鹿茸提取物的制备方法及其相关产品技术

本发明专利技术公开了鹿茸提取物的制备方法及其相关产品。采用本发明专利技术的方法制备的鹿茸蛋白质提取物能够缓解模型组大鼠的帕金森病的症状，增加脑组织纹状体中的神经元细胞的数量。采用鹿茸蛋白质提取物对模型组大鼠进行治疗后，能够增加大鼠脑脊液中DA、DOPAC和HVA和脑组织中DA和5-HT，降低大鼠脑脊液中谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量和脑组织中谷氨酸的含量，降低大鼠脑脊液和脑组织中HAV/DA、DOPAC/DA、5-HIAA/5-HT和谷氨酸/γ-氨基丁酸的比值。通过药理实验证明，鹿茸蛋白质提取物对帕金森病动物模型具有很好的治疗作用，为治疗帕金森病的新药研发提供实验依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鹿茸提取物的制备方法及其相关产品。
技术介绍
鹿茸是中药里的名贵药材，和人参、阿胶被称为中药三宝，已有2000多年的入药历史。《本草纲目》中记载鹿茸“生精补髓，养血益阳，强健筋骨”，味甘咸，性温，入肝、肾经，补肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒，性温而不燥，具有振奋和提高机体功能的作用，对全身虚弱、久病之后的患者，有较好的强身作用。现代药理研究证实，鹿茸中的化学成分较复杂，其中蛋白类成分高达55.26％，对心血管系统、神经系统、性功能均有正向调节作用。但由于分析方法的限制，对其中的蛋白类成分的药理作用知之甚少。目前已有报道表明，鹿茸中提取出的小分子多肽物质可明显促进体外神经干细胞向神经元分化的作用,并可促进外周神经再生，这些结果为鹿茸多肽应用于神经系统损伤性疾病的治疗提供了可靠的实验依据，但鹿茸大分子蛋白类物质对中枢退行性病变治疗作用还未见报道。帕金森病(Parkinsondisease,PD)是人类第二大中枢神经退行性疾病，多见于老年人，平均发病年龄为55岁，70岁及以上人群发病率达120/10万。临床上以静止性震颤、运动迟缓、肌肉强直和步态障碍为主要特征。其病理学特点包括黑质-纹状体多巴胺(dopamine,DA)能神经元缺失和胞质内路易小体(Lewybodies,LB)的形成，导致多巴胺神经元变性的原因迄今不明。目前，对帕金森病的治疗药物多侧重于对运动症状的控制，而很少关注非运动症状和整个疾病的发展过程，不能预防多巴胺能神经元的退变，且长期应用有严重的毒副作用，因此安全有效的治疗药物是整个人类社会的共同需求。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何预防和/或治疗帕金森病。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了鹿茸蛋白质提取物的制备方法。本专利技术所提供的鹿茸蛋白质提取物的制备方法，包括：1)将鹿茸进行粉碎，得到鹿茸粉碎物；用水浸提所述鹿茸粉碎物，收集水溶性物质得到鹿茸水溶性提取物；2)对所述鹿茸水溶性提取物用水进行透析至pH值为6.5-8.5(如7.0)，结束透析，得到所述鹿茸蛋白质提取物。上述方法中，所述鹿茸粉碎物的粒径可为50μm-100μm，具体可为75μm。上述方法中，所述用水浸提时水的pH值为3-4(如3.5)，所述水的pH值可通过向水中加入冰醋酸进行调节。上述方法中，所述用水浸提为在2-6℃(如4℃)进行20-26h(如24h)。上述方法中，所述鹿茸粉碎物和水的质量比可为1：(4-6)，具体可为1：5，所述鹿茸的质量为鲜重。上述方法中，所述鹿茸可为新鲜的鹿茸。上述方法中，可采用离心收集所述水溶性物质。所述离心采用的离心力可为3000g-5000g(如4000g)，离心时间可为10-20min(如10min)。上述方法中，所述透析采用截留分子量为1kDa的半透膜进行。所述透析可在水中进行10-12h，每4h更换水一次。上述方法中，所述方法还包括将结束透析后得到的液体在50-60℃(如55℃)进行浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液在3000g-5000g(如4000g)进行离心10-20min(如10min)，收集上清液，将所述上清液进行冷冻干燥，得到鹿茸蛋白质提取物干粉的步骤。上述方法中，所述鹿茸蛋白质提取物含有蛋白质，所述蛋白质的分子量可为10kDa-250kDa。上述方法中，所述鹿茸蛋白质提取物中含有表1-表27中的157种蛋白质。本专利技术所提供的利用所述鹿茸蛋白质提取物的制备方法制备的鹿茸蛋白质提取物也属于本专利技术保护的范围。本专利技术还提供了鹿茸蛋白质，所述鹿茸蛋白质含有表1-表27中的157种蛋白质。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种预防和/或治疗帕金森病的产品，其活性成分为所述鹿茸蛋白质提取物或所述鹿茸蛋白质。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了活性成分为所述鹿茸蛋白质提取物或所述鹿茸蛋白质的产品，所述产品具有下述17种功能：1)增加脑组织中的神经元细胞数量；2)增加脑脊液中多巴胺的含量；3)增加脑脊液中二羟苯乙酸的含量；4)增加脑脊液中高香单酸的含量；5)降低脑脊液中谷氨酸含量；6)降低脑脊液中γ-氨基丁酸的含量；7)降低脑脊液中高香单酸/多巴胺比值；8)降低脑脊液中二羟苯乙酸/多巴胺比值；9)降低脑脊液中5-羟吲哚乙酸/5-羟色胺比值；10)降低脑脊液中谷氨酸/γ-氨基丁酸比值；11)增加脑组织中多巴胺的含量；12)增加脑组织中5-羟色胺的含量；13)降低脑组织中谷氨酸含量；14)降低脑组织中高香单酸/多巴胺比值；15)降低脑组织中二羟苯乙酸/多巴胺比值；16)降低脑组织中5-羟吲哚乙酸/5-羟色胺比值；17)降低脑组织中谷氨酸/γ-氨基丁酸比值。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述鹿茸蛋白质提取物或所述鹿茸蛋白质在制备具有下述17种功能的产品中的应用：1)增加脑组织中的神经元细胞数量；2)增加脑脊液中多巴胺的含量；3)增加脑脊液中二羟苯乙酸的含量；4)增加脑脊液中高香单酸的含量；5)降低脑脊液中谷氨酸含量；6)降低脑脊液中γ-氨基丁酸的含量；7)降低脑脊液中高香单酸/多巴胺比值；8)降低脑脊液中二羟苯乙酸/多巴胺比值；9)降低脑脊液中5-羟吲哚乙酸/5-羟色胺比值；10)降低脑脊液中谷氨酸/γ-氨基丁酸比值；11)增加脑组织中多巴胺的含量；12)增加脑组织中5-羟色胺的含量；13)降低脑组织中谷氨酸含量；14)降低脑组织中高香单酸/多巴胺比值；15)降低脑组织中二羟苯乙酸/多巴胺比值；16)降低脑组织中5-羟吲哚乙酸/5-羟色胺比值；17)降低脑组织中谷氨酸/γ-氨基丁酸比值。实验证明，采用本专利技术的方法制备的鹿茸蛋白质提取物能够缓解模型组大鼠的帕金森病的症状，增加纹状体内的神经元细胞的数量。采用鹿茸蛋白质提取物对模型组大鼠进行治疗后，能够增加大鼠脑脊液中DA、DOPAC和HVA和脑组织中DA和5-HT，降低大鼠脑脊液中谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量和脑组织中谷氨酸的含量，降低大鼠脑脊液和脑组织中HAV/DA、DOPAC/DA、5-HIAA/5-HT和谷氨酸/γ-氨基丁酸的比值。通过药理实验证明，鹿茸蛋白质提取物对帕金森病动物模型具有很好的治疗作用，为治疗帕金森病的新药研发提供实验依据。附图说明图1为BSA标准曲线。图2为鹿茸蛋白质提取物的SDS-PAGE电泳图。其中，泳道1为蛋白质分子量Marker，泳道2-4均为鹿茸蛋白质提取物。图3为鹿茸蛋白质提取物对定点注射了6-OHDA的大鼠纹状体内神经细胞的影响。图4为鹿茸蛋白质提取物对定点注射了6-OHDA的大鼠脑脊液中多巴胺及其代谢产物含量的影响(N＝5，*p<0.5vs.model,**p<0.01vs.model)。其中，A为DA含量的检测；B为HVA含量的检测；C为DOPAC含量的检测。图5为鹿茸蛋白质提取物对定点注射了6-OHDA的大鼠脑脊液中DOPAC/DA和HVA/DA比值的影响(N＝5，*p<0.5vs.model,**p<0.01vs.model)。其中，A为DOPAC/DA比值；B为HVA/DA比值。图6为鹿茸蛋白质提取物对定点注射了6-OHDA的大鼠脑脊液中5-羟色胺类递质的影响(N＝5，*p&l本文档来自技高网...

【技术保护点】
鹿茸提取物的制备方法,包括：1)将鹿茸进行粉碎，得到鹿茸粉碎物；用水浸提所述鹿茸粉碎物，收集水溶性物质得到鹿茸水溶性提取物；2)对所述鹿茸水溶性提取物用水进行透析至pH值为6.5‑8.5，结束透析，得到所述鹿茸提取物。

【技术特征摘要】
1.鹿茸提取物的制备方法,包括：1)将鹿茸进行粉碎，得到鹿茸粉碎物；用水浸提所述鹿茸粉碎物，收集水溶性物质得到鹿茸水溶性提取物；2)对所述鹿茸水溶性提取物用水进行透析至pH值为6.5-8.5，结束透析，得到所述鹿茸提取物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述用水浸提时水的pH值为3-4；所述用水浸提为在2-6℃进行20-26小时。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述透析采用截留分子量为1kDa的半透膜进行。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将结束透析后得到的液体进行浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液进行离心，收集上清液，将所述上清液进行干燥，得到鹿茸提取物干粉的步骤。5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述鹿茸提取物含有蛋白质，所述蛋白质的分子量为10kDa-250kDa；所述鹿茸提取物中含有表1-表27中的157种蛋白质。6.利用权利要求1所述的方法制备的鹿茸提取物。7.鹿茸蛋白质，其特征在于：所述鹿茸蛋白质含有表1-表27中的157种蛋白质。8.一种预防和/或治疗帕金森病的产品，其活性成分为权利要求6所述的鹿茸提取物或权利要求7所述的鹿茸蛋白质。9.活性成分为权利要求6所述的鹿茸提取物或权利要求7所述的鹿茸蛋白质的产品，其特征在于：所述产品具有下述17种功能：1)增加脑组织中的神经元细胞数量；2)增加脑脊液中多巴胺的含量；3)增加脑脊液中二羟苯乙酸的含量；4)增加脑脊液中高香单酸的含量；5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：王毅，孙娅楠，李超华，张倩，马淑骅，欧阳竞锋，
申请(专利权)人：中国中医科学院医学实验中心，
类型：发明
国别省市：北京;11