一株白囊耙齿菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株白囊耙齿菌，命名为白囊耙齿菌(Irpex lacteus)PR2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC NO.13190。本发明专利技术系首次从大兴安岭野生蓝莓根部中分离、纯化出一种白囊耙齿菌，利用液体有氧发酵获得白囊耙齿菌的大量菌丝，以乙醇作为提取溶剂，通过超声提取得到能够促进作物根系生长、提高抗逆性、促进开花、提高产量和作物品质的天然物质，有利于进一步开发具有超高促生活性的天然化合物；而且整个生产过程中无三废产生，低成本高效益，符合环保、粮食安全生产的社会需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株白囊耙齿菌及其应用，属于生物

技术介绍
随着人口的增加和耕地的减少，我国粮食安全与资源消耗和环境保护的矛盾日益尖锐。肥料在农业生产中占据重要地位，但是在使用过程中存在一些不合理的因素，导致肥料的生产性能没有得到有效地发挥，使得土壤肥力下降，肥料利用率降低，农业生产成本增加，效益降低，导致农产品品质下降，污染生态环境，加速土壤质量衰退，直接影响粮食持续增产、农业提质增效、农民节本增收和农产品质量安全。近年来，随着微生物代谢工程的兴起，植物基因表达调控方面的一些高活性化合物被不断地从微生物中发现，这些化合物揭示了植物与微生物之间长期共同进化关系。通过调整逆境中植物基因的表达，使植物得以在逆境中健康生长，解决农业生态系统中土壤退化、气候剧变等问题。白囊耙齿菌(Irpexlacteus)是一种腐生真菌，子实体一般生长在阔叶树的枯木或腐朽木上，该菌种含有许多营养物质，如蛋白质、多糖、多肽等，具有免疫调节功能。该菌主要分布在吉林省的长白山、黑龙江、河北、山西、江西、甘肃、云南、福建、西藏等省区。目前，对于白囊耙齿菌的研究主要集中在其耐缺氧作用(CN104138395A)、抗疲劳作用(CN104138396A)和降解木质素的作用(CN105754881A)等；而对于白囊耙齿菌在促进作物生长、提高抗病性和肥料利用率方面还未见报道。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一株白囊耙齿菌及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：根据本专利技术的第一方面，提供一株白囊耙齿菌，命名为白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCCNO.13190。该菌株是从大兴安岭野生蓝莓根部中分离得到，菌株在PDA培养基上，25℃培养一周，直径80-85mm，菌落平坦，菌丝白色，平铺，绳状，边缘羊毛状。两周后菌丝变成淡黄色，有宜人的水果香味。菌丝直径2-4mm，菌丝有隔膜，着色深，均匀，且多分支，呈网状。根据本专利技术的第二方面，提供一种植物诱抗剂，其活性成分为上述白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2的发酵后菌丝体的乙醇提取物。本专利技术还提供上述植物诱抗剂的制备方法，包括：发酵上述的白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2，将发酵液离心过滤，得到菌丝体的步骤；以及将菌丝体采用乙醇进行提取的步骤。上述制备方法中，发酵采用的发酵培养基的原料组成为：马铃薯提取液1000ml、酵母膏1.0g、蛋白胨3.0g、葡萄糖15.0g、琼脂17.0g。所述马铃薯提取液的制备方法为：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升。上述制备方法中，发酵的条件为：接种量为5-15％(体积百分数)、发酵培养温度为20-30℃，培养4-6天；优选的，发酵的条件为：接种量为10％、发酵培养温度为25℃，培养5天。上述制备方法中，乙醇提取的操作为：将菌丝体干燥、粉碎，加入乙醇冷浸20-30h，然后超声提取0.5-1.5h；重复提取2-4次，合并滤液，即得。优选的，所述乙醇提取的操作为：将菌丝体在50℃下干燥、粉碎，加入乙醇冷浸24小时，然后超声提取2h；重复提取2次，合并滤液。所述乙醇的加入量为菌丝体(干燥后)重量的15-30％；每次提取加入乙醇的量相同。根据本专利技术的第三方面，提供上述白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2和/或植物诱抗剂在促进农作物生长或者促进农作物增产中的应用。上述应用中，所述农作物为马铃薯、水稻或大姜。上述应用中，促进马铃薯增产的应用方法为：播种时，以本专利技术的植物诱抗剂10ml/亩喷沟；膨大期，以本专利技术的植物诱抗剂50ml/亩加氨基酸水溶肥，随水滴灌。本专利技术的有益效果：本专利技术系首次从大兴安岭野生蓝莓根部中分离、纯化出一种白囊耙齿菌，利用液体有氧发酵获得白囊耙齿菌的大量菌丝，以乙醇作为提取溶剂，通过超声提取得到能够促进作物根系生长、提高抗逆性、促进开花、提高产量和作物品质的天然物质，有利于进一步开发具有超高促生活性的天然化合物；而且整个生产过程中无三废产生，低成本高效益，符合环保、粮食安全生产的社会需求。附图说明图1：PR2菌株菌落形态。图2：PR2菌种的菌丝形态(40×0.65和100×1.4)。图3：菌株PR2通过ITS序列分析建立的系统发育树。具体实施方式下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：菌株的分离和鉴定1.菌株的分离与筛选：(1)菌株的分离取新鲜的大兴安岭野生蓝莓根样分别用流水冲洗干净，用滤纸吸干水分，剪成适当大小，用无菌水冲洗3次，在10％的H2O2中消毒10min，用无菌水冲洗3遍，转入6％的次氯酸钠溶液中浸泡2min，然后用无菌水冲洗3～5遍，放在无菌的滤纸片上，吸干表面水分。用无菌剪刀剪成1cm左右的根段，接种到121℃高温高压灭菌30min后的PDA培养基上。置于23℃度培养箱培养3～10天后，即可见样品切割过的边缘长出菌丝，经平板反复分离、纯化；直至每个平板上只含有统一特征的单一菌落。最后得到一株菌，编号为PR2；PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml。2.菌株PR2的形态及生物学特性测定将菌株PR2在PDA培养基上，25℃培养一周，直径80-85mm，菌落平坦，菌丝白色，平铺，绳状，边缘羊毛状。两周后菌丝变成淡黄色，有宜人的水果香味。菌丝直径2-4mm，菌丝有隔膜，着色深，均匀，且多分支，呈网状。该菌具有耙齿菌属的特征，初步判定为白囊耙齿菌(Irpexlacteus)；(该菌的菌落形态如图1所示，不同放大倍率下的菌株的菌丝形态如图2所示(左图放大倍率为40×0.65，右图放大倍率为100×1.4)。3.菌株PR2的分子生物学鉴定以ITS1和ITS4为引物，对从野生蓝莓根部中分离的真菌PR2菌株进行了扩增，并对扩增产物进行了测序；ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG；ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC。扩增产物的序列如SEQIDNO.1所示，具体如下：基于blast搜索，选取与研究菌株序列最接近的种或最靠近的进化分支代表菌株的序列进行比对，利用Mega6.0软件通过ML算法，利用bootstrap1000次建树结果建立进化树(如图3所示)。结果表明PR2真菌与白囊耙齿菌(Irpexlacteus)的同源相似性达到99％，氨基酸序列的相似性也达到了94％。通过形态学鉴定和分子生物学鉴定，最终鉴定结果菌株PR2为白囊耙齿菌(Irpexlacteus)。将筛选分离得到的菌株命名为白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCCNO.13190。实施例2：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株白囊耙齿菌，命名为白囊耙齿菌(Irpex lacteus)PR2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC NO.13190。

【技术特征摘要】
1.一株白囊耙齿菌，命名为白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCCNO.13190。2.一种植物诱抗剂，其活性成分为权利要求1所述的白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2的发酵后菌丝体的乙醇提取物。3.权利要求2所述的植物诱抗剂的制备方法，其特征在于，包括：发酵上述的白囊耙齿菌(Irpexlacteus)PR2，将发酵液离心过滤，得到菌丝体的步骤；以及将菌丝体采用乙醇进行提取的步骤。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，发酵采用的发酵培养基的原料组成为：马铃薯提取液1000ml、酵母膏1.0g、蛋白胨3.0g、葡萄糖15.0g、琼脂17.0g。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述马铃薯提取液的制备方法为：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟...

【专利技术属性】
技术研发人员：代丽丽，
申请(专利权)人：泰安市煜达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37