一种古代人类遗存物质DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种古代ＤＮＡ的提取方法，该方法采用等离子体等处理骨骼样品，使骨骼样品的内表面的有机污染物质被分解，快速清除骨骼样品的表面和内表面污染，然后进行ＤＮＡ的提取；包括打磨骨骼样品表面，次氯酸处理，紫外照射，７０％乙醇洗涤两次，去除外源微生物ＤＮＡ污染，进一步用Ａｒ／Ｏ↓［２］（９∶１）离子体处理样品，最后在液氮中研磨成粉末作为提取样品。样品消化裂解后，通过分三步完成的酚氯仿抽提方法去除被消化掉的有机分子，通过采用二氧化硅吸附柱吸附及超滤离心管（３ｋＤａ）过滤，得到古代ＤＮＡ模板。本发明专利技术的方法能极快对表面和内表面污染进行有效的清除。显著提高了古代ＤＮＡ提取成功率及模板含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及古代人类DNA提取与纯化，特别涉及一种古代人类遗存物质DNA的提取方法，该方法能够防止内源性和外源性污染和提高提取成功率。
技术介绍
目前，古DNA提取方法主要是借鉴法医学上的一些提取方法，这些提取方案一般首先通过打磨样品表面或者用线锯锯掉样品表面1-2mm，紫外照射，70％乙醇洗涤去除样品表面外源DNA污染，然后将样品在液氮中研磨成粉末进行样品前期处理。具体来说主要有以下三种不同的提取方案蛋白酶K/苯酚—氯仿法、二氧化硅法及异硫氰酸胍—二氧化硅法。I.蛋白酶K/酚—氯仿法(ThomasWKetal.1990)的步骤是1.称取样品0.5g，加入50ml离心管中，并加入EDTA(0.5MpH8.0)溶液15ml，在室温下振荡脱钙处理过夜(24h)；2.2500rpm离心10min，弃去上层溶液，重新加入15mlEDTA溶液，于室温下振荡过夜；3.2500rpm离心去除上层溶液，用重蒸水洗涤去除残留的EDTA；4.向各样品中加入5ml蛋白酶K缓冲液，于55℃振荡过夜；5.90℃放置5min使蛋白酶K失活，2500rpm离心10min，保留上清液，用等体积平衡酚抽提一次，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种古代人类遗存物质ＤＮＡ的提取方法，其特征在于，该方法对古代人类的骨骼样品，采用等离子体等处理，使骨骼样品的内表面的有机污染物质被分解，快速清除骨骼样品的表面和内表面污染，然后进行ＤＮＡ的提取；具体包括下列步骤：１）对打磨表面后经 次氯酸处理表面的骨骼样品进行紫外线照射３０ｍｉｎ，然后用７０％的乙醇洗涤两次，去除外源微生物ＤＮＡ污染；２）将骨骼样品放置在等离子体处理反应器中，采用外电极、射频功率发生器进行流动式射频放电，放电时间１～１０ｍｉｎ；同时在等离子体处 理反应器中加入Ａｒ／Ｏ↓［２］为９∶１的等离子体对骨骼样品处理，处理后的骨骼样品从等离子体处理反应器中取...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张虎勤，张金，刘芳娥，葛宇，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]