本发明专利技术公开一种提取分离蒲黄中有效成分异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷的新工艺。该工艺方法步骤如下：Ａ：取蒲黄药材醇提得稠膏，即总提取物；Ｂ：总提取物硅胶拌样，另取硅胶活化、干柱层析，洗脱或展开，提取，洗脱，减压回收；合并其中第３份和第４份得到异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷粗品；Ｃ：粗品用醇溶解后，干法上样，梯度洗脱，减压浓缩，把第６～８份合并，减压抽干得异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷精品；Ｄ：精品醇溶解，湿法装柱，洗脱，分段收集，把其中第８～１０份浓缩，加乙酸乙酯，沉淀，过滤，干燥，即得到异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷纯品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于植物药有效成分的提取分离方法，具体说是关于中药蒲黄中的有效成分的提取分离方法。
技术介绍
蒲黄是一种常用中药，对于蒲黄的研究已有许多文献报道，其中对蒲黄化学成分的研究，也有一些文献记载将异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷作为蒲黄药材和含蒲黄药物的质量控制指标，为此，实际工作中需要提取分离纯度高的异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷作为对照品。特别是在含蒲黄的药物开发研究当中，如何简化蒲黄有效成分异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的提取工艺，提高提取分离纯度，是制剂工艺研究过程的关键环节之一。目前一些提取分离方法的提取工艺路线复杂，异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷收率较低，不适合于工业化大规模生产，且因为难以进一步提高异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的纯度，使其用作质量控制用对照品受到一定限制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提取分离蒲黄中有效成分异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的新工艺。本专利技术的工艺方法步骤如下A取蒲黄药材醇提得稠膏，即总提取物；B总提取物硅胶拌样后，另取硅胶活化、干柱层析，以5～10∶1～3∶1的乙酸乙酯-甲醇-水混合溶剂为洗脱剂或展开剂，分段提取得8～12份，各份用甲醇、乙醇或丙酮洗脱，洗脱液减压回收溶剂后，得各洗脱物；合并其中第3份和第4份得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷粗品；C以硅胶为吸附剂，异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷粗品用甲醇溶解后，干法上样，以乙酸乙酯-甲醇或乙酸乙酯-乙醇混合溶剂为洗脱液进行梯度洗脱，梯度为100∶0-60∶40，分段提取得8～12份，减压浓缩，把其中第6～8份浓缩液合并，减压抽干得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷精品；D取异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷精品，加入甲醇或乙醇至溶解，浸泡、湿法装柱，色谱柱的径高比为3∶20-27，吸附剂为葡聚糖凝胶LH-20，用量为被分离样品量的18-30倍，用甲醇或乙醇进行洗脱，分段收集洗脱液，共收集12～15份；把其中第8～10份分别浓缩，加入浓缩液20～25倍量的乙酸乙酯，静置沉淀，过滤，沉淀用乙酸乙酯洗涤后，干燥，即得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷纯品。上述方法中步骤A的方法为取蒲黄药材25重量份，加入浓度为60～90％的乙醇150～250体积份，浸泡24～48小时后，加热回流提取0.5～1.5小时，静置0.5-2小时，吸取上清液；药渣用同样的方法先后提取2～4次，提取药液合并，药渣弃去；将上清液与提取液合并，水浴加热，水浴温度60～90℃，减压浓缩至浓缩液无醇味，得稠膏2.5～3.0重量份，即总提取物2.5～3.0重量份。上述方法中步骤A的优选方法为取蒲黄药材25重量份，加入浓度为70％的乙醇200体积份，浸泡24小时后，加热回流提取1小时，静置1小时，吸取上清液；药渣用同样的方法先后提取3次，提取药液合并，药渣弃去；将上清液与提取液合并，水浴加热，水浴温度80℃，减压浓缩至浓缩液至无醇味，得稠膏即蒲黄总提取物2.8重量份。上述方法中步骤B的方法为取稠膏50～60重量份，拌入150～180重量份的100～200目的硅胶，干燥，得到拌样硅胶；另取1500～2000重量份的100～200目的硅胶，100～105℃活化1.5～2小时后，干法装柱；将拌样硅胶加入柱中，以7～9∶1～3∶1的乙酸乙酯-甲醇-水混合溶剂1500-2500体积份为洗脱剂或展开剂，进行干柱层析，放干溶剂，进行等分切割或按色带切割，共得到8～12份；各份用1500～2000体积份的甲醇、乙醇或丙酮洗脱，洗脱液减压回收溶剂后，得各洗脱物；收集其中第3份和第4份合并，得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷粗品6.5-7重量份；上述方法中步骤B的优选方法为取稠膏50重量份，拌入150重量份，160～200目硅胶，自然干燥，得到拌样硅胶；另取160～200目硅胶1500重量份，100～105℃活化1.5小时后，干法装柱，径高比为1∶5；将拌样硅胶加入柱中，以8∶2∶1乙酸乙酯-甲醇-水混合溶剂2000体积份为展开剂，下行法展开，进行干柱层析，待展开剂前沿到达色谱柱底部时，放干溶剂，等分切割，共得到10份；各份用温度为80℃的70％的热乙醇1500体积份洗脱。洗脱液减压回收溶剂后，得各洗脱物；其中第3份和第4份合并，得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷粗品6.9重量份。上述方法中步骤C的方法为吸附剂为100～150重量份的200～300目的硅胶，异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷粗品6.5-7.0重量份用50-150体积份甲醇溶解后，加到3～5倍量的160～200目硅胶中，拌匀，挥干溶剂，干法上样；洗脱剂依次采用不同比例的乙酸乙酯-甲醇或乙酸乙酯-乙醇混合溶剂(乙酸乙酯、甲醇、乙醇均为分析纯)进行梯度洗脱；最佳梯度为100∶0、95∶5、90∶10、85∶15、80∶20、75∶25、70∶30、65∶35、60∶40、55∶45、50∶50、45∶55、40∶60；每个梯度洗脱剂用量为100～300体积份，洗脱流速为每分钟2～6体积份，分份收集，每份100～150体积份，减压浓缩至10～20体积份；把其中第6～8份浓缩液合并，减压抽干得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷精品2.5-3.0重量份；上述方法中步骤C的优选方法为吸附剂为100重量份的200～300目的硅胶H，异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷粗品6.9重量份用100体积份甲醇溶解后，加到4倍量的160～200目硅胶中，拌匀，挥干溶剂，干法上样；洗脱剂依次采用不同比例的乙酸乙酯-无水乙醇混合溶剂进行梯度洗脱；最佳梯度为100∶0、95∶5、90∶10、85∶15、80∶20、75∶25、70∶30、65∶35、60∶40、55∶45、50∶50、45∶55、40∶60；每个梯度洗脱剂用量为200体积份，洗脱流速为每分钟4体积份，洗脱剂总用量为2600体积份，分份收集，每份100体积份，减压浓缩至10体积份；把其中第6～8份浓缩液合并，减压抽干得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷精品2.8重量份；上述方法中步骤D的方法为异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷精品2.50-3.00重量份，加30-60体积份甲醇或乙醇至溶解，浸泡20-30小时后，湿法装柱葡聚糖凝胶LH-20 50～80重量份，色谱柱径高比为1∶20-26，用甲醇或乙醇100-200体积份进行洗脱，收集洗脱液，每份5～10体积份，共收集12～15份；把其中第8～10份分别浓缩至2～3体积份后，加入20～25倍量乙酸乙酯，静置0.5-2小时，沉淀，过滤，沉淀用15-30体积份乙酸乙酯洗涤后，自然干燥，即得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷纯品2.1-2.7重量份。上述方法中步骤D的优选方法为异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷精品2.80重量份，加50体积份甲醇或乙醇至溶解，浸泡24小时后，湿法装柱葡聚糖凝胶LH-20 50重量份，色谱柱径高比为1∶20，用甲醇或乙醇150体积份进行洗脱，收集洗脱液，每份5体积份，共收集15份；把其中第8～10份分别浓缩至2体积份后，加入20倍量乙酸乙酯，静置0.5-2小时，沉淀，过滤，沉淀用20体积份乙酸乙酯洗涤后，自然干燥，即得到异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷纯品2.58重量份。采用本方法提取蒲黄有效成分异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷，提取工艺路线简单，提取本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷纯品的提取方法，其特征在于该方法包括如下步骤：Ａ：取蒲黄药材醇提得稠膏，即得总提取物；Ｂ：总提取物硅胶拌样后，另取硅胶活化、干柱层析，以５～１０∶１～３∶１的乙酸乙酯－甲醇－水混合溶剂为洗脱剂 或展开剂，分段提取得８～１２份，各份用甲醇、乙醇或丙酮洗脱，洗脱液减压回收溶剂后，得各洗脱物；合并其中第３份和第４份得到异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷粗品；Ｃ：以硅胶为吸附剂，异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷粗品用甲醇溶解后，干法上样，以 乙酸乙酯－甲醇或乙酸乙酯－乙醇混合溶剂为洗脱液进行梯度洗脱，梯度为１００∶０－６０∶４０，分段提取得８～１２份，减压浓缩，把其中第６～８份浓缩液合并，减压抽干得到异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷精品；Ｄ：取异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷精 品，加入甲醇或乙醇至溶解，浸泡、湿法装柱，色谱柱的径高比为３∶２０－２７，吸附剂为葡聚糖凝胶ＬＨ－２０，用量为被分离样品量的１８－３０倍，用甲醇或乙醇进行洗脱，分段收集洗脱液，共收集１２～１５份；把其中第８～１０份分别浓缩，加入浓缩液２０～２５倍量的乙酸乙酯，静置沉淀，过滤，沉淀用乙酸乙酯洗涤后，干燥，即得到异鼠李素－３－Ｏ－新橙皮糖苷纯品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，石任兵，邓巧虹，王伟，陆蕴如，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。