一种粪菌组合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供一种以成年健康猪新鲜粪便为粪源，经特定低温条件三次离心制得粪菌终悬液，辅以添加高分子量化合物类保护剂脱脂奶粉和低分子量化合物类保护剂（甘油、乳糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、山梨醇、侧金盏花醇、海藻糖），制得的粪菌组合物，含有丰富的芽孢杆菌、乳酸菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌等菌种，且活菌数维持在108CFU/g以上，用于哺乳期仔猪的腹泻防治，防治效果明显，尤其是对0‑14日龄仔猪（21‑28日龄早期断奶法）以及0‑21日龄仔猪（35日龄断奶法）的仔猪防治腹泻有更为明显的效果。本发明专利技术粪菌组合物制备方法简单，产品保质期长，克服了现有技术粪菌移植需要现用现配的缺陷，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及仔猪养殖，具体涉及一种降低哺乳期仔猪腹泻的粪菌组合物及其制备方法和用途。
技术介绍
肠道是动物与外界环境接触面积最大的免疫器官，由食物残渣及分解产物、酶、免疫球蛋白、细菌（共生菌和致病菌）及代谢产物、病毒等组成的复杂内环境，当各成分平衡状态被打破，机体呈现不健康状态。研究表明，无论是病毒、细菌、原虫还是动物自身机能、饲料与饲养管理、环境应激、药物所致猪腹泻，腹泻时间都响应了肠道菌群的失衡；如猪流行性腹泻、产毒性大肠杆菌K88感染、新生仔猪腹泻综合症的发生等，都导致了动物肠道内菌群结构的失衡。由于哺乳期仔猪胃肠道较短小，消化器官发育程度低，消化机能不完善，肠道微生物极易失衡；加上哺乳期仔猪与断奶后仔猪、中大猪及成年猪的摄食方式存在很大区别，因而哺乳期仔猪的腹泻防治尤为困难。目前防治哺乳期仔猪腹泻的主要措施是免疫和药物防治，但效果均不理想，且还可能因抗生素滥用引发抗性细菌繁殖、动物源食品药物残留超标以及环境污染等一系列问题。粪菌移植是从健康动物粪便中分离功能菌群，然后再移植到患病动物消化道，通过重建患病动物的肠道菌群，从而实现对疾病的治疗。肠道微生物系统是哺乳动物体内非常复杂的系统，肠道菌群种类可达一千余种，细菌总数可达100万亿，是动物细胞数量的10倍以上。菌群定制于动物肠道，经过不断的相互作用和相互竞争，形成动态的微生物平衡，参与机体的营养、代谢与免疫调节。CN105029031A公开了一种通过口腔灌服粪菌移植的方式降低断奶仔猪腹泻发病率的方法；研究表明，该方法对哺乳期仔猪的腹泻防治效果较差，而且该方法需要现配现用，受设备、原料、试剂等条件的限制，不利于大面积推广。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，根据本专利技术的第一方面，本专利技术的目的在于提供一种粪菌组合物，该组合物可以明显降低哺乳期仔猪的腹泻发病率。除特殊说明外，本专利技术所述份数均为重量份，所述百分比均为体积百分比。本专利技术的目的是这样实现的：一种粪菌组合物，包括粪便终悬液，其特征在于：所述粪便终悬液为健康猪粪便与无菌生理盐水按体积比1:1～15混匀，在2～5℃条件下以200-500转/min离心5-10min；取其上清液在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min；再倾倒上清液后将沉淀中按体积比1:1～3加入无菌生理盐水混匀，在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min制得。根据本专利技术的一个实施方案，上述健康猪粪便为成年健康猪新鲜粪便，优选为300日龄以上健康成年猪新鲜粪便。本专利技术所述健康成年猪优选荣昌猪但不限于荣昌猪。为了延长上述粪菌组合物的保质期，并兼顾哺乳期仔猪摄入上述粪菌组合物的顺应性，上述粪菌组合物还包括保护剂。制备保护剂配方时，是将低、高分子化合物配合使用。其中高分子化合物类保护剂为脱脂奶，低分子量化合物类保护剂选自甘油、乳糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、山梨醇、侧金盏花醇、海藻糖中的一种或多种混合。根据本专利技术的一个实施方案，上述高分子化合物类保护剂为脱脂奶，其浓度为5～20%，加入量为粪便终悬液等体积。根据本专利技术的一个实施方案，上述低分子化合物类保护剂中，甘油加入量为粪便终悬液的10～30%。根据本专利技术的一个实施方案，上述除甘油外的每种低分子化合物类保护剂的单独加入量为粪便终悬液体积的1%-6%，比如保护剂包含乳糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖，那么乳糖加入量为粪便终悬液体积的1%-6%、半乳糖加入量为粪便终悬液体积的1%-6%、蔗糖加入量为粪便终悬液体积的1%-6%、葡萄糖加入量为粪便终悬液体积的1%-6%。优选的，上述保护剂为脱脂奶和甘油，其中脱脂奶加入量为粪便终悬液等体积，其中脱脂奶的浓度为10～15%；甘油加入量为粪便终悬液体积10～20%。上述保护剂还包括半乳糖和蔗糖，其中半乳糖添加量为粪菌终悬液的1%-2%，蔗糖添加量为粪菌终悬液的2%-4%。为了进一步增加哺乳期仔猪摄入上述粪菌组合物的顺应性，根据本专利技术的一个实施方案，上述粪菌组合物可以为颗粒剂、粉剂、冻干粉状制剂、微胶囊制剂、缓控释制剂、片剂或混悬剂。优选的，上述粪菌组合物可以为冻干粉状制剂或微胶囊制剂。根据本专利技术的第二方面，本专利技术的目的在于提供一种上述粪菌组合物的制备方法。根据本专利技术的一个实施方案，上述粪菌组合物中加入保护剂制得。根据本专利技术的一个实施方案，上述粪菌冻干粉状制剂的制备方法，采用如下步骤：1）粪便终悬液的制备：健康猪粪便与无菌生理盐水按体积比1:1～15混匀，在2～5℃条件下以200-500转/min离心5-10min；取其上清液在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min；再倾倒上清液后将沉淀中按体积比1:1～3加入无菌生理盐水混匀，在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min制得；2）加入保护剂：在粪便终悬液中加入包括浓度为5～20%粪便终悬液等体积的脱脂奶，粪便终悬液体积10～30%的甘油，以及2～4%蔗糖、1～2%半乳糖在内的保护剂，混合均匀；3）冷冻干燥：将混合保护剂的粪便终悬液分装于冻干瓶，在-20℃～-80℃下真空冻干获得粪菌粉剂；4）与食用饲料混合：在超净台内，将粪菌粉剂与食品级淀粉（如马铃薯粉、玉米粉等）按体积比1：2～3充分混合形成粪菌冻干粉状制剂，真空密封包装、室温遮光保存。上述冻干时间优选12h以上，本领域技术人员根据瓶中菌液量适当延长或缩短。根据本专利技术的一个实施方案，上述粪菌微胶囊制剂的制备方法，采用如下步骤：1）粪便终悬液的制备：健康猪粪便与无菌生理盐水按体积比1:1～15混匀，在2～5℃条件下以200-500转/min离心5-10min；取其上清液在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min；再倾倒上清液后将沉淀中按体积比1:1～3加入无菌生理盐水混匀，在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min制得；2）加入保护剂：在粪便终悬液中加入包括浓度为5～20%粪便终悬液等体积的脱脂奶，粪便终悬液体积10～30%的甘油，以及其他低分子化合物类保护剂（乳糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、山梨醇、侧金盏花醇、海藻糖中的一种或多种混合），其加入量（每种其他保护剂）均为粪便终悬液体积的1%～6%，混合均匀；3）微胶囊化制粒处理：加入质量浓度为2%-3%的稳定剂对混合附加剂的粪便终悬液进行微胶囊化制粒处理得到微胶囊颗粒；所述稳定剂为海藻酸钠、壳聚糖、明胶、淀粉中的一种或几种组合；4）真空干燥：将微胶囊颗粒与淀粉（如马铃薯粉、玉米粉等）混合，使微胶囊颗粒表面均匀包覆淀粉，然后分装于冻干瓶在-20℃～-80℃下真空冻干获得粪菌微胶囊制剂。上述微胶囊化制粒的直径为0.5mm～0.8mm为宜，制粒方式可采用本领域技术人员所熟知的锐孔-凝固浴法、乳化交联法或喷雾干燥法，微囊化中稳定剂的用量由本领域技术人员根据实际情况确定。上述真空干燥后得到的粪菌微胶囊制剂需要密封于室温保存，在饲喂时，每份粪菌微胶囊制剂与2～3份淀粉（如马铃薯粉、玉米粉等）、8～12份乳猪料充分搅拌后饲喂仔猪。根据本专利技术的第三方面，本专利技术的目的在于提供一种上述粪菌组合物在预防或治疗仔猪腹泻方面的用途，尤其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种粪菌组合物，包括粪便终悬液，其特征在于：所述粪便终悬液为健康猪粪便与无菌生理盐水按体积比1:1～15混匀，在2～5℃条件下以200‑500转/min离心5‑10min；取其上清液在2～5℃条件下以4500‑10000转/min离心10‑20min；再倾倒上清液后将沉淀中按体积比1:1～3加入无菌生理盐水混匀，在2～5℃条件下以4500‑10000转/min离心10‑20min制得。

【技术特征摘要】
1.一种粪菌组合物，包括粪便终悬液，其特征在于：所述粪便终悬液为健康猪粪便与无菌生理盐水按体积比1:1～15混匀，在2～5℃条件下以200-500转/min离心5-10min；取其上清液在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min；再倾倒上清液后将沉淀中按体积比1:1～3加入无菌生理盐水混匀，在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min制得。2.如权利要求1所述的粪菌组合物，其特征在于：所述粪菌组合物还包括高分子量化合物类保护剂脱脂奶和低分子量化合物类保护剂甘油、乳糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、山梨醇、侧金盏花醇、海藻糖中的一种或多种混合。3.如权利要求1所述的粪菌组合物，其特征在于：所述保护剂包括高分子量化合物类保护剂脱脂奶、低分子量化合物类保护剂甘油和其他低分子量化合物类保护剂，其中脱脂奶加入量为粪便终悬液等体积，其中脱脂奶的浓度为5～20%；甘油加入量为粪便终悬液体积10～30%；其他低分子量化合物类保护剂选自乳糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、山梨醇、侧金盏花醇、海藻糖中的一种或多种混合，其中每种的单独加入量为粪便终悬液体积的1%-6%。4.如权利要求1所述的粪菌组合物，其特征在于：所述保护剂包括高分子量化合物类保护剂脱脂奶和低分子量化合物类保护剂甘油，其中脱脂奶加入量为粪便终悬液等体积，其中脱脂奶的浓度为10～15%；甘油加入量为粪便终悬液体积10～30%；所述保护剂还包括低分子量化合物类保护剂半乳糖和蔗糖，其中半乳糖添加量为粪菌终悬液的1%-2%，蔗糖添加量为粪菌终悬液的2%-4%。5.如权利要求1所述的粪菌组合物，其特征在于：所述粪菌组合物可以为颗粒剂、粉剂、冻干粉状制剂、微胶囊制剂、缓控释制剂、片剂或混悬剂；优选冻干粉状制剂或微胶囊制剂。6.一种粪菌冻干粉状制剂的制备方法，其特征在于：采用如下步骤：1）粪便终悬液的制备：健康猪粪便与无菌生理盐水按体积比1:1～15混匀，在2～5℃条件下以200-500转/min离心5-10min；取其上清液在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min；再倾倒上清液后将沉淀中按体积比1:1～3加入无菌生理盐水混匀，在2～5℃条件下以4500-10000转/min离心10-20min制得...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙静，葛良鹏，刘作华，丁玉春，杜蕾，黄勇，曹浩然，吴梦，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：重庆;50