一种从动物脑提取磷脂酰丝氨酸的方法技术

本发明专利技术提供一种从动物脑提取磷脂酰丝氨酸的方法，ａ．先将干燥动物脑碎成颗粒，再向颗粒中加入丙酮，搅拌萃取，除去含有干脑粒中胆固醇和油类的丙酮上清液，残渣蒸干；ｂ．向蒸干的残渣加入正己烷或乙醇或氨水乙醇溶液，搅拌萃取，除去含有磷脂复合物的萃取液，残渣蒸干；ｃ．向蒸干的残渣加入乙醚，搅拌萃取，萃取液经蒸浓后加入碱性水溶液，搅拌、冻结、解冻，滤除沉淀，进一步除去剩余的磷脂，然后将上清液调ｐＨ＝３～６，蒸除乙醚，再蒸干得粗磷脂酰丝氨酸。再将粗磷脂酰丝氨酸干粉溶于正己烷中，再加入醋酸钠乙醇溶液，搅拌、静置分层，除去含有肌醇磷脂的下层，上部正己烷减压蒸干得高纯度磷脂酰丝氨酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及家畜动物脑提取磷脂酰丝氨酸的方法，尤其适合于以牛、羊、兔、马、驴等家畜动物脑为原料的磷脂酰丝氨酸的提取方法。
技术介绍
牛脑磷脂酰丝氨酸(PS)有增强记忆，抗老年性痴呆等作用已经被国内外动物实验和临床验证，参见、刘平.磷脂酰丝氨酸的药理及临床应用研究进展，国外医学药学分册1981，18(4)，207-230。但以牛脑为原料，批量提取生产PS有困难。李斯M.B等(1981)和阿比德等(1998)综述PS的层析制备和分析方法，制备方法及其复杂。参见李斯MB等，磷脂和甾类分析和制备(Lees MBet al.preparation and Analysis of phosphatides Lipids and steroids，1981，328-345)和阿比德等，色谱学B集1998，(717)279-293(Abidi，SL et al.Journal ofchromatography B，717(1988)279-293).陈苏等研究高压液相制备方法，虽然可用于试剂制备，但产量实在有限。参见陈苏等.色谱学B集1995，(666)178-182(Su chen et al.Journal of chromatography B.666，1995，178-182)。美国用大豆磷脂和L-丝氨酸在磷脂酶D作用下合成PS，并研究成功提取制备方法，参见美国专利5700668(united states patent 5700668)。但这种用大豆磷脂合成的PS其临床效果远不如牛脑提取的PS。经过许多重复实验检证，该方法也不适合于牛等动物脑提取PS。我国畜牧养殖正在快速发展，肉牛屠宰量很大，牛脑随牛头廉价销出，有的食用，有的扔掉。近些年来，我们一直从事牛脑PS的提取研究，为牛脑的增值利用开辟新路子、摸索成功可工业生产的牛脑PS提取制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种以牛、羊、兔、马、驴等家畜动物脑为原料的工艺简单并适于工业化生产的提取磷脂酰丝氨酸的方法。本专利技术的目的可通过如下技术措施来实现a、先将干燥动物脑碎成颗粒，再向颗粒中加入丙酮，搅拌萃取，除去含有干脑粒中胆固醇和油类的丙酮上清液，残渣蒸干；b、向蒸干的残渣加入正己烷或乙醇或氨水乙醇溶液，搅拌萃取，除去含有磷脂复合物的萃取液，残渣蒸干；c、向蒸干的残渣加入乙醚，搅拌萃取，萃取液经蒸浓后加入碱性水溶液，搅拌、冻结、解冻，滤除沉淀，进一步除去剩余的磷脂，然后将上清液调PH＝3～6，蒸除乙醚，再蒸干得粗磷脂酰丝氨酸。本专利技术的目的还可通过如下技术措施来实现将c工序中粗磷脂酰丝氨酸干粉溶于正己烷中，加入醋酸钠乙醇溶液，搅拌、静置分层，除去含有肌醇磷脂的下层，上部正己烷蒸干得高纯度磷脂酰丝氨酸；或者将c工序中蒸除乙醚后直接加入与剩余溶液大致同量的正己烷，搅拌、静置分层，除去含有肌醇磷脂的下层，上部正己烷蒸干得磷脂酰丝氨酸；前面所述的搅拌萃取为3～5次，每次1～3小时；所述的氨水乙醇溶液及碱性水溶液的PH＝7.5～11；所述的解冻控制温度为4～7℃；所述的醋酸钠乙醇溶液是指含醋酸钠的40～60％乙醇。本专利技术的技术措施是先将干燥动物脑碎成大致为0.2～0.4cm的颗粒，再向颗粒中加入体积为3～5倍量的丙酮，搅拌萃取，除去含有干脑粒中胆固醇和油类。若抽提肌醇磷脂和PS磷脂复合物的溶剂为乙醚时，乙醚加入量为蒸干的残渣体积的3～5倍量，得乙醚提取液，可蒸去大部分乙醚使剩余的乙醚溶液体积为乙醚提取的干物质的3～5倍量。将该乙醚溶液加入到PH＝7.5～11的Na2CO3水溶液中成盐，搅拌1小时，-10～20℃冻结，4～7℃缓慢解冻。除去下部沉淀，将上清液用2～5％HCl调PH＝3～6。蒸除乙醚，蒸干水分得干粉；或蒸除乙醚后加入与剩余溶液同量的正己烷，搅拌分层，取上部正己烷层，蒸去正己烷得干物质。然后再向干物质加入3～5倍正己烷(或上述中最后加入的正己烷得到的上部正己烷层)，再加入体积5～10倍干物质量含醋酸钠的40～60％乙醇液搅拌，静止分层，除去下部白色沉淀(主要为肌醇磷脂)取上部正己烷层，蒸干得磷脂酰丝氨酸，磷脂酰丝氨酸纯度为90～93％。本专利技术的技术措施若抽提的肌醇磷脂和磷脂复合物的溶剂为正己烷，可将大部分正己烷蒸除，剩余正己烷溶液体积为正己烷提取干物质的3～5倍。然后先除去肌醇磷脂等杂质，再将正己烷蒸除，得干物质后溶于乙醚，最后蒸除乙醚，得磷脂酰丝氨酸，纯度为92～95％。本专利技术的技术措施若用丙酮除去脑中胆固醇及油脂，干燥得干脑粒，再向干脑粒中加入体积为3～5倍量的正己烷，搅拌萃取3～5次，每次1～3小时，得正己烷提取液，蒸除含有脑总磷脂复合物的正己烷，经乙醚处理后再蒸干得粗磷脂酰丝氨酸，纯度为53％。采用此方案可节约使用大量乙醇。所述的氨水可用氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、醋酸钠或醋酸钾替代，但效果以氨水为最好。所述的正己烷可用氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙醚替代，一般以正己烷为优选，以减少有机溶剂使用的种类，减少有机溶剂回收塔的建设，简化生产工艺。本专利技术选用常规的有机溶剂提取，可实现大规模工业化生产。脑粒用丙酮除去胆固醇及油类，用乙醇除去卵磷脂，脑磷脂，用正己烷、乙醚提取以磷脂酰丝氨酸和肌醇磷脂为主要成分的磷脂混合物，再用正己烷、碱乙醇溶剂除去沉下肌醇磷脂及杂质，得粗磷脂酰丝氨酸。粗磷脂酰丝氨酸溶于乙醚、该乙醚溶液加入碱性溶液中成盐，冷冻，解冻除沉淀，上清液调PH＝3～6。正己烷搅拌提取，静置分层，得正己烷层，蒸去正己烷得高纯度磷脂酰丝氨酸。也可将提取的磷脂酰丝氨酸和肌醇磷脂磷脂复合物溶于乙醚，再溶于碱性水溶液冷冻除杂，然后再用正己烷、碱乙醇除肌醇磷脂，得高纯度磷脂酰丝氨酸。还可用正己烷提取除去胆固醇及油的脑颗粒得总磷脂复合物，其后操作同以磷脂酰丝氨酸和肌醇磷脂为主成分的磷脂复合物提取磷脂酰丝氨酸方法，但纯度较低。具体实施例方式实施例11、将鲜牛脑(或冷冻的牛脑)切片，60℃通风烘干，也可自然条件下晒干或晾干，干燥温度越低越好，低温干燥最好，碎成0.3cm左右的颗粒，向干燥的牛脑颗粒中加体积为4倍量的丙酮，常温搅拌萃取4次，每次2小时，除去丙酮上清液，残渣蒸至无丙酮味；2、向蒸干的残渣内加入体积为4倍量的PH＝9的氨水乙醇溶液，搅拌萃取4次，每次2小时，残渣蒸干，提取液可用于再提取卵磷脂和脑磷脂；3、向蒸干的残渣内加入乙醚，得乙醚提取液，过滤蒸除大部分乙醚，所剩乙醚溶液的体积为乙醚提取的干物质的4倍为止。将其加入到PH＝8.5的Na2CO3水溶液中，搅拌1小时，-18℃冻结，6℃缓慢解冻。可见淡黄色上清液和下部沉淀，除沉淀后将上清液用4％HCl调PH＝5，蒸干水分得干粉。4、将干粉溶于体积为4倍量的正己烷中，再加入体积为8倍干粉量的含醋酸钠的50％乙醇，搅拌、静止分层，可见下面有白色沉淀(沉淀可用于提取肌醇磷脂)。然后将上部正己烷层移出，减压蒸干得磷脂酰丝氨酸，纯度为93％。实施例21、如果所用原料为鲜兔脑、羊脑、马脑、驴脑等家畜动物脑，脑的干燥方法同牛脑，如果所用原料为提取过胆固醇后的干脑颗粒，可直接按实施例1中2开始做，下同。实施例3实施例1中步骤2，向蒸干的残渣中加入氨水乙醇溶液，是为了除去本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从动物脑提取磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：ａ、先将干燥动物脑碎成颗粒，再向颗粒中加入丙酮，搅拌萃取，除去含有干脑粒中胆固醇和油类的丙酮上清液，残渣蒸干；ｂ、向蒸干的残渣加入正己烷或乙醇或氨水乙醇溶液，搅拌萃取，除去含有 磷脂复合物的萃取液，残渣蒸干；ｃ、向蒸干的残渣加入乙醚，搅拌萃取，萃取液经蒸浓后加入碱性水溶液，搅拌、冻结、解冻，滤除沉淀，进一步除去剩余的磷脂，然后将上清液调ＰＨ＝３～６，蒸除乙醚，再蒸干得粗磷脂酰丝氨酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘代成，杨雅婷，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]