本发明专利技术涉及一种急性髓系白血病相关miRNA标志物及其特异引物的应用，该标志物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本发明专利技术还涉及该miRNA标志物的特异引物与应用。本发明专利技术提供的微小核糖核酸（microRNAs）标志物组筛选出的标志物可使检测定量精确，大大提高疾病诊断的敏感性和特异性。
【技术实现步骤摘要】
急性髓系白血病相关miRNA标志物及其特异引物的应用
本专利技术涉及一种急性髓系白血病相关miRNA标志物及其特异引物的应用，属于医学分子生物学
。
技术介绍
急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)是一种异质性髓细胞肿瘤，也称急性非淋巴细胞性白血病，常进展迅速。其特点是造血干细胞正常分化受阻，恶性肿瘤细胞克隆性增生取代正常造血，从而造成贫血、出血、感染及脏器浸润等一系列症状。在恶性肿瘤所致的死亡率中，白血病在儿童及35岁以下成人中居第一位。在我国，白血病中以急性髓系白血病的年发病率最高，约占所有病例的58.7%。急性髓系白血病不仅需要早期及时诊断，而且在化疗达到完全缓解后也依然需要不断监测病情并观察进展，及时采取相应的手段积极干预治疗。目前，急性髓系白血病患者的诊断和治疗方案主要依据细胞遗传学因素。虽然已有某些专利研究利用基因或蛋白标志物对患者进行分类，如中国专利文献(200910214195.9H)⑶7基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用)；(200910214196.3CGI 一 135基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用)；(201010213640.2 —种用于检测急性髓系白血病化疗疗效相关的基因组合、引物、探针和用途)；(201210496651.6白血病细胞蛋白质谱特征分子的检测方法)。但是这种分类仅依据mRNA和蛋白表达的差异，具有一定的局限性，忽略了同样具有重要功能作用的非编码RNA分子(主要是微RNA，miRNA)。因此，结合miRNA芯片所显示的表达情况，会进一步丰富基因表达谱，为急性髓系白血病提供更明确的诊断和预后手段。MicroRNA (微RNA，miRNA)是细胞内一类在进化上高度保守，长度约为22个核苷酸的非编码RNA的基因产物。MiRNA由一段具有发卡结构的单链RNA前体经Drosha酶和Dicer酶的剪切后生成。MicroRNA通过与目标mRNA分子的3’端非编码区域(3’一 UTR)互补配对，使目标mRNA分子的翻译受到抑制或引起特异性的对mRNA分子的切割，从而在转录后水平对靶基因的表达进行调控。研究表明miRNA参与包括细胞增殖、凋亡、细胞分化、发育和逆境应答等多种生物学过程，因此人体的众多生命活动和疾病的发生发展都与miRNA的变化密不可分。近期研究发现miRNA异常表达和一系列白血病有着密不可分的关系。已有研究证实miRNA在造血过程粒细胞形成中起到重要的作用。比如在对人类早幼粒细胞株HL-60的研究中发现，miR-21, miR 一 196b的失调可抑制G-CSF诱导的粒细胞生产。比如在正常人髓系细胞中富集的miR — 223参与了粒细胞的发生过程。在miRNA与血液系统恶性疾病的关系中研究最为深入的是miR — 15a和miR — 16 一 I与人慢性淋巴白血病(CLL)的相关性。miR — 15a和miR — 16 -1定位于CLL中最普遍的基因组织异常一 13ql4.3区域的杂合缺失和转座位置，该缺失直接导致它们的表达减低。miR - 15a和miR -16-1通过靶向抗凋亡基因BCL2，以类似于抑癌基因的作用抑制B淋巴细胞的过度增殖，而它们的缺失则导致B细胞增殖能力显著增强，从而脱离正常的增殖凋亡平衡走向恶性转化的途径。由于miRNA的变化早于基因和蛋白的改变，也早于疾病症状的出现，由此检测miRNA的动态变化，有可能为急性髓系白血病的发生发展提供线索，进而可以指导临床进行早期诊断，有效控制疾病的发展。然而，到目前为止，miRNA用于急性髓系白血病早期诊断中的应用报道非常少。如中国专利文献200880003736.7，名称:用于急性髓细胞白血病(AML)的诊断、预后和治疗的基于微RNA的方法和组合物。该专利技术公开了用于白血病相关疾病，特别是急性髓性白血病的诊断、预后和/或治疗的利用miRNA特征的方法和组合物。中国专利文献200910083737.3，名称:三个microRNA在人急性髓系白血病诊断和治疗中的应用。该专利技术公开了三个miRNA (miR —451，miR—29a和miR — 142 — 3p)在急性髓系白血病诊断和治疗中的应用。涉及在人急性髓系白血病人外周血单个核细胞中表达明显减少的miR — 451，miR — 29a和miR — 142 — 3p的功能及其在AML诊断、预后和治疗中的应用。综上所述，miRNA是细胞内一类重要的调节因子，调控许多基因的表达，与急性髓系白血病发生发展关系密切。通过检测miRNA表达进行早期诊断比传统的蛋白或基因表达分析具有更高的准确度。然而现有AML早期诊断标记物不涉及基于粒细胞miRNA表达谱变化引出的miR - 26a 一 5p作为AML早期诊断分子标记物的应用。结合AML中异常表达的粒细胞miR - 26a 一 5p组合，并研制相对应的AML辅助诊断试剂盒，对我国急性髓系白血病的诊断现状一定有良好的促进作用。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种急性髓系白血病相关miRNA标志物及其特异引物的应用。本专利技术技术方案如下:一种与急性髓系白血病相关miRNA标志物在制备急性髓系白血病辅助早期诊断试剂盒中的应用，该标志物的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。[0011 ] 一种与急性髓系白血病相关的miRNA标志物的特异引物在制备急性髓系白血病辅助早期诊断试剂盒中的应用，该特异引物为一对，核苷酸序列如SEQ ID N0.2和SEQ IDN0.3所示。上述急性髓系白血病辅助早期诊断试剂盒，包括:核苷酸序列如SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.3所示的miR — 26a — 5p标志物的特异引物；逆转录酶、缓冲液，dNTPs, MgCl2, DEPC水和Taq酶，以及人U6miRNA。人U6miRNA做为标准品使用。人U6miRNA购自广州复能基因有限公司。上述逆转录酶、缓冲液，dNTPs, MgCl2, DEPC水和Taq酶均为本领域常用试剂，本领域技术人员可以根据需要自行选取。上述试剂盒的使用过程如下:(DmiRNA差异表达谱分析:选择急性髓系白血病病例和与其匹配的健康对照，检测其外周血粒细胞miRNA表达谱及含量，分析病例和健康对照间miRNA的共性和特性，筛选特异表达的miRNAs。(2)筛选疾病相关miRNAs:对已筛选的粒细胞miRNAs进行更优化的定量分析，确定急性髓系白血病相关miRNAs。(3)miRNAs筛查和诊断试剂盒的研制:根据急性髓系白血病相关miRNAs开发的miRNAs辅助诊断试剂盒，实现急性髓系白血病早期诊断的目的。有益效果本专利技术提供的微小核糖核酸(miCToRNAs)标志物作为急性髓系白血病辅助早期诊断的标志物的优越性在于:miRNA本身仅有18 — 25个核苷酸，其成熟体稳定存在于细胞质中，因此在急性髓系白血病中miRNA极有可能早于结构蛋白类物质表现出异常，检测其水平可作为急性髓系白血病辅助早期诊断的生物标记物，并且本专利技术检测定量精确，能够大大提高疾病诊断的敏感性和特异性。【附图说明】图1为急性髓系白血病患者组和正常健康对照组外周血粒细胞miRNAs表达差异，其中:深色代表高表达，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与急性髓系白血病相关miRNA标志物在制备急性髓系白血病辅助早期诊断试剂盒中的应用，该标志物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种与急性髓系白血病相关miRNA标志物在制备急性髓系白血病辅助早期诊断试剂盒中的应用，该标志物的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。2.—种权利要求1所述与急性髓系白血病相关的miRNA标志物的特异引物在制备急性髓系白血病辅助早期诊断试剂盒中的应用，该特异引物为一对，核苷酸序列如SEQ ID N0.2和 ...
【专利技术属性】
技术研发人员：李曦，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：
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