一种六胜肽的制备方法及其产品技术

本发明专利技术提供一种六胜肽的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)合成Fmoc‑Arg(pbf)‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；(2)合成Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；(3)合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；(4)合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑OH；以及(5)将步骤(4)得到产物进行切割、分离、酰胺化反应和纯化得到六胜肽产品。所述方法既克服了现有经典固相合成六胜肽树脂成本高、载量低的问题，也克服了液相合成六胜肽过程复杂、合成周期长、效率低的缺点，具有合成成本低、合成效率高、合成方法简单的优点，可用于规模化合成六胜肽。

The invention relates to a preparation method of the hexapeptide and its products

The present invention provides a method for preparing a hexapeptide, wherein the method comprises the following steps: (1) the synthesis of Fmoc Arg (PBF) Chlorotrityl Chloride 2 Resin; (2) the synthesis of Fmoc Glu (OtBu) Glu (OtBu) Met Gln (Trt) Arg (PBF) Arg (PBF) Chlorotrityl Chloride 2 Resin; (3) the synthesis of Ac Glu (OtBu) Glu (OtBu) Met Gln (Trt) Arg (PBF) Arg (PBF) Chlorotrityl Chloride 2 Resin; (4) the synthesis of Ac (Glu) OtBu Glu (OtBu) Met Gln (Trt) Arg (PBF) Arg (PBF) OH; and (5) the step (4) to obtain the product for cutting, separating, amidation reaction and purified collaxyl products. The method not only overcomes the existing classical solid phase synthesis of hexapeptide resin of high cost and low load, but also overcome the liquid phase synthesis of hexapeptide synthesis process is complex, long cycle, low efficiency, and has the advantages of low synthesis cost, high synthesis efficiency, simple synthetic method, can be used for large-scale synthesis of hexapeptide.

【技术实现步骤摘要】
一种六胜肽的制备方法及其产品
本专利技术属于多肽合成
，具体涉及一种通过片段法合成六胜肽的方法。
技术介绍
六胜肽是一种含有六个氨基酸的活性多肽，其序列为Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，具有皮肤除皱的生物活性，广泛应用于各种高级美容化妆品中。目前，六胜肽的合成方法主要有固相合成法和液相合成法。固相合成法所使用的Fmoc-AMResin和Fmoc-MBHAResin价格昂贵，树脂取代度较小，造成了六胜肽固相合成成本较高。液相合成法虽然原材料价格大大降低，但液相合成法合成过程繁杂，周期长，效率低，纯化成本高。六胜肽作为化妆品原料，降低生产成本，提高生产效率，简化合成工艺的研究具有重要意义。因此，开发一种高效率低成本合成六胜肽的方法成为本领域急需解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是提供一种合成成本低、合成效率高、合成方法简单的优点，可用于规模化合成六胜肽的方法，其克服了现有经典固相合成六胜肽树脂成本高、载量低的问题，也克服了液相合成六胜肽过程复杂、合成周期长、效率低的缺点。具体来说，本专利技术公开了一种六胜肽的合成方法，通过2-ChlorotritylChlorideResin合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH全保护片段肽，然后用全保护片段肽Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH和六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、1-羟基苯丙三唑、氯化铵、N,N′-二异丙基乙胺合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH2，再将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH2脱除保护基得到六胜肽。更具体来说，本专利技术通过如下技术方案实现的。一种六胜肽的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)合成Fmoc-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；(2)合成Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；(3)合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；(4)合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH；以及(5)将步骤(4)得到产物进行切割、分离和纯化得到六胜肽产品。其中所述步骤(1)是将2-ChlorotritylChlorideResin用二氯甲烷溶胀后，加入二氯甲烷、Fmoc-Arg(pbf)-OH、N,N′-二异丙基乙胺进行反应得到Fmoc-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；其中所述步骤(2)是将步骤(1)得到的Fmoc-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin脱Fmoc两次，加入N,N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Arg(pbf)-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二异丙基乙胺进行反应得到Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；然后按照所述方法在Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin上依次连接Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin。其中所述步骤(3)是将步骤(2)得到的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin脱Fmoc-两次，加入二氯甲烷、乙酸酐、N,N′-二异丙基乙胺的混合液进行反应得Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin。所述步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中所述反应是在在氮气保护下，常温搅拌0.5-2小时；所述步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中脱Fmoc是用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc；优选步骤(4)中加入二氯甲烷、乙酸酐、N,N′-二异丙基乙胺体积比9:1:0.5的混合液。其中所述步骤(4)是将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin中加入切割液进行切割反应经过分离、纯化、干燥得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH；其中步骤(4)所述分离、纯化、干燥步骤是将切割后的产物过滤，滤液用两倍饱和食盐水洗涤3次，然后再加入与切割液等体积的饱和食盐水，用饱和碳酸氢钠溶液调pH为7.0，35℃减压蒸发蒸除有机溶剂并析出沉淀，过滤，沉淀用纯水洗涤3次，40～45℃烘干得Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH。其中所述步骤(5)是将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH用N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、1-羟基苯丙三唑、氯化铵、N,N′-二异丙基乙胺进行反应得到反应液，进行处理、分离、纯化、烘干得Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH2；然后向Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH2中加入切割液进行切割，之后分离得到粗品，经纯化、干燥得到产品。其中所述步骤(5)切割之后经过滤，将滤液加入冷乙醚中，析出沉淀，得到六胜肽粗品，六胜肽粗品经反相色谱纯化、冷冻干燥，得Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2产品。其中所述步骤(4)所述切割液是三氟乙醇与乙酸、二氯甲烷的体积比为2:0.75:7.25的混合液；优选步骤(5)所述切割液是质量百分比组成为三氟乙酸83％、苯酚5％、苯甲硫醚4％、水3％、三异丙基硅烷5％的混合液。其中步骤(1)中2-chlorotritylchlorideresin与Fmoc-Arg(pbf)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种六胜肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)合成Fmoc‑Arg(pbf)‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；(2)合成Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；(3)合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑2‑Chlorotrityl Chloride Resin；(4)合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑OH；以及(5)将步骤(4)得到产物进行切割、分离和纯化得到六胜肽产品。

【技术特征摘要】
1.一种六胜肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)合成Fmoc-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；(2)合成Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；(3)合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；(4)合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH；以及(5)将步骤(4)得到产物进行切割、分离和纯化得到六胜肽产品。2.如权利要求1所述六胜肽的制备方法，其中所述步骤(1)是将2-ChlorotritylChlorideResin用二氯甲烷溶胀后，加入二氯甲烷、Fmoc-Arg(pbf)-OH、N,N′-二异丙基乙胺进行反应得到Fmoc-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin。3.如权利要求1或2所述六胜肽的制备方法，其中所述步骤(2)是将步骤(1)得到的Fmoc-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin脱Fmoc两次，加入N,N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Arg(pbf)-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二异丙基乙胺进行反应得到Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin；然后按照所述方法在Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin上依次连接Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin。4.如权利要求1-3任一项所述六胜肽的制备方法，其中所述步骤(3)是将步骤(2)得到的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin脱Fmoc-两次，加入二氯甲烷、乙酸酐、N,N′-二异丙基乙胺的混合液进行反应得Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-2-ChlorotritylChlorideResin。5.如权利要求2-4任一项所述步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中所述反应是在在氮气保护下，常温搅拌0.5-2小时；所述步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中脱Fmoc是用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc；优选步骤(4)中加入二氯甲烷、乙酸酐、N,N′-二异丙基乙胺体积比9:1:0.5的混合液。6.如权利要求1-5任一项所述六胜肽的制备方法，其中所述步骤(4)是将Ac-Glu(OtB...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠旗，李乾，王万科，王慧，郭添，苏子梦，韩广，高长波，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61