本发明专利技术提供了M5型急性髓系白血病相关的特异miRNA及其应用。本发明专利技术利用新一代高通量测序技术，结合系统的生物信息学分析方法，筛选得到与M5型急性髓系白血病相关的特异miRNA，其RNA序列分别如SEQ ID NO.1-3所示。本发明专利技术还提供了检测该特异miRNA的引物及其在制备检测M5型急性髓系白血病诊断试剂盒中的应用。本发明专利技术的特异miRNA可用于白血病的临床诊断和用于指导，本发明专利技术检测miRNA的特异性引物对可用于制备检测M5型急性髓系白血病诊断试剂或试剂盒，并对急性髓系白血病的治疗进行用药指导，具备较好的临床应用价值和广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，具体地说涉及一种与M5型急性髓系白血病(AML)相关的特异miRNA及其应用。
技术介绍
白血病是以髓源或淋巴源血前体细胞的异常增殖为特征的一种异质性疾病，白血病的预后一般较差,病死率较高,因此引起学术界的重视。白血病是以髓源或淋巴源血前体细胞的异常增殖为特征的一种异质性疾病，主要包括急性淋巴系白血病(ALL)，急性髓系白血病(AML)，慢性淋巴系白血病(CLL)和慢性髓系白血病(CML)等几种(Lightfoot,2005)。在我国，急性白血病(AL)比慢性白血病(CL)多见(约5.5:1)。急性髓系白血病(AML)在青壮年中多见，急性淋系白血病(ALL)在儿童、青壮年中的发病率都比较高。白血病的预后一般较差,病死率较高,因此引起学术界的重视。应用现代联合化疗方法,74％-81％的儿童ALL获治愈,但部分高危组病人的预后较差；成人ALL的治疗效果尚不尽人意，虽然80％-95％以上的成人ALL在诱导治疗后获得形态学上的完全缓解(CR),但大多数病人很快复发,最终60岁以下患者中2/3死亡,而60岁以上患者中死亡率高达90％。因而迫切需要研究有效方法以改进现有治疗结果。部分成人ALL患者带有预示预后的特异融合基因，有些则没有特异融合基因，预后主要依靠一般状况如发病时白细胞数、治疗反应等。近30年来，AML的治疗取得了长足的进步，60岁以下患者的完全缓解率(completeremission,CR)与总体生存率稳步提高，但难治、复发AML仍是当前临床治疗的难点。按目前AML治疗水平,有10％～20％的患者对一线标准诱导方案无效,50％～80％已经获得CR的患者早晚(多数在1年内)还要复发。同ALL相似，有的AML类型有特异融合基因，有的类型依靠形态学和免疫表型，预后有异质性。在没有特异融合基因的患者中发现评判和预测预后的生物学指标是很有意义的。miRNA是一类内源性、高度保守、非蛋白编码的小分子RNA，长度通常为18-25nt。miRNA主要通过抑制蛋白编码基因的翻译或降解mRNA来发挥调控作用。研究表明：miRNA可广泛参与发育周期、细胞增殖和分化、细胞凋亡、新陈代谢、神经调控、肿瘤发生以及病毒和宿主的相互作用等各种生理和病理的调控过程。miRNA所在基因座的缺失、扩增、突变、表观遗传修饰沉默等均可引起miRNA的异常表达或调控，从而导致肿瘤的发生。人类大约有50％的已注释miRNA位于和癌症相关的脆性位点及基因组区域中,并且miRNA的表达与多种肿瘤相关,可能在肿瘤中起着原癌和抑癌基因的作用。已有诸多研究结果证实：miRNA的表达及功能异常调控可导致白血病的发生。在此过程中，miRNA既可充当原癌基因又可充当抑癌基因，有些miRNA甚至在白血病细胞的染色体上出现缺失。它们的表达变化必然会引起其调控的相应靶基因表达的变化，结果导致白血病细胞的表型、增殖及分化功能等方面的相应变化。有些miRNA在白血病细胞中特异性表达，且不同的分化发育阶段可受特定miRNA调节。miRNA在不同的白血病细胞中具有特定的表达水平和模式,miRNA表达谱不但可以反映白血病的类型，而且能够反映其分化状态。对这部分miRNA的深入研究，可望为靶向治疗白血病提供新的思路。AML的临床诊断方法主要包括形态学检测、细胞遗传学检测、免疫表型分析检测、特异融合基因检测、特定基因突变检测，以及表观遗传学分析等。报道指AML患者的miRNA表达谱特征与发病阶段、表型特征，以及AML特异融合基因的发生等均具有较高的相关性。因此，miRNAs作为分子标记物用于AML临床分子诊断是一个必然的趋势。现阶段尚未见成熟的miRNAs分子标志物应用于临床诊断AML的技术与产品，究其根本原因可能在于已有的绝大多数研究是笼统地对所有FAB类型的AML进行分析，由于AML各个疾病分型在形态学及细胞遗传学等方面不尽相同，使得这些miRNAs在临床应用上受到很大限制。miRNAs分子标记物更适用于特定FAB类型AML的临床分子诊断。M5型AML(M5急性单核细胞白血病)现阶段在临床上主要还是通过血象/骨髓象、细胞化学染色等形态学方面的检测，检测方法较其他类型AML单一，很大程度上影响诊断的准确率，为该类型AML患者的临床治疗与用药指导带来很大不确定性，延误病情。如果在已有的诊断M5型AML形态学分析诊断技术的基础上，辅以特异性miRNAs分子标记物的分子检测手段，无疑将对该类型AML疾病的诊断具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与M5型急性髓系白血病(AML)相关的特异miRNA及其应用。本专利技术利用新一代高通量测序技术，结合系统的生物信息学分析方法，筛选得到3个与M5型急性髓系白血病相关的特异miRNA，其名称为hsa-miR-222-3p，hsa-let-7d-5p，hsa-miR-221-3p。其RNA序列分别如SEQIDNO.1-3所示。miRNA名称序列hsa-miR-222-3pAGCUACAUCUGGCUACUGGGU(SEQIDNO.1)hsa-let-7d-5pAGAGGUAGUAGGUUGCAUAGUU(SEQIDNO.2)hsa-miR-221-3pAGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC(SEQIDNO.3)本专利技术提供了上述特异miRNA在制备检测M5型急性髓系白血病诊断试剂盒中的应用。本专利技术提供了特异miRNA在制备M5型急性髓系白血病用药效果评价体系中的应用。进一步地，本专利技术提供了用于检测上述特异miRNA的特异性引物对，用于检测hsa-miR-222-3p的特异性引物对的序列如SEQIDNO.4-5所示；用于检测hsa-let-7d-5p的特异性引物对的RNA序列如SEQIDNO.6-7所示；用于检测hsa-miR-221-3p的特异性引物对的序列如SEQIDNO.8-9所示。hsa-miR-222-3p反向引物GCGAGCACAGAATTAATACGAC(SEQIDNO.4)正向引物AGCTACATCTGGCTACTGGGT(SEQIDNO.5)hsa-let-7d-5p2-->反向引物GCGAGCACAGAATTAATACGAC(SEQIDNO.6)正向引物AGAGGTAGTAGGTTGCATAGTT(SEQIDNO.7)hsa-miR-221-3p反向引物GCGAGCA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种M5型急性髓系白血病相关的特异miRNA，其特征在于，其为hsa‑miR‑222‑3p，hsa‑let‑7d‑5p，hsa‑miR‑221‑3p；其RNA序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示。
【技术特征摘要】
1.一种M5型急性髓系白血病相关的特异miRNA，其特征在于，其为hsa-miR-222-3p，
hsa-let-7d-5p，hsa-miR-221-3p；其RNA序列分别如SEQIDNO.1-3所示。
2.权利要求1所述的特异miRNA在制备检测M5型急性髓系白血病诊断试剂盒中的应用。
3.权利要求1所述的特异miRNA在制备M5型急性髓系白血病用药效果评价体系中的应
用。
4.用于检测权利要求1所述的特异miRNA的特异性引物对，其特征在于，用于检测hsa-
miR-222-3p的特异性引物对序列如SEQIDNO.4-5所示；
用于检测hsa-let-7d-5p的特异性引物对序列如SEQIDNO.6-7所示；
用于检测hsa-miR-221-3p的特异性引物对序列如SEQIDNO....
【专利技术属性】
技术研发人员：方向东，张昭军，刘金立，陈晓娟，刘淑阁，熊倩，王万恒，
申请(专利权)人：中国科学院北京基因组研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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