0.12）a番茄早疫病菌（8.65±0.43）ab棉花枯萎病菌（7.10±0.21）bc棉花黄萎病菌（7.25±0.09）b注：英文字母相同表示差异不显著，不相同表示差异显著。以拮抗带宽度4.25mm为临界点，拮抗带宽度大于4.25mm为抑制作用强，拮抗带宽度小于4.25mm为抑制作用弱。对峙试验结果表明枯草芽胞杆菌BS501a发酵液对小麦纹枯病菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、黄瓜灰霉病菌、黄瓜镰刀菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、辣椒枯萎病菌、水稻纹枯病菌、玉米小斑病菌、西瓜枯萎病菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌的抑制作用强；对玉米青枯菌、玉米串珠镰孢菌、禾生腐霉的抑制作用较弱。实施例3枯草芽胞杆菌BS501a发酵液生物安全性测定根据药典，采用急性毒性实验检测枯草芽胞杆菌BS501a发酵液的生物安全性。将枯草芽胞杆菌BS501a发酵液冷冻干燥，制成冻干粉。将冻干粉用生理盐水依次稀释至5×10-2g/mL，5×10-3g/mL，5×10-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物多功能肥的制备方法与发酵培养基组成，其特征为：包括如下操作步骤：（1）培养基配制：分别配制菌种活化培养基、种子培养基和发酵培养基，高温灭菌后备用；所述菌种活化培养基为：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，加水至1L，pH 7.0‑7.5；所述种子培养基为：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，加水至1L，pH 7.0‑7.5；所述发酵培养基为：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH

【技术特征摘要】
1.一种微生物多功能肥的制备方法与发酵培养基组成，其特征为：包括如下操作步骤：（1）培养基配制：分别配制菌种活化培养基、种子培养基和发酵培养基，高温灭菌后备用；所述菌种活化培养基为：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述种子培养基为：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，加水至1L，pH7.0-7.5；所述发酵培养基为：葡萄糖15000g，蛋白胨10000g，酵母膏5000g，KH2PO41300g，K2HPO41000g，MgSO4·7H2O500g，MnSO4·H2O100g，FeSO4·7H2O100g，CaC12·2H2O1500g，加水至1000L，pH7.0-7.5；（2）菌种活化：挑取斜面保藏的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）BS501a接种于步骤（1）制得的菌种活化培养基中，于35-37℃，180-220r/min摇床振荡培养16-24h，得活化枯草芽孢杆菌菌液；（3）液体种子制备：按5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞芳，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41