一种微生物相对含量检测计数方法技术

本发明专利技术涉及微生物检测技术领域，特别涉及一种微生物相对含量检测计数方法。该方法包括：将氧化还原指示剂加入培养基，得到指示培养基；该氧化还原指示剂的变色范围包括3种或3种以上肉眼可轻易辨识的颜色；将待测样本进行稀释，设置多个稀释度，每个稀释度设置多个平行，将稀释后的待测样本采用指示培养基进行培养；培养期间和/或培养结束后读取指示培养基的颜色或吸光度；根据指示培养基的颜色变化程度或吸光度变化值，得到待测样本中微生物的相对含量。本发明专利技术方法与常规的MPN法相比，对于不同样品微生物相对含量的检测更加精确和准确，不同样品微生物相对含量的可对比性也更高，所获得的数据连续性较好，适用范围广。

【技术实现步骤摘要】
一种微生物相对含量检测计数方法
本专利技术涉及微生物检测
，特别涉及一种微生物相对含量检测计数方法。
技术介绍
油气藏中的轻烃气体在油气藏压力的驱动下以微泡上浮形式或连续气相流形式沿复杂的微裂隙垂直地向上运移。轻烃运移进入表层沉积物过程中，一部分成为土壤中专性烃氧化菌的食物(碳源)而使烃氧化菌异常发育；另一部分则被黏土矿物吸附和次生碳酸盐胶结物所包裹。因此，在油藏上方表层土壤中形成了与下伏油气藏的丰度与压力有正相关系的微生物异常和吸附烃异常。采用微生物学方法(MOST)和地球化学方法(SSG)分别检测微生物异常和吸附烃异常就可以预测下伏地层中是否存在油气藏，以及油气藏的性质。MOST技术既相似于但又有别于以往的油气化探，它的主要监测目标是勘探靶区上方的土壤或沉积物中专属烃氧化菌的丰度(简称为MV值)，热成因烃是这种氧化烃菌的唯一碳源，因此，它的丰度与隐伏于探区下方油气圈闭中的烃类浓度和压力密切相关，指标体系具有地质解释的唯一性。对于烃氧化菌的丰度常采用最大可能数法进行检测。最大可能数法(Mostprobablenumber，MPN)，该法又称稀释培养计数，是目前微生物检测领域常用的方法之一，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群(如烃氧化、氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等)的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群(如大肠菌群)的数量。MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量(如lm1)的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。具体地说，菌液经多次10倍梯度稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3～5次重复接种于适宜的液体培养基中。培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度(即临界级数)中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。MPN法有一定的局限性，比如相同的MPN值可能有不同的含义，MPN值也是非连续的，MPN值的准确度随最大概率(Pmax)的减小而减小等。在读数的时候，标准的MPN法只记录培养结果是有菌生长的阳性，或者无菌生长的阴性，这种操作会降低MPN法的精确度。例如对于MPN法中某个稀释度的某个平行样，其培养出现了阳性，但是其阳性的程度却存在差异，其可能是大量微生物生长造成的阳性，也可能是少量微生物生长造成的阳性。例如两个样品，使用3个连续稀释度，每组3个管，当其阳性管数都为“3-3-2”时，对应的MPN值均为1100，但是这两个样品的阳性管可能有不同的反应程度，其真实的微生物量可能有差异，但是常规的MPN法区分不出这样的差异。另外，在读数的时候，标准的MPN法只在培养到一定时间时进行一次读数，并记录阳性反应的个数，并查询MPN表得出结果。一次读数只能记录一定培养时间时培养基的阳性反应，其精确度不高。例如两个微生物数量有差异的样品进行液体培养，微生物数量多的样品在6小时的时候呈现阳性反应，微生物数量少的样品在12小时的时候呈现阳性反应，如果在12小时的时候读数，这两个样品都被记为阳性，实际上其微生物数量是有差别的。因此，需要提供一种结果准确度更高的微生物相对含量检测计数方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种微生物相对含量检测计数方法。该微生物相对含量检测计数方法与常规的MPN法相比，对于不同样品微生物相对含量的检测更加精确和准确，不同样品微生物相对含量的可对比性也更高，适用范围广。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种微生物相对含量检测计数方法，包括如下步骤：步骤1：将氧化还原指示剂加入培养基，得到指示培养基；该氧化还原指示剂的变色范围包括3种或3种以上肉眼可轻易辨识的颜色；步骤2：将待测样本进行稀释，设置3～15个稀释度，每个稀释度设置3～15个平行，将稀释后的待测样本采用指示培养基进行培养；步骤3：培养期间和/或培养结束后读取指示培养基的颜色或吸光度；步骤4：根据指示培养基的颜色变化程度或吸光度变化值，得到待测样本中微生物的相对含量。作为优选，氧化还原指示剂为刃天青或甲基蓝。在本专利技术提供的实施例中，氧化还原指示剂为刃天青。在本专利技术提供的一优选方案中，步骤3为培养结束后读取指示培养基的颜色，步骤4中根据指示培养基的颜色变化程度，得到待测样本中微生物的相对含量为：根据指示培养基的颜色与微生物含量之间的相关性，对指示培养基的颜色进行读数，读数的数字大小与微生物含量呈正相关；采用如下公式获得待测样本中微生物的相对含量：Z＝(X1-1+X1-2+···+X1-n)×Y1+(X2-1+X2-2+···+X2-n)×Y2+···+(Xm-1+Xm-2+···+Xm-n)×Ym其中，Z为待测样本中微生物的相对含量；m为m号稀释度，3≤m≤15；n为n号平行样，3≤n≤15；X为读数值，X≥0；Xm-n代表m号稀释度n号平行样的读数值；Y代表稀释度系数，Y＞0；Ym代表m号稀释度系数，并且取Ym≥Ym-1≥Ym-2≥···Y2≥Y1。在本专利技术中，读数的数字大小与微生物含量呈正相关，例如：微生物不生长时，指示剂本身的颜色使用较小的数字，微生物大量生长指示剂完全变化之后的颜色使用较大的数字。例如：采用刃天青指示剂时，根据微生物含量由无到有，指示剂的颜色变化范围为蓝色-紫色-洋红色-红色-无色，读数分别为0、1、2、3、4。在本专利技术提供的另一优选方案中，步骤3为培养期间和培养结束后读取指示培养基的颜色，培养期间和培养结束后读取指示培养基的颜色的次数至少为2次。培养期间读取指示培养基的颜色的次数至少为1次。作为优选，培养期间和培养结束后每次读数时间间隔均匀或不均匀分配。对于读数时间间隔均匀分配的方案，读数时间间隔为培养总天数与读数总次数的比。对于读数时间间隔不均匀分配的方案，读数时间间隔可根据培养总天数和读数总次数进行适当调整。在该优选方案中，步骤4中根据指示培养基的颜色变化程度，得到待测样本中微生物的相对含量为：根据指示培养基的颜色与微生物含量之间的相关性，将指示培养基的颜色记录为数字，数字的大小与微生物含量呈正相关；采用如下公式获得待测样本培养期间或培养结束后一次读数的最终计数数值：Zi＝(X1-1+X1-2+···+X1-n)×Y1+(X2-1+X2-2+···+X2-n)×Y2+···+(Xm-1+Xm-2+···+Xm-n)×Ym其中，Zi为一次读数的最终计数数值；i为培养期间和培养结束后读取指示培养基的颜色的次数，i≥2；m为m号稀释度，3≤m≤15；n为n号平行样，3≤n≤15；X为读数值，X≥0；Xm-n代表m号稀释度n号平行样的读数值；Y代表稀释度系数，Y＞0；Ym代表m号稀释度系数，并且取Ym≥Ym-1≥Ym-2≥···Y2≥Y1；采用如下公式获得待测样本中微生物的相对含量：Z＝Z1+···+Zi其中，Z为待测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将氧化还原指示剂加入培养基，得到指示培养基；所述氧化还原指示剂的变色范围包括3种或3种以上肉眼可轻易辨识的颜色；步骤2：将待测样本进行稀释，设置3～15个稀释度，每个稀释度设置3～15个平行，将稀释后的待测样本采用所述指示培养基进行培养；步骤3：培养期间和/或培养结束后读取指示培养基的颜色或吸光度；步骤4：根据指示培养基的颜色变化程度或吸光度变化值，得到待测样本中微生物的相对含量。

【技术特征摘要】
1.一种微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将氧化还原指示剂加入培养基，得到指示培养基；所述氧化还原指示剂的变色范围包括3种或3种以上肉眼可轻易辨识的颜色；步骤2：将待测样本进行稀释，设置3～15个稀释度，每个稀释度设置3～15个平行，将稀释后的待测样本采用所述指示培养基进行培养；步骤3：培养期间和/或培养结束后读取指示培养基的颜色或吸光度；步骤4：根据指示培养基的颜色变化程度或吸光度变化值，得到待测样本中微生物的相对含量。2.根据权利要求1所述的微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，所述氧化还原指示剂为刃天青或甲基蓝。3.根据权利要求1至3中任一项所述的微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，步骤3为培养结束后读取指示培养基的颜色。4.根据权利要求3所述的微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，步骤4中根据指示培养基的颜色变化程度，得到待测样本中微生物的相对含量为：根据指示培养基的颜色与微生物含量之间的相关性，对指示培养基的颜色进行读数，所述读数的数字大小与微生物含量呈正相关；采用如下公式获得待测样本中微生物的相对含量：Z＝(X1-1+X1-2+…+X1-n)×Y1+(X2-1+X2-2+…+X2-n)×Y2+…+(Xm-1+Xm-2+…+Xm-n)×Ym其中，Z为待测样本中微生物的相对含量；m为m号稀释度，3≤m≤15；n为n号平行样，3≤n≤15；X为读数值，X≥0；Xm-n代表m号稀释度n号平行样的读数值；Y代表稀释度系数，Y＞0；Ym代表m号稀释度系数，并且取Ym≥Ym-1≥Ym-2≥…Y2≥Y1。5.根据权利要求1或2所述的微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，所述步骤3为培养期间和培养结束后读取指示培养基的颜色，所述培养期间和培养结束后读取指示培养基的颜色的次数至少为2次。6.根据权利要求5所述的微生物相对含量检测计数方法，其特征在于，步骤4中根据指示培养基的颜色变化程度，得到待测样本中微生物的相对含量为：根据指示培养基的颜色与微生物含量之间的相关性，将指示培养基的颜色记录为数字，所述数字的大小与微生物含量呈正相关；采用如下公式获得待测样本一次读数的最终计数数值：Zi＝(X1-1+X1-2+…+X1-n)×Y1+(X2-1+X2-2+…+X2-n)×Y2+…+(Xm-1+Xm-2+…+Xm-n)×Ym其中，Zi为一次读数的最终计数数值；i为培养期间和培养结束后读取指示培养基的颜色的次数，i≥2；m为m号稀释度，3≤m≤15；n为n号平行样，3≤n≤15；X为读数值，X≥0；Xm-n代表m号稀...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝纯，梅海，
申请(专利权)人：盎亿泰地质微生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11