用于药物传递的胞转载体和增强剂制造技术

含有生理活性剂和胞吞增强剂或载体的组合物或所述组分的结合物，所述生理活性剂在跨过含ＧＰ６０受体的内皮、上皮或间皮后发挥其作用，所述胞吞增强剂或载体选自白蛋白和其片段、抗ＧＰ６０抗体和其片段、ＧＰ６０肽片段和ＰＤＩ（蛋白质二硫化物异构酶）和其片段。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物传递。具体地说，本专利技术涉及能够传递并促使药物通过含GP60受体的内皮、上皮和间皮的胞转载体和增强剂。
技术介绍
对于大部分通过动脉内或静脉内施用的治疗药物来说，分子活性的预定位点均在脉管外。对于经气道施用的药物来说，活性的预定位点通常在肺泡、细支气管或气管上皮第一细胞屏障外。在这两种情况下，都存在药物介导其作用前所必须跨越的内皮或上皮屏障。对于小的亲脂药物，在屏障细胞的紧密接合处似乎有副细胞(paracellular)途径。但对于亲水药物和较大的大分子活性药物如肽、蛋白质、基因或反义核苷酸来说，跨越屏障的唯一途径是通过细胞。这就给静脉内施用因迅速降解或肝的第一次通过清除而具有很短半衰期的药物带来很特别的问题。为了保持与所述排泄和降解作用平衡的治疗水平，经常需要大剂量或输注。因此，本领域显然需要能够更迅速的使药物跨过细胞屏障的传递机制。已经有许多有关介导胞吞过程的特异性受体，在所述胞吞过程中，通过相似的胞饮作用，配体与所述受体结合，然后内部化，并与所述受体复合。这涉及在配体受体复合物区内细胞膜的内陷，然后通过尚未完全了解的过程将配体释放到细胞中。已经报道了许多胞吞受体系统，包括LDL、胰岛素、表皮生长因子、胰岛素样生长因子和tPA-PAI-I(杂种分子)。胞吞作用必须伴有在配体受体复合物周围的内吞和小泡形成，然后通过在basolateral膜的逆胞吞过程释放胞吞物。已将转铁蛋白受体的单克隆抗体与毒素结合，以便它们可通过胞吞作用跨过血-脑内皮。但本领域仍需要能够通过受体介导的胞吞作用传递或促进药物通过除血-脑内皮以外的细胞屏障的试剂，所述细胞屏障如脉管系统的内皮、肺泡上皮和腹膜间皮。GP60受体(也称为albondin)是义献中报道数种白蛋白结合蛋白质中的一种(Schnitzer and Oh，J.Biol.Chem.269(8)6072-6082(1994))。其它的包括SPARC(血清蛋白，酸性，半胱氨酸丰富)，oesteonectin或基膜蛋白40、GP30、GP18和GP60。SPARC和oesteonectin是细胞外蛋白质。如用抗-SPARC抗体确定的，GP60与SPARC有一定的同源性(Schnitzerand Oh，Am.J.Physiol.263H1872-1879(1992))。GP18和GP30是在各种细胞中发现的膜糖蛋白，而且在巨噬细胞中特别普遍(Schnitzer等，J.Biol.Chem.26724544-24553(1992))。GP18和GP30是所谓“清除剂受体”，它们通过内吞作用介导除去白蛋白的氧化、糖化或加合形式，并因此认为其在各种器官的白蛋白分解代谢中起作用(Schnitzer and Bravo，J.Biol.Chem.268(10)7562-7570(1993))。与GP18和GP30相反，已发现GP60受体只在脉管系统的连续内皮(Schnitzer，Am.J.Physiol.263H246-H254(1992))、肺泡上皮(Kim等，Am.J.Resp.and Crit.Care Med.151；A190(1994))以及推理上在腹膜间皮(Gotloib and Shostak，Kidney International.471274-1284(1995))中排外地表达。GP60在微泡内皮中特别丰富，但令人感兴趣的是，在几乎观察不到白蛋白流的的血液-脑屏障中则没有GP60(Rousseaux等，Methods inEnzymology 121163(1986))。已表明内皮GP60的多克隆抗体也与肺泡上皮GP60结合(Kim等，同上文)。GP60受体还涉及受体介导的白蛋白跨上皮和内皮细胞屏障的胞吞作用(Kim等，同上义；Tirrupathi等，细胞分子生物学4(Supp)338a Abstract No.1964(1993))。GP60的氨基酸序列是本领域已知的(Yamauchi等，Biochem.Biophys.Res.Comm.1461485(1987))。专利技术概述本专利技术提供了能够运输生理学活性剂跨过含GP60受体的上皮、内皮和间皮的胞吞载体和增强剂。GP60受体还参与受体介导的白蛋白跨细胞屏障胞吞作用。利用本专利技术，可研究GP60受体介导的胞吞作用以用于不仅运输白蛋白，而且运输天然不能经GP60系统跨过上皮、内皮和间皮的生理学活性剂。本专利技术的胞吞载体和增强剂包括白蛋白、白蛋白片段、抗GP60多克隆和单克隆抗体、抗-GP60多克隆和单克隆抗体片段和GP60肽片段。此外，还包括PDI(蛋白质二硫化物异构酶)和其片段(下文提到GP60片段也可解释为之PDI片段)。在PDI和GP60的至少T1-44片段中发现一个共有因子是CGMC基元。如果胞吞载体或增强剂是GP60肽片段，优选可与本专利技术的其它胞吞载体或增强剂如白蛋白或白蛋白片段一起施用。用溴化氰在甲硫氨酸残基裂解可产生14、20和32kDa的适宜白蛋白片段，并通过二硫键的还原进一步降低大小。根据本专利技术可作为胞吞载体和增强剂的抗-GP60多克隆和单克隆抗体片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段。优选的GP60肽片段包括对应于GP60蛋白质N末端的18个氨基酸的T3118肽。根据本专利技术，当将上述化合物与生理学活性剂结合时，将其称为“胞吞载体”。当与生理学活性剂一起施用，但不结合时，将上述化合物称为“胞吞增强剂”。在优选的实施方案中，本专利技术的胞吞载体和增强剂用于传递或促进生理学活性剂跨过脉管系统的内皮、肺泡上皮和腹膜间皮。本专利技术详述正如其名称所表明的，本领域已报道了分子量为约60kDa的GP60蛋白质。在进行了更仔细的分析后，发现该蛋白质的“真正”分子量可能是约57kDa。认为分子量上的这种差异归因于蛋白质制备和凝胶条件的不同。但是，与本领域一致，本文(除下文实施例1外)也将该蛋白质称为GP60受体。已发现可研究GP60受体介导的胞吞作用以用于不仅运输白蛋白，而且运输大量天然不能经GP60系统跨过上皮、内皮和间皮的治疗上重要的生理学活性剂。因此，本专利技术提供了一种改进的方法，该方法用于运输如具有相对大的分子量，如50、100、150kDa或更大的生理学活性剂跨过脉管系统内皮、肺泡、细支气管和气管上皮以及腹膜间皮的细胞屏障。能够传递或促进生理学活性剂跨过含GP60的内皮、上皮和间皮的胞吞载体和增强剂包括白蛋白、白蛋白片段、抗-GP60多克隆和单克隆抗体、抗-GP60多克隆和单克隆抗体片段、以及GP60肽片段。如果胞吞载体或增强剂是GP60肽片段，则优选与本专利技术的其它胞吞载体或增强剂如白蛋白或白蛋白片段一起施用。哺乳动物白蛋白是本领域已知的并很容易得到。优选所用的白蛋白来自与患者相同的哺乳动物种。例如，如果患者是人，则优选用人血清白蛋白作为胞吞载体或增强剂。同样，如果患者是马或牛，分别优选使用马或牛血清白蛋白。生产白蛋白片段的方法是本领域熟知的。例如用溴化氰在甲硫氨酸残基裂解白蛋白可得到3个特别适宜的14、20和32kDa肽，所述肽可通过还原二硫键来进一步降低大小，得到3.3-20kDa的肽。或者可用蛋白酶消化来得到白蛋白肽片段。用作本专利技术胞吞载体或增强剂的任何特定白蛋白片段可按照本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：A·D·苏顿，A·B·马利，C·蒂鲁帕思，R·H·约翰森，
申请(专利权)人：安达里斯有限公司，
类型：发明
国别省市：