病毒检测方法及同步检测HIV‑1、HBV和HCV的试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种病毒检测方法及同步检测HIV‑1、HBV和HCV的试剂盒，涉及生物检测的技术领域。本发明专利技术提供的病毒检测方法，以HTLV‑1为内在阳性质控，包括如下步骤：提取待测样本的核酸和HTLV‑1的核酸进行基因扩增反应，对扩增结果进行分析。本发明专利技术以HTLV‑1作为内在阳性质控，能够监测整个病毒检测过程，增加了检测结果的准确性。另外，本发明专利技术提供了一种同步检测HIV‑1、HBV和HCV的试剂盒，包括HTLV‑1内在阳性质控标准品。该试剂盒以HTLV‑1作为内在阳性质控；该试剂盒操作简便，价格低廉，耗时短，具有较高的灵敏性和特异性，具有广阔的市场前景和商业价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测
，提供了一种病毒检测方法及同步检测HIV-1、HBV和HCV的试剂盒。
技术介绍
在科学实验或者其他行业中，对样品中含有的待测病毒进行检测时，一般都需要选用一个阳性对照样本和内在阳性质控，来指示实验结果的正确性。现有技术中，错误或者不当选用阳性对照样本和内在阳性质控，都不能很好的指示整个病毒检测过程，容易造成假阳性或者假阴性现象，降低检测结果的准确性。因此，需要选择合适的内在阳性质控样本，来准确指示检测结果。所以，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种病毒检测方法，以提高检测结果准确性的技术问题。本专利技术提供的一种病毒检测方法，其特征在于，该方法以HTLV-1为内在阳性质控，包括如下步骤：(1)提取待测样本的核酸和HTLV-1的核酸；(2)以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应；(3)对扩增结果进行分析。进一步的，步骤(2)中，所述以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应，为直接以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应。进一步的，步骤(2)中，所述以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应，为先以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行反转录反应，再以反转录反应完成后的反应液为模板进行基因扩增反应。进一步的，所述基因扩增反应为定量PCR反应、环介导等温扩增反应或者依赖核酸序列的扩增反应。进一步的，所述基因扩增反应的引物包括：HIV-1的上游引物，HIV-1的下游引物，HBV的上游引物，HBV的下游引物，HCV的上游引物，HCV的下游引物，HTLV-1的上游引物，HTLV-1的下游引物，HIV-1的探针，HBV的探针，HCV的探针，HTLV-1的探针；所述病毒检测方法能够同步检测HIV-1、HBV和HCV三种病毒。进一步的，所述HIV-1的上游引物为：5’-TAAAGCTTGCCTTGAGTGCT-3’(SEQIDNO：1)，所述HIV-1的下游引物为：5’-GTCTGAGGGATCTCTAGTTACCAG-3’(SEQIDNO：2)，所述HIV-1的探针为：5’-FAM-AGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTG-3’(SEQIDNO：3)，所述HBV的上游引物为：5’-CAACCTCCAATCACTCACCAACC-3’(SEQIDNO：4)，所述HBV的下游引物为：5’-ATATGATAAAACGCCGCAGACAC-3’(SEQIDNO：5)，所述HBV的探针为：5’-Cy5-TCCTCCAATTTGTCCTGGTTATCGCT-3’(SEQIDNO：6)，所述HCV的上游引物为：5’-TGCTAGCCGAGTAGYGTTGG-3’(SEQIDNO：7)，所述HCV的下游引物为：5’-ACTCGCAAGCACCCTATCAG-3’(SEQIDNO：8)，所述HCV的探针为：5’-FAM-CAGCGCTTTCCGGAACACCA-3’(SEQIDNO：9)，所述HTLV-1的上游引物为：5’-AATAATTCTACCCGAAGACTGTTTGC-3’(SEQIDNO：10)，所述HTLV-1的下游引物为：5’-ATTGTCGGACCGTTGTGCC-3’(SEQIDNO：11)，所述HTLV-1的探针为：5’-ROX-TTTCCAGCCTGTTAGGGCACCCGT-3’(SEQIDNO：12)。本专利技术提供的一种同步检测HIV-1、HBV和HCV的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括HTLV-1内在阳性质控标准品。进一步的，所述HTLV-1标准品中HTLV-1的浓度为0-106IU/mL。进一步的，所述试剂盒还包括：HIV-1的上游引物，HIV-1的下游引物，HBV的上游引物，HBV的下游引物，HCV的上游引物，HCV的下游引物，HTLV-1的上游引物，HTLV-1的下游引物。进一步的，所述试剂盒还包括HIV-1的探针，HBV的探针，HCV的探针，HTLV-1的探针；所述HIV-1的上游引物为：5’-TAAAGCTTGCCTTGAGTGCT-3’(SEQIDNO：1)，所述HIV-1的下游引物为：5’-GTCTGAGGGATCTCTAGTTACCAG-3’(SEQIDNO：2)，所述HIV-1的探针为：5’-FAM-AGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTG-3’(SEQIDNO：3)，所述HBV的上游引物为：5’-CAACCTCCAATCACTCACCAACC-3’(SEQIDNO：4)，所述HBV的下游引物为：5’-ATATGATAAAACGCCGCAGACAC-3’(SEQIDNO：5)，所述HBV的探针为：5’-Cy5-TCCTCCAATTTGTCCTGGTTATCGCT-3’(SEQIDNO：6)，所述HCV的上游引物为：5’-TGCTAGCCGAGTAGYGTTGG-3’(SEQIDNO：7)，所述HCV的下游引物为：5’-ACTCGCAAGCACCCTATCAG-3’(SEQIDNO：8)，所述HCV的探针为：5’-FAM-CAGCGCTTTCCGGAACACCA-3’(SEQIDNO：9)，所述HTLV-1的上游引物为：5’-AATAATTCTACCCGAAGACTGTTTGC-3’(SEQIDNO：10)，所述HTLV-1的下游引物为：5’-ATTGTCGGACCGTTGTGCC-3’(SEQIDNO：11)，所述HTLV-1的探针为：5’-ROX-TTTCCAGCCTGTTAGGGCACCCGT-3’(SEQIDNO：12)。进一步的，所述试剂盒还包括：HIV-1的上游引物，HIV-1的下游引物，HBV的上游引物，HBV的下游引物，HCV的上游引物，HCV的下游引物，HTLV-1的上游引物，HTLV-1的下游引物。本专利技术提供的病毒检测方法，以HTLV-1作为内在阳性质控，从样品处理的最初步骤监测整个病毒检测过程，增加了检测结果的准确性。另外本专利技术提供的同步检测HIV-1、HBV和HCV的试剂盒，通过以HTLV-1作为内在阳性质控，能够监测整个病毒检测过程，增加检测结果的准确性。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例1所建立的病毒检测方法稳定性验证结果图；图2为实施例1所建立的病毒检测方法的检测阈值验证结果图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术的一方面提供了一种病毒检测方法，该方法以HTLV-1为内在阳性质控，包括如下步骤：(1)提取待测样本的核酸和HTLV-1的核酸；(2)以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应；(3)对扩增结果进行分析。其中HTLV-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种病毒检测方法，其特征在于，该方法以HTLV‑1为内在阳性质控，包括如下步骤：(1)提取待测样本的核酸和HTLV‑1的核酸；(2)以待测样本的核酸和HTLV‑1的核酸为模板进行基因扩增反应；(3)对扩增结果进行分析。

【技术特征摘要】
1.一种病毒检测方法，其特征在于，该方法以HTLV-1为内在阳性质控，包括如下步骤：(1)提取待测样本的核酸和HTLV-1的核酸；(2)以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应；(3)对扩增结果进行分析。2.根据权利要求1所述的病毒检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应，为直接以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应。3.根据权利要求1所述的病毒检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行基因扩增反应，为先以待测样本的核酸和HTLV-1的核酸为模板进行反转录反应，再以反转录反应完成后的反应液为模板进行基因扩增反应。4.根据权利要求2或3所述的病毒检测方法，其特征在于，所述基因扩增反应为定量PCR反应、环介导等温扩增反应或者依赖核酸序列的扩增反应。5.根据权利要求4所述的病毒检测方法，其特征在于，所述基因扩增反应的引物包括：HIV-1的上游引物，HIV-1的下游引物，HBV的上游引物，HBV的下游引物，HCV的上游引物，HCV的下游引物，HTLV-1的上游引物，HTLV-1的下游引物，HIV-1的探针，HBV的探针，HCV的探针，HTLV-1的探针；所述病毒检测方法能够同步检测HIV-1、HBV和HCV三种病毒。6.根据权利要求5所述的病毒检测方法，其特征在于，所述HIV-1的上游引物为：5’-TAAAGCTTGCCTTGAGTGCT-3’(SEQIDNO：1)，所述HIV-1的下游引物为：5’-GTCTGAGGGATCTCTAGTTACCAG-3’(SEQIDNO：2)，所述HIV-1的探针为：5’-FAM-AGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTG-3’(SEQIDNO：3)，所述HBV的上游引物为：5’-CAACCTCCAATCACTCACCAACC-3’(SEQIDNO：4)，所述HBV的下游引物为：5’-ATATGATAAAACGCCGCAGACAC-3’(SEQIDNO：5)，所述HBV的探针为：5’-Cy5-TCCTCCAATTTGTCCTGGTTATCGCT-3’(SEQIDNO：6)，所述HCV的上游引物为：5’-TGCTAGCCGAGTAGYGTTGG-3’(SEQIDNO：7)，所述HCV的下游引物为：5’-ACTCGCAAGCACCCTATCAG-3’(SEQIDNO：8)，所述HCV的探针为：5’-FAM-CAGCGCTTTCCGGAACACCA-3’(SEQIDNO：9)，所述HTLV-1的上游引物为：5’...

【专利技术属性】
技术研发人员：隗慧林，
申请(专利权)人：宁波迪亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33