一种快速高效检测菌落总数的测试片及其制备方法技术

本发明专利技术快速高效检测菌落总数的测试片，包括上层塑料膜和下层塑料底板，下层塑料底板中间有圆形凹槽，所述上层塑料膜内侧依次为TTC与胶粘剂混合物涂层和瓜尔胶涂层，混合物由浓度为0.8％的TTC溶液与胶粘剂按体积比0.1～1.0:10.0混合而成，涂布量0.1～1.0mL/片，瓜尔胶涂层涂布量0.1～1.0g/片，圆形凹槽内置细菌菌落生长培养基，每100mL细菌菌落生长培养基中含有胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.1～0.5g、丙酮酸钠0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜尔胶1g。本发明专利技术测试片简化并加快了菌落总数的检测步骤，降低了指示剂对菌落总数的抑制作用，提高了检测效率，检测结果准确可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种快速高效检测菌落总数的测试片及其制备方法
本专利技术属于快速检测领域，涉及微生物检测技术，具体涉及一种快速高效检测菌落总数的测试片，以及该测试片制备方法。
技术介绍
细菌广泛存在于空气、水和土壤中，绝大部分对人体无害，但有些细菌对人体有害，细菌过多可引起食物质变，会刺激人体消化道、胃部等，严重的还可对肝脏造成损伤，造成食物中毒，危及生命安全。目前对细菌菌落总数测定主要采用《GB4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》，该方法为平板计数法，是经典的菌落总数检测方法。但国标法检测在实际计数过程中，由于菌落颜色与琼脂底色相近，部分细小或生长于琼脂内部的菌落难以准确读出，此外，如果检验样品中含有残渣微粒，特别一些较难溶食品如糕点等，与细菌菌落难以区分，会严重影响细菌计数的准确性，并且国标方法检测耗时长、需要现配置培养基，操作步骤繁琐，难以满足快检的实际需求。纸片法的出现，弥补了平板计数法的缺点，逐步成为微生物检测和鉴定的主要方法和标准，2007年，PetrifilmTM测试片被正式列为中国出入境检验检疫行业标准，该方法正逐渐被越来越多的食品生产加工企业及各类检测机构所认可。公开日为2016年07月13日，公开号为CN105754849A，名称为一种菌落总数测试片、制备方法及其应用的专利技术专利，公开日为2013年03月20日，公开号为CN102985554A，名称为快速检测微生物的装置的专利技术专利均公开了一种测试片，将显色底物液TTC添加至细菌培养基中，由于显色底物TTC对菌落生长有一定的抑制作用，会使微生物生长缓慢或停止生长，具有影响菌落计数和导致实验结果判读困难的缺陷，对检测结果会造成一定影响。
技术实现思路
为了解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种快速高效检测菌落总数的测试片及其制备方法，简化和加快了菌落总数的检测鉴定步骤，降低了指示剂对菌落总数的抑制作用，提高了对微生物的检测效率，获得的检测结果准确可靠。技术方案：一种快速高效检测菌落总数的测试片，包括上层塑料膜(1)和下层塑料底板(3)，下层塑料底板(3)中间有圆形凹槽(2)，所述上层塑料膜(1)内侧依次为TTC与胶粘剂混合物涂层(1-2)和瓜尔胶涂层(1-3)，所述混合物由浓度为0.8％的TTC溶液与胶粘剂按体积比0.1～1.0:10.0混合而成，涂布量0.1～1.0mL/片，所述瓜尔胶涂层(1-3)涂布量0.1～1.0g/片，所述圆形凹槽(2)内置细菌菌落生长培养基，每100mL细菌菌落生长培养基中含有胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.1～0.5g、丙酮酸钠0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜尔胶1g。进一步胶粘剂为压敏粘合剂。进一步上层塑料膜1为透明膜，为聚酯、聚乙烯、聚丙烯或聚苯乙烯材料，长×宽×厚为100×70×0.1mm。进一步下层塑料底板3为聚丙烯塑料板或PET塑料板，长×宽×厚为95×70×0.7mm，中间的圆形凹槽2直径为70mm，厚度为0.5mm。本专利技术另一个目的还提供了一种快速高效检测菌落总数的测试片的制备方法，其主要包括以下步骤：a.测试片上层塑料膜1与下层塑料底板3在制备前需经过辐照灭菌进行处理，辐照剂量16KGy；b.测试片上层塑料膜1的制备：将0.8％TTC与胶粘剂按体积比0.1～1.0：10的比例混合，115℃灭菌15min，冷却至室温，均匀的涂布在上层塑料膜(1-1)上，涂布量0.1～1.0mL/片，然后再涂布经剂量为8KGy辐照后的瓜尔胶0.1～1.0g/片，一端留出5mm的宽度不涂抹瓜尔胶，得到；c.测试片下层塑料底板3的制备：配制细菌菌落生长培养基，取100mL蒸馏水，按照以下配方加入：胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.1～0.5g、丙酮酸钠0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜尔胶1g，加热溶解后，采用高压灭菌锅在121℃灭菌15min，冷却至室温后，得到细菌菌落生长培养基，将1～5mL细菌菌落生长培养基添加到下层塑料底板3中间的圆形凹槽2内，摇匀，于50～60℃烘干；d.组装测试片：将步骤b中所制测试片上层塑料膜1，未涂抹瓜尔胶的一端与步骤c中制备的测试片下层塑料底板3一端对齐后粘贴在一起制得快速高效检测菌落总数的测试片。有益效果：1.降低了指示剂对菌落总数的抑制作用。由于指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)对菌落总数有一定的抑制作用，将指示剂添加到测试片的上层中，菌落总数在下层培养基中生长好后产生的代谢酶再与上层中的指示剂作用，避免了菌落总数在生长时受到指示剂的抑制作用，实现了菌落总数生长和显色的分离。2.本专利技术测试片，待检的样品溶液扩散快，并且不会溢出测试片外，避免了显色菌斑易扩散影响周围菌落的计数的缺陷，能保证样品溶液中菌落总数的检出率。3.本专利技术测试片，具有使用简便，可以长期存放，应用灵活的特点，省去了培养基配置、培养皿灭菌、清洗等处理的工序，降低了劳动强度，大大缩短了检测时间。同时，专利技术测试片制备方法简单、易行，能够实现自动化生产，成本低廉，使用方便。附图说明图1为本专利技术测试片示意图；1，上层塑料膜；1-1，上层塑料膜外层；1-2，TTC与胶粘剂混合物涂层；1-3，瓜尔胶涂层；2，圆形凹槽；3，下层塑料底板。图2为本专利技术测试片检测阳性菌落总数的圆形凹槽内的显色图。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制，本专利技术试剂如无特别说明，均为常规试剂。实施例1快速高效检测菌落总数的测试片的组成如图1所示，一种快速高效检测菌落总数的测试片，上层塑料膜1和下层塑料底板3，下层塑料底板3中间有圆形凹槽2，上层塑料膜1内侧依次为细菌菌落酶解底物TTC与胶粘剂组成的混合物涂层1-2和瓜尔胶涂层1-3。混合物由浓度为0.8％的TTC溶液与胶粘剂按体积比0.1～1.0:10.0混合而成，涂布量0.1～1.0mL/片。瓜尔胶涂层1-3涂布量0.1～1.0g/片。圆形凹槽2内置细菌菌落生长培养基，每100mL细菌菌落生长培养基中含有胰蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、氯化钠、丙酮酸钠、甘露醇、瓜尔胶。细菌菌落生长培养基的成分，100mL，见表1表1细菌菌落生长培养基的成分，100mL胰蛋白胨、酵母粉、瓜尔胶、TTC购自Sigma公司，葡萄糖、磷酸二氢钾、氯化钠购自国药集团，丙酮酸钠、甘露醇购自阿拉丁公司，胶粘剂为压敏粘合剂，购自苏州锦峰公司。上层塑料膜1为透明膜，可为聚酯、聚乙烯、聚丙烯或聚苯乙烯材料，长、宽为100×70mm，厚度为0.1mm。所述下层塑料底板3为硬度较好的聚丙烯塑料板或PET塑料板，长、宽为95×70mm，厚度为0.7mm，中间的圆形凹槽2直径为70mm，厚度为0.5mm。每份快速高效检测菌落总数的测试片检测一个样品。实施例2快速高效检测菌落总数的测试片的制备2.1测试片上层塑料膜与下层塑料底板在制备前需经过辐照灭菌进行处理，剂量16KGy；2.2测试片上层塑料膜的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速高效检测菌落总数的测试片，包括上层塑料膜(1)和下层塑料底板(3)，下层塑料底板(3)中间有圆形凹槽(2)，其特征在于所述上层塑料膜(1)内侧依次为TTC与胶粘剂混合物涂层(1‑2)和瓜尔胶涂层(1‑3)，所述混合物由浓度为0.8％的TTC溶液与胶粘剂按体积比0.1～1.0:10.0混合而成，涂布量0.1～1.0mL/片，所述瓜尔胶涂层(1‑3)涂布量0.1～1.0g/片，所述圆形凹槽(2)内置细菌菌落生长培养基，每100mL细菌菌落生长培养基中含有胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.1～0.5g、丙酮酸钠0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜尔胶1g。

【技术特征摘要】
1.一种快速高效检测菌落总数的测试片，包括上层塑料膜(1)和下层塑料底板(3)，下层塑料底板(3)中间有圆形凹槽(2)，其特征在于所述上层塑料膜(1)内侧依次为TTC与胶粘剂混合物涂层(1-2)和瓜尔胶涂层(1-3)，所述混合物由浓度为0.8％的TTC溶液与胶粘剂按体积比0.1～1.0:10.0混合而成，涂布量0.1～1.0mL/片，所述瓜尔胶涂层(1-3)涂布量0.1～1.0g/片，所述圆形凹槽(2)内置细菌菌落生长培养基，每100mL细菌菌落生长培养基中含有胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.1～0.5g、丙酮酸钠0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜尔胶1g。2.根据权利要求1所述的快速高效检测菌落总数的测试片，其特征在于所述胶粘剂为压敏粘合剂。3.根据权利要求1或2所述的快速高效检测菌落总数的测试片，其特征在于所述上层塑料膜(1)为透明膜，为聚酯、聚乙烯、聚丙烯或聚苯乙烯材料，长×宽×厚为100×70×0.1mm。4.根据权利要求1所述的快速高效检测菌落总数的测试片，其特征在于所述下层塑料底板(3)为聚丙烯塑料板或PET塑料板，长×宽×厚为95×70×0.7mm，所述圆形凹槽(2)直径为70mm，厚度为0.5mm。5.一种权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，扶胜，冯才伟，周绘，万宇平，张鹤，付浩，席芸芸，湛剑龙，侯璐伟，王吉平，金邦明，朱亮，冯月君，
申请(专利权)人：贵州勤邦食品安全科学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52