一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒及检测方法，包括核酸释放剂、含磁珠的核酸提取液和PCR反应液，所述核酸释放剂包括表面活性肽、醋酸氯己定、2～6％氯化钾和的亲水石墨烯；所述含磁珠的核酸提取液包括4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠和磁珠；所述PCR反应液包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针。本发明专利技术试剂盒具有操作简单，检测灵敏度、准确度高，特异性好，检测范围宽的优点，为临床诊断EBV感染提供了可靠的实验依据。

【技术实现步骤摘要】
一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
人类疱疹病毒第四型即EB病毒(EBV)，EBV是一种普遍存在于人体的疱疹类病毒，人一旦感染后，就可能终身携带。EBV感染主要会引起儿童传染性单核细胞增多症及与许多肿瘤的发生有密切关系，严重威胁着人类特别是儿童的健康，因而一直倍受关注。目前，血液中EB病毒DNA检测主要采用聚合酶链式反应(PCR)技术。荧光定量PCR又称实时定量PCR，是近年开发出来的全新PCR技术，可以全程、动态、不间断地光学监控被荧光标记的PCR反应，以此来评价被检测标本中的DNA含量，能反映PCR扩增动力学变化，实现实时定量检测，具有快速、准确、不易被污染等优点。如中国专利申请CN103866046A公开了一种人疱疹病毒EBV和VZV检测试剂盒，由定量PCR反应液、EBV标准品、VZV标准品、EBV阳性对照品、VZV阳性对照品、阴性对照品、说明书和盒体组成。该专利技术试剂盒采用实时荧光定量PCR技术和双色荧光探针，能一步法检测人疱疹病毒EBV和VZV，实现了EBV和VZV感染的同步诊本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒，包括核酸释放剂、含磁珠的核酸提取液和PCR反应液，其特征在于，所述核酸释放剂包括0.1～0.3mg/ml表面活性肽、0.01～0.05mg/ml醋酸氯己定、2～6％氯化钾(w/v)和0.1～2％的亲水石墨烯(w/v)；所述含磁珠的核酸提取液包括100～300mmol/L4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、100～300mmol/L氯化钠和100～400μg/ml磁珠；所述PCR反应液包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针。

【技术特征摘要】
1.一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒，包括核酸释放剂、含磁珠的核酸提取液和PCR反应液，其特征在于，所述核酸释放剂包括0.1～0.3mg/ml表面活性肽、0.01～0.05mg/ml醋酸氯己定、2～6％氯化钾(w/v)和0.1～2％的亲水石墨烯(w/v)；所述含磁珠的核酸提取液包括100～300mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸、100～300mmol/L氯化钠和100～400μg/ml磁珠；所述PCR反应液包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸释放剂包括0.2mg/ml表面活性肽、0.03mg/ml醋酸氯己定、4.5％氯化钾(w/v)和1.2％的亲水石墨烯(w/v)，所述含磁珠的核酸提取液包括200mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸、200mmol/L氯化钠和250μg/ml磁珠。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述用于靶多核苷酸扩增的上游引物序列为5’-TGCAGCTTTGACGATGGAGTAG-3’，下游引物序列为5’-TCACTCCTGCCCTTCCTCAC-3，所述用于靶多核苷酸检测的探针序列为5’-FAM-TTTGCCTCCCTGGTTTCCACCTATG-BHQ1-3’。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述亲水石墨烯由以下步骤制得：取经过透析处理，已除去残留离子的Hummers法制备的氧化石墨，配制成0.2～0.8mg/ml的水溶液，按氧化石墨：六次甲基四胺为2∶1～1∶2的质量比加入六次甲基四胺，100℃搅拌回流反应8～12h，得到分散均匀的亲水石墨烯分散系。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内标、核酸洗脱液、磁珠洗涤液、EBV阴性对照、EBV阳性对照、EBV定量参考品、磁珠分散剂和酶混合液。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠分散剂包括氨基酸0.06～2份、乙酸0.5～2份和羧甲基葡聚糖2～5份。7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸洗脱液含有0.8～1.2mol/LTris-HCl、0.1～1.0mol/LEDTA；所述磁珠洗涤液包...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈立国，邹伟权，张亚丽，李庆祥，母润红，王涛，苏焱，
申请(专利权)人：广州华弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44