The invention provides a method for detecting a genetic toxicant in water by using a fish, belonging to the field of chemical safety evaluation and environmental monitoring. Including the following steps: (1) using a water sample exposure of Pseudorasbora parva; (2) the exposure after parva liver cells single cell gel electrophoresis, detection and counting the cell tail length, tail moment and DNA content, and draw a dose effect curve. By comparing with the blank control and positive control, and the dose effect relationship, the genotoxicity of the tested samples was determined. The detection method of the invention can sensitively and quickly judge the genotoxicity of the chemical substance, and provides a method for detecting the genotoxicity of the chemical and the monitoring of the environmental genetic toxicity.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了一种利用麦穗鱼检测水中遗传毒物的方法,属于化学品安全性评价和环境监测领域。
技术介绍
遗传毒性测试和评估方法已列入新药研究、环境监测、农药开发、化学物质与食品安全性评价、新型材料研制等涉及人体健康或环境风险评价的规定试验检测项目。由于生物物种具有地域性,使用国际标准模式物种进行环境监测和化学品安全性评价,并不能充分保护我国本土生物。因此,我国新化学物质登记法规中规定,进行新化学物质申报时必须提供在中国境内用中国的供试生物完成的生态毒理学测试数据。对于排水和环境水体进行毒性监测,也非常必要采用本土物种。麦穗鱼(Pseudorasboraparva)属鲤科,麦穗鱼属,在国内分布广泛,是江河、湖泊、池塘等水体中常见的小型鱼类,具有适应性广、繁殖力强、易于培养等特点。目前利用麦穗鱼进行毒性评价主要用于测试急性毒性,或利用麦穗鱼微核实验评价遗传毒性。尚无利用麦穗鱼彗星实验评价遗传毒性的方法。彗星实验,即单细胞凝胶电泳实验,是一种检测真核生物细胞DNA损伤的常用方法,可以对遗传毒物引起的DNA损伤进行定性和半定量的测试,与传统的遗传毒性测试方法如微核试验、Ames实验等相比,具有灵敏、快速的优点。人用药品注册技术规定国际协调会议(ICH)2012年修订的药物评价指南中将组织彗星实验纳入遗传毒性评价中。经济合作与发展组织(OECD)已颁布体内碱性彗星试验指南。因此利用彗星实验进行遗传毒性检测具有 ...
【技术保护点】
一种利用麦穗鱼检测水中遗传毒物的方法,其特征在于,步骤如下:(1)试验鱼准备:将麦穗鱼在温度21‑23℃、光暗比14h:10h曝气水驯养7天,得到平均体长2.6‑2.8cm和平均体重0.3‑0.5g的麦穗鱼;(2)设置空白对照组水样、阳性对照组水样和待测组水样,暴露处理麦穗鱼;每2L水中暴露5条麦穗鱼,暴露处理前一天停止喂食,暴露期间不喂食;所述的空白对照组水样为曝气水;所述的阳性对照组水样为用曝气水配制的浓度为0‑30mg/L的浓度梯度的重铬酸钾溶液,或用曝气水配制的浓度为0‑5μg/L的浓度梯度的4‑硝基喹啉‑1‑氧化物溶液;所述的待测组水样是用曝气水配制的目标化学物溶液、经过过滤的环境水样或其他溶于水中的环境样品;(3)将麦穗鱼分别暴露在步骤(2)的三种水样中96h,取出麦穗鱼,冰上解剖取出肝脏组织,用于单细胞凝胶电泳;(4)染色:单细胞凝胶电泳结束后用蒸馏水冲洗双层胶板,用Tris‑HCl缓冲液浸泡双层胶板15min,反复2次;避光晾干,Gelred染色;(5)镜检和分析:用显微镜观察经过步骤(4)处理后的细胞状态并拍照;获取图像后,对细胞彗星尾长、DNA含量和尾矩统计分析。
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种利用麦穗鱼检测水中遗传毒物的方法,其特征在于,步骤如下:
(1)试验鱼准备:将麦穗鱼在温度21-23℃、光暗比14h:10h曝气水驯养7天,
得到平均体长2.6-2.8cm和平均体重0.3-0.5g的麦穗鱼;
(2)设置空白对照组水样、阳性对照组水样和待测组水样,暴露处理麦穗鱼;
每2L水中暴露5条麦穗鱼,暴露处理前一天停止喂食,暴露期间不喂食;
所述的空白对照组水样为曝气水;
所述的阳性对照组水样为用曝气水配制的浓度为0-30mg/L的浓度梯度的重
铬酸钾溶液,或用曝气水配制的浓度为0-5μg/L的浓度梯度的4-硝基喹啉-1-氧
化物溶液;
所述的待测组水样是用曝气水配制的目标化学物溶液、经过过滤的环境水
样或其他溶于水中的环境样品;
(3)将麦穗鱼分别暴露在步骤(2)的三种水样中96h,取出麦穗鱼,冰上解剖
取出肝脏组织,用于单细胞凝胶电泳;
(4)染色:单细胞凝胶电泳结束后用蒸馏水冲洗双层胶板,用Tris-HCl缓冲液
浸泡双层胶板15min,反复2次;避光晾干,Gelred染色;
(5)镜检和分析:用显微镜观察经过步骤(4)处理后的细胞状态并拍照;获
取图像后,对细胞彗星尾长、DNA含量和尾矩统计分析。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的单细胞凝胶电泳步骤如下:
1)制备单细胞悬浮液:取麦穗鱼肝脏组织,用PBS缓冲液冲洗肝脏组织,
技术研发人员:刘薇,张洲,张新,赵璐璐,杨京亚,
申请(专利权)人:大连理工大学,
类型:发明
国别省市:辽宁;21
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